硨磲肽在制備抗血栓、安神鎮(zhèn)定藥物和保健品的應(yīng)用及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于一種硨磲肽（tachyplesin)在制備抗血栓藥物和保健品的應(yīng)用及其 制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 海洋未被利用的有效面積約為陸地的5-10倍，海洋生物中99%的物種尚未被利 用。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)和化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用，反相高效液相色譜、FAB-MS、2D-NMR、手性色譜等 技術(shù)的發(fā)展，近年來對海洋生物活性肽，特別是生物活性肽的研宄取得了很大進(jìn)展。使得研 宄海洋動物多肽具有了可能。
[0003] 血栓性疾病是一種常見病，常表現(xiàn)為心肌梗死、缺血性腦梗死、靜脈血栓栓塞。每 年每千人1中有1?3人發(fā)生不同形式的血栓性疾病，這是一類嚴(yán)重影響健康的疾病。目 前臨床上治療血栓性疾病的藥物主要分為抗血小板類藥物、抗凝血藥物和溶血栓藥物。
[0004] 抗血小板類藥物具有抑制血小板的粘附、聚集和釋放功能，從而防止血栓形成。抗 血小板藥物可以有效地防止心血管疾病的發(fā)生，并可延長患者的生存期，抗血小板藥物在 臨床應(yīng)用日益廣泛。從天然活性物質(zhì)中尋找新的抗血小板藥物是篩選新型抗血小板聚集藥 物或藥物前體的一個重要策略。
[0005] 硨磲和珊瑚、珍珠、琥珀并列為西方四大有機寶石。在我國古代已被視為一種寶 物，《本草綱目》中記載硨磲有鎮(zhèn)心安神涼血降壓的功效。經(jīng)長期配帶可具不可思議的神奇 力量，如增強免疫力、防止老化、穩(wěn)定心律，改善失眠等藥效。硨磲同時具有極高的藥用價 值：能涼血、降血壓、安神定驚，特別對咽喉腫痛，小孩生皰更有療效。硨磲可護(hù)身健體，延年 益壽，藏傳佛教更視之為驅(qū)魔避邪的神奇寶物。除此之外硨磲還有辟邪保平安、消災(zāi)解厄、 除惡聚靈和改變風(fēng)水的作用。因此硨磲被列為"佛教七寶"之一。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供硨磲肽的新用途：抗血小板聚集，抗血栓，安神定驚的作 用。這種多肽能夠顯著地抑制血小板聚集，防止血栓形成，并且具有安神定驚的作用。
[0007] 本發(fā)明的另一目的是提供一種硨磲肽的制備方法。
[0008] 硨磲肽來源于硨磲肉組織或其細(xì)胞提取物，是含有17-30個氨基酸殘基的多肽。
[0009] MD-03 ：KWCFRVCYRGICYRRCR〇 17 MD-09 ：RSDCYRGKWHHILTGSSR〇 18 MD-19：KWCFCQCARWGGSSSGRK18 MD-25：GNKWRSDDGGSRVVMSSRTL20 MD-33：DCCRRVSRGSGVVRHCYRTLLS22 MD-42：SRLLKPSTGRRCCQTRSTSS20 MD-57：VVSRYGKSGSTKRVHHIQQCTYR23 MD-59：PFSFMGSSRDDCQYSRQTFSSRVVAARV28MD-77：AGGSSCQHEEHSSRVARDDCGSS23 MD-82：CQPFFGSSRVARHIIGNNGSSRVP24 MD-86：QPPVTRNNKMGSRVARDDCGRPPP24 MD-93：AARRYYSRTPILGSRVGSRVGS22 本發(fā)明構(gòu)建了提取純化方法從硨磲肉組織或細(xì)胞中提取硨磲肽，并發(fā)現(xiàn)獲得的硨磲肽 具有顯著的抗血小板聚集，延長出血時間及凝血時間，防止血栓形成的功效，并且具有安神 定驚的作用。經(jīng)檢索發(fā)現(xiàn)，目前暫無文獻(xiàn)報道硨磲肽抗血栓的功能，在國內(nèi)外均未發(fā)現(xiàn)用硨 磲肽作抗血栓藥物或保健品使用的報道。因此，該系列肽的發(fā)現(xiàn)，是申請人的首創(chuàng)。
[0010] 為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是： 硨磲肽在制備抗血小板聚集、抗血栓藥物、安神定驚藥物和保健品中的應(yīng)用，或作為抗 血小板聚集、抗血栓藥物、安神定驚藥物和保健品組分，或利用硨磲肽作為抗血小板聚集、 抗血栓藥物、安神定驚藥物前體改造。
[0011] 硨磲肽的制備方法，其工藝步驟如下： (1) 從硨磲肉組織或其細(xì)胞的裂解產(chǎn)物先用PBS緩沖液清洗，然后用30mmol/LHC1溶 液勻漿制備成粗制液； (2) 將步驟（1)所得粗制液用8000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，收集上清液，將上清液用三 層紗布過濾，用葡聚糖G_50(SephadexG-50) (1. 5cmX90cm)分離，30mmol/LHC1溶液洗脫， 流速1.OmL/分鐘，收集洗脫產(chǎn)物，調(diào)節(jié)溶液至pH6. 0?7. 0,10000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘， 上清液冷凍干燥備用；經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE)，回收小分子 量的條帶，經(jīng)過驗證，獲得了 96個小的多肽，經(jīng)過試驗證實了其中有11個具有較好的生物 學(xué)活性。
[0012] 硨磲肽具有很好的抗血小板聚集，延長出血時間（BT)和凝血時間（CT)的作用，具 有安神定驚的作用。本發(fā)明可以用于涉及利用該成分制備抗血栓和安神定驚的藥物或藥物 組分或藥物前體。
[0013] 硨磲肽用于制備抗血栓藥物和保健品，用于防止血栓造成的心肌梗死、缺血性腦 梗死、靜脈血栓栓塞等， 具體的使用形式 1.可制成粉劑，用生理鹽水溶解口服。
[0014] 2.可制成注射針劑，按注射針劑要求使用。
[0015] 3.可制添加糖飲料，制成口服液產(chǎn)品。
[0016] 用法 1.可單一使用。
[0017] 2.可作為抗血栓藥物或保健品其中一個組份使用。
[0018] 使用的條件 使用條件無特殊要求，可在室溫條件下使用，劑量為：100-400yg/kg/每天，按蛋白多 肽類食品或藥物的條件使，同時參照目前市面的抗血栓藥物和保健品的適用范圍。
【具體實施方式】
[0019] 以下列舉本專利的幾個實施例，但本發(fā)明的內(nèi)容完全不局限于此。
[0020] 實施例1 硨磲的裂解產(chǎn)物制備硨磲肽工藝步驟如下： (1)無菌無熱源器材抽取新鮮硨磲的肉組織或其細(xì)胞組織，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘， 30mmol/LHCl裂解細(xì)胞，并用勻漿器打散粘的細(xì)胞團(tuán)塊，獲得提取粗制液。
[0021] (2)將該粗制液用8000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，收集上清液。
[0022] (3)將上清液用三層紗布過濾，用葡聚糖G-50(S印hadexG-50) (1. 5cmX90cm)分 離，30mmol/LHC1溶液洗脫，流速1.OmL/分鐘，收集洗脫產(chǎn)物，調(diào)節(jié)溶液至pH6. 0?7. 0， 10000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，上清液冷凍干燥備用；經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠 電泳（SDS-PAGE)，回收小分子量的條帶，經(jīng)過驗證，獲得了 96個小的多肽。
[0023] 實施例2 1.硨磲肽對全血血小板聚集的影響 兔血用塑料管收集和用A⑶(86mmol/L朽1檬酸鈉，lllmmol/L葡萄糖，53mmol/L朽1檬 酸）0. 15體積比抗凝，取全血0. 5ml與各個短肽一起孵育5分鐘，然后用凝血酶（500U/L) 或20ymol/L腺苷二磷酸（ADP)處理，用全血血小板聚集儀記錄聚集情況，記錄數(shù)據(jù)，將具 有較好效果的短肽。實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗。
[0024] 表1.硨磲肽對凝血酶誘導(dǎo)的兔全血血小板聚集的影響（n= 4)
【主權(quán)項】
1. 硨磲肽，其序列包含序列表序列1-12所示的任一項序列。
2. 權(quán)利要求1所述的硨磲肽在制備安神鎮(zhèn)定的保健品藥物中的應(yīng)用。
3. 權(quán)利要求1所述的硨磲肽在作為抗血小板聚集、抗血栓藥物的藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明屬于一種硨磲肽在制備抗血栓藥物和保健品的應(yīng)用及其制備方法。硨磲肽可以用于制備抗血小板聚集、抗血栓、鎮(zhèn)定安神的藥物和保健品，能夠顯著地抑制血小板聚集，防止血栓形成，具有很好的抗血小板聚集，延長出血時間(BT)和凝血時間(CT)，并具有鎮(zhèn)定安神的作用。
【IPC分類】C07K14-435, A61K38-17, A61P25-20, A23L1-29, A61P7-02, C07K7-08, A61K38-10
【公開號】CN104592361
【申請?zhí)枴緾N201510060448
【發(fā)明人】馬淑娟
【申請人】馬淑娟
【公開日】2015年5月6日
【申請日】2015年2月5日