一種靈活的單細胞分離器及分離培養(yǎng)技術的制作方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于生物細胞工程領域，更加具體地，涉及一種靈活的單細胞分離器及分尚培養(yǎng)技術。
【背景技術】
[0002]生物研宄中，細胞是最重要的研宄載體和對象，絕大部分的細胞學研宄都需要針對細胞進行功能改造和功能研宄，為了達到研宄的準確性和功能一致性，單克隆細胞是被認為的最有效的細胞形態(tài)，可以最大可能的保證細胞群的一致性和結果的穩(wěn)定可靠性，在基因領域的研宄中單克隆細胞是最常用的研宄工具。
[0003]分離單克隆細胞是生物細胞研宄中的一個必須環(huán)節(jié)，針對基因功能的研宄中，單克隆細胞的分離顯得尤為重要。
[0004]現(xiàn)有的單克隆細胞分離技術主要有流式細胞分選和稀釋，前者主要采用現(xiàn)代流式細胞儀進行自動單細胞分選，但是該分選技術由于加入的一些化學物質(zhì)對細胞造成一些未知的影響，影響分離后的細胞生長，同時，對設備要求比較高，易染菌；稀釋法主要是將細胞懸液進行10倍、100倍、1000倍的稀釋后，再取微量細胞懸液放入培養(yǎng)板中，在顯微鏡下確認是單個細胞后進行培養(yǎng)，該方法具有速度快，成本低，操作簡單的優(yōu)點，但無法定位分離，對于分離出所需的目的細胞還存在困難。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了解決上述現(xiàn)有技術尚存在的問題，本發(fā)明提出了一種靈活的單細胞分離器及分離培養(yǎng)方法。
[0006]一種靈活的單細胞分離器，包括但不限于微吸管，培養(yǎng)瓶旋蓋，皮套，錐形吸頭，所述微吸管包括微吸管細端和微吸管粗端，所述微吸管粗端連接所述錐形吸頭的底部，所述錐形吸頭尖部頂端細長，所述皮套一端固定在所述微吸管粗端，所述皮套另一端與所述培養(yǎng)瓶旋蓋固接，所述微吸管粗端套嵌于所述培養(yǎng)瓶旋蓋中。
[0007]較佳地，所述微吸管粗端連在皮套一端，起到固定和存儲空間的作用。
[0008]較佳地，所述微吸管細端用于細胞或者細胞團的吸取。
[0009]較佳地，所述微吸管細端同時可以在高溫下經(jīng)加熱后，進行拉絲處理，制作出更加微細的細管。
[0010]較佳地，所述微吸管細端直徑小于3毫米。
[0011]較佳地，所述培養(yǎng)瓶旋蓋的直徑可按照細胞培養(yǎng)瓶T25、T75、T175等的瓶口規(guī)格設計，保證所述培養(yǎng)瓶旋蓋能在培養(yǎng)瓶上擰緊。
[0012]較佳地，所述培養(yǎng)瓶旋蓋必須在使用時接到培養(yǎng)瓶口上，保證在以后操作步驟中培養(yǎng)瓶內(nèi)部處于密封和無菌。
[0013]較佳地，所述皮套采用包括但不限于塑料、橡膠等材料制成。
[0014]較佳地，所述皮套具有很好的伸展和拉伸的能力，保證微吸管的前部能移動到培養(yǎng)瓶的大部分位置。
[0015]較佳地，所述錐形吸頭為長錐形結構，所述錐形吸頭底部連著微吸管粗端，所述錐形吸頭尖部頂端細長，可進行極微量液體吸取。
[0016]較佳地，單細胞的挑取可在普通倒置顯微鏡或者熒光顯微鏡下操作。
[0017]較佳地，所述單細胞的挑取分為貼壁細胞和懸浮細胞的挑取，貼壁細胞可以采用物理觸碰，使細胞脫落后吸到微吸管的細端；懸浮細胞的挑取可以直接在顯微鏡下進行，必要時，可進行一定量稀釋后再挑取。
[0018]另外，本發(fā)明還提出了一種單細胞分離培養(yǎng)方法。
[0019]一種單細胞分離培養(yǎng)方法，使用培養(yǎng)過該細胞的舊培養(yǎng)液與新鮮培養(yǎng)液的混合液，來培養(yǎng)分離后的單細胞，達到細胞擴增效果。
[0020]較佳地，所述混合液中舊培養(yǎng)液的比例不少于5%。
[0021]本發(fā)明的基本原理是通過快速簡單的制作微細管，且該微細管的實驗能保證在無菌環(huán)境里使用，來進行單細胞的無菌挑取，達到快速單細胞分離的目的，從而進行單細胞得到培養(yǎng)，得到單克隆細胞株；針對現(xiàn)有分離中存在的設備要求高、無法定位分離、無菌操作要求高的特點，設計的本單細胞分離器，可以從常規(guī)培養(yǎng)瓶中快速的分離到目的細胞，無須將顯微鏡放入操作臺，且可在倒置顯微鏡、熒光顯微鏡下進行準確定點定位單細胞分離，設備只需要常規(guī)的顯微鏡和操作臺即可完成，同時本發(fā)明具有成本低，可重復利用較高的特點，非常方便在實驗室中進行少量目的單細胞進行分離，從而獲得目的細胞株；同時，進行對分離到的細胞進行舊培養(yǎng)液的培養(yǎng)，滿足細胞微環(huán)境與多細胞群處于盡可能一直的狀態(tài)，保障細胞生長增值。
[0022]本發(fā)明的有益效果，一是操作簡單，迅速，條件要求低，設備要求低，成本低廉；二是可進行常規(guī)可視化情況下的操作，主要為倒置顯微鏡和熒光顯微鏡下可視操作；三是分離細胞具有目的性，可在目的細胞占比極低的情況下進行極少數(shù)細胞的單細胞分離；四是具有微量細胞液的轉(zhuǎn)移能力，可進行微量細胞液轉(zhuǎn)移，方便稀釋后有效分離目的細胞?’五是對細胞物理和化學傷害低。
【附圖說明】
[0023]圖1是一種靈活的單細胞分離器的示意圖。
[0024]附圖解釋，1、微吸管細端，2、微吸管粗端，3、培養(yǎng)瓶旋蓋，4、皮套，5、錐形吸頭。
【具體實施方式】
[0025]具體實施例1
[0026]一種靈活的單細胞分離器，包括但不限于微吸管，培養(yǎng)瓶旋蓋(3)，皮套(4)，錐形吸頭(5)，所述微吸管包括微吸管細端(I)和微吸管粗端(2)，所述微吸管粗端(2)連接所述錐形吸頭(5)的底部，所述錐形吸頭(5)尖部頂端細長，所述皮套(4) 一端固定在所述微吸管粗端(2)，所述皮套(4)另一端與所述培養(yǎng)瓶旋蓋(3)固接，所述微吸管粗端(2)套嵌于所述培養(yǎng)瓶旋蓋(3)中，所述微吸管粗端(2)連在皮套(4) 一端，起到固定和存儲空間的作用，所述微吸管細端(I)用于細胞或者細胞團的吸取，所述微吸管細端(I)同時可以在高溫下經(jīng)加熱后，進行拉絲處理，制作出更加微細的細管，所述微吸管細端(I)直徑小于3毫米。所述培養(yǎng)瓶旋蓋(3)的直徑可按照細胞培養(yǎng)瓶T25、T75、T175等的瓶口規(guī)格設計，保證所述培養(yǎng)瓶旋蓋(3)能在培養(yǎng)瓶上擰緊，所述培養(yǎng)瓶旋蓋(3)必須在使用時接到培養(yǎng)瓶口上，保證在以后操作步驟中培養(yǎng)瓶內(nèi)部處于密封和無菌。所述皮套(4)采用塑料等材料制成，所述皮套(4)具有很好的伸展和拉伸的能力，保證微吸管的前部能移動到培養(yǎng)瓶的大部分位置。所述錐形吸頭(5)為長錐形結構，所述錐形吸頭(5)底部連著微吸管粗端(2)，所述錐形吸頭(5)尖部頂端細長，可進行極微量液體吸取。單細胞的挑取可在普通倒置顯微鏡或者熒光顯微鏡下操作。所述單細胞的挑取分為貼壁細胞和懸浮細胞的挑取，貼壁細胞可以采用物理觸碰，使細胞脫落后吸到微吸管的細端；懸浮細胞的挑取可以直接在顯微鏡下進行，必要時，可進行一定量稀釋后再挑取，使用培養(yǎng)過該細胞的舊培養(yǎng)液與新鮮培養(yǎng)液的混合液，來培養(yǎng)分離后的單細胞，達到細胞擴增效果，所述混合液中舊培養(yǎng)液的比例不少于5%。
【主權項】
1.一種靈活的單細胞分離器，其特征在于所述分離器包括但不限于微吸管，培養(yǎng)瓶旋蓋，皮套，錐形吸頭，所述微吸管包括微吸管細端和微吸管粗端，所述微吸管粗端連接所述錐形吸頭的底部，所述錐形吸頭尖部頂端細長，所述皮套一端固定在所述微吸管粗端，所述皮套另一端與所述培養(yǎng)瓶旋蓋固接，所述微吸管粗端套嵌于所述培養(yǎng)瓶旋蓋中。
2.根據(jù)權利要求1所述分離器，其特征在于所述微吸管細端同時可以在高溫下經(jīng)加熱后，進行拉絲處理，制作出更加微細的細管。
3.根據(jù)權利要求1所述分離器，其特征在于所述微吸管細端直徑小于3毫米。
4.根據(jù)權利要求1所述分離器，其特征在于所述皮套采用包括但不限于塑料、橡膠等材料制成。
5.根據(jù)權利要求1所述分離器，其特征在于所述皮套具有很好的伸展和拉伸的能力。
6.根據(jù)權利要求1所述分離器，其特征在于所述錐形吸頭為長錐形結構，所述錐形吸頭底部連著微吸管粗端，所述錐形吸頭尖部頂端細長。
7.—種單細胞分離培養(yǎng)方法，其特征在于所述方法使用培養(yǎng)過該細胞的舊培養(yǎng)液與新鮮培養(yǎng)液的混合液，來培養(yǎng)、擴增分離后的單細胞。
8.根據(jù)權利要求2所述方法，其特征在于所述混合液中舊培養(yǎng)液的比例不少于5%。
【專利摘要】一種靈活的單細胞分離器，包括但不限于微吸管，培養(yǎng)瓶旋蓋，皮套，錐形吸頭，所述微吸管包括微吸管細端和微吸管粗端，所述微吸管粗端連接所述錐形吸頭的底部，所述錐形吸頭尖部頂端細長，所述皮套一端固定在所述微吸管粗端，所述皮套另一端與所述培養(yǎng)瓶旋蓋固接，所述微吸管粗端套嵌于所述培養(yǎng)瓶旋蓋中。另外，本發(fā)明還提出一種單細胞分離培養(yǎng)方法，所述方法使用培養(yǎng)過該細胞的舊培養(yǎng)液與新鮮培養(yǎng)液的混合液，來培養(yǎng)、擴增分離后的單細胞。本發(fā)明的有益效果是，操作簡單，成本低廉；二是可進行常規(guī)可視化情況下的操作；三是分離細胞具有目的性；四是可進行微量細胞液轉(zhuǎn)移，方便稀釋后有效分離目的細胞；五是對細胞物理和化學傷害低。
【IPC分類】C12M1-24
【公開號】CN104593250
【申請?zhí)枴緾N201510017105
【發(fā)明人】易銀沙, 張萬明, 戴燕山, 朱海強, 許澎, 劉彩云, 袁炳秋, 吳小寧
【申請人】長沙贏潤生物技術有限公司
【公開日】2015年5月6日
【申請日】2015年1月6日