一種抗腫瘤肽變體nc12及其應(yīng)用
【專利說明】
[0001] 相關(guān)申請 本申請是專利申請?zhí)枮?01410312285. 2、名稱為"一種抗腫瘤肽變體及其應(yīng)用"的分案 申請。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及抗腫瘤肽變體。
【背景技術(shù)】
[0003]ND100 是由lAla、lGlu、lGly、lLeu、2Pro、IThrUTyr組成的八肽。體外及體內(nèi)試驗 均表明ND100具有明顯的抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用，可用來制備抗腫瘤藥物，用于治療腫 瘤。
[0004] 在現(xiàn)有技術(shù)中，為了提高多肽的活性，針對多肽序列進(jìn)行特異性的改變，從而尋找 活性更高的變體是常規(guī)的做法。為了進(jìn)一步提高該多肽的生物活性，申請人通過大量的實 驗，針對多肽序列進(jìn)行了氨基酸的改變，從而獲得了比原始多肽本身具有更高抑制活性的 變體。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明涉及的多肽，序列如下： NC：AlaGluGlyLeuProProThrTyr； (NCl)：AlaGluGlyLeuProProThrIle； (NC2)：AlaSerGlyLeuProProThrTyr； (NC3)：AlaGluGlyLeuProSerThrTyr； (NC4)：AlaGluGlyGlyLeuProProThrTyr； (NC5)：AlaGluGlyGlyLeuProProProThrTyr； (NC6)：GlyAlaGluGlyLeuProProProThrTyr； (NC7)：AlaGlyGlyLeuProProThrTyr； (NC8)：GlyAlaGlyGlyLeuProProThrTyr； (NC9)：AlaGlyGlyLeuProSerThrTyr； (NC10)：GlyAlaGlyGlyLeuProSerThrTyr； (NC11)：GlyAlaGlyGlyLeuProProProThrTyr； (NC12)：AlaGlyGlyLeuProProProThrTyr； (NC13)：AlaGlyGlyLeuProProProThrIle； 對照I=AlaGluGlyLeuProGlyThrTyr; 對照 2=AlaLeuGlyLeuProProThrTyr; 本發(fā)明的多肽合成后，可以做成游離態(tài)形式，也可以做成陽離子鹽，如：TFA鹽（三氟乙 酸鹽），HCl鹽（鹽酸鹽），醋酸鹽形式。
[0006] 本發(fā)明的多肽，可以選擇和一種或多種藥物載體組合，制成多種藥物劑型，用于治 療。這些藥物劑型涵蓋：注射溶液、片劑、霜劑、膠囊、軟膏、洗劑、舌含片等劑型局部或全身 給藥。
【具體實施方式】
[0007] 實施例1:本發(fā)明多肽的人工化學(xué)合成 本發(fā)明的肽的制備采用液相合成法和活化酯逐個增長法，將本發(fā)明的肽的C端的第二 個氨基酸的氨基用Boc基（叔丁氧羰酰基）保護(hù)，羧基用HOSu(N-羥基琥珀酰亞胺）活化， 然后在KHCCV^液中與C端第一個氨基酸在30°C水浴，反應(yīng)2天。抽去有機(jī)溶劑，在冰浴中 用2mol/LHCl調(diào)pH3?4 (沉淀最多時），用乙酸乙酯抽提，飽和NaCl洗3次，無水似2504干 燥，抽干，無水乙醚研磨，得帶保護(hù)基的二肽。用50 %TFA(三氟醋酸）處理，脫去Boc基，再 與N端帶Boc保護(hù)基，C端用HOSu活化的C端的第三個氨基酸縮合，用同樣的方法逐個接 上氨基酸，最后用催化氫化法脫去Glu側(cè)鏈上的保護(hù)基，用50 %TFA脫去本發(fā)明肽N端的 Boc基，得粗肽，粗肽用HPLC進(jìn)行分離純化，可得98%純度的本發(fā)明的多肽。經(jīng)過電噴霧質(zhì) 譜測定，其序列與目標(biāo)序列完全一致。
[0008] 實施例2 :ND100的抗腫瘤活性 (1)體外活性測定： 采用細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞計數(shù)的方法，人肝癌細(xì)胞7721、胃癌細(xì)胞MKN、肺癌細(xì)胞A549以各 自常規(guī)的培養(yǎng)基，視不同情況加入10%左右的小牛血清，用T-25培養(yǎng)瓶在37°C，5%C02 培養(yǎng)箱中單層培養(yǎng)。
[0009] 當(dāng)細(xì)胞生長成單層后消化，用含1%小牛血清的培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液，按每孔Iml 接種到24孔培養(yǎng)板上，37°C、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h后，加入不同劑量的本申請的多肽， 對照組和實驗組均設(shè)三個重復(fù)孔，對照組加入IOu1的PBS，試驗組加入不同劑量的本申請 的多肽，繼續(xù)培養(yǎng)72小時后，吸出培養(yǎng)液，用PBS洗，然后每孔加入200ill消化液消化，待 細(xì)胞變圓后，加入800iU的PBS，在倒置顯微鏡下用血球計數(shù)板計數(shù)。
【主權(quán)項】
1. 一種抗腫瘤肽，其氨基酸序列為SEQ ID NO :1，13所示。
2. 如權(quán)利要求1所述的腫瘤肽變體在制備抑制腫瘤藥物中的用途。
3. 如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于：所述腫瘤為肝癌、胃癌或肺癌。
4. 一種抗腫瘤藥物制劑，它含有權(quán)利要求2所述的腫瘤肽變體以及藥學(xué)上合適的載 體。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種抗腫瘤活性肽變體，該蛋白變體相對于野生型具有更強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞生長的效果。這些變體蛋白質(zhì)和它們的衍生物可以用于包括肝癌、肺癌、乳腺癌等多種腫瘤的治療。
【IPC分類】C07K7-06, A61K38-08, A61P35-00
【公開號】CN104610428
【申請?zhí)枴緾N201510068976
【發(fā)明人】馬海龍
【申請人】馬海龍
【公開日】2015年5月13日
【申請日】2014年6月27日