一株長雙歧桿菌及其在制備活性雙歧桿菌發(fā)酵飲料中的應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及一株雙歧桿菌及其在制備活性雙歧桿菌發(fā)酵飲料中的應用，特別設及 一株長雙歧桿菌菌株及其發(fā)酵沙棘構杞復合汁活菌飲料的工藝。
【背景技術】
[0002] 乳酸菌飲料，由于其豐富的營養(yǎng)及保健功效，深受消費者喜愛。市售乳酸菌飲料主 要分為活菌型和非活菌型兩大類?；罹褪峭ㄟ^發(fā)酵而成，含大量活菌，經(jīng)科學證明可W對 人體產(chǎn)生有益的生理作用；而非活菌型幾乎沒有保健功效。所W活菌飲料的開發(fā)勢必成為 乳酸菌飲料的研究熱點。
[0003] 目前，國內(nèi)外已開發(fā)的乳酸菌飲料中，所使用的發(fā)酵菌種使用較多的是干酪乳 桿菌（Xactobacillus casei)、嗜酸乳桿菌（Xactobacillus acido地ilus)、植物乳桿菌 (Lactobacillus plantarum)、副干酪乳桿菌（Xactobacillus paracasei)等，有少數(shù)也采 用雙歧桿菌，如動物雙歧桿菌炬ifidobacterium animal)等，還未見長雙歧桿菌活性發(fā)酵 飲料的專利及文獻報道。而雙歧桿菌炬ifodobacterium spp.)是寄生在人和動物腸道內(nèi)的 典型有益乳酸菌，它可W對宿主發(fā)揮生物屏障、營養(yǎng)、免疫、延緩衰老、抗腫瘤等生理作用。 W雙歧桿菌發(fā)酵生產(chǎn)活菌飲料會極大增強其保健功能，提高產(chǎn)品附加值。
[0004] 在已開發(fā)的乳酸菌飲料中，所用的發(fā)酵原料主要有；1)乳制品類，如牛乳、豆乳、 挪乳等；2)果蔬制品類，如胡蘿K蘋果、玉米、南瓜、紅要、西紅柿、小漿果等；3)堅果類，如 花生、核桃等。目前還未見W沙棘構杞復合汁為發(fā)酵原料的雙歧桿菌飲品上市。
[0005] 沙棘學名化ippo地ae rhamnoides Linn)，又名醋柳、墨刺，是胡顏子科沙棘屬植 物沙棘的成熟果實，為藥食同源植物，果實含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)和生物活性物質(zhì)。尤其是果 實中含量豐富的維生素C，對雙歧桿菌的增殖有促進作用。
[0006] 構杞（Gycium barbarum)作為我國傳統(tǒng)的名貴中藥材和重要經(jīng)濟作物，具有多種 生理活性和保健功能。臨床醫(yī)學表明構杞對糖尿病、高血壓、中屯、視網(wǎng)膜炎、視神經(jīng)萎縮、腎 炎和肝炎等有顯著療效，且構杞中的構杞多糖對雙歧桿菌具有促生長作用。
[0007] W雙歧桿菌發(fā)酵沙棘構杞復合汁制成活菌飲料，既可發(fā)揮沙棘、構杞的營養(yǎng)及生 理功效，又可增強雙歧桿菌的保健作用，必將成為高附加值的活菌飲品。

【發(fā)明內(nèi)容】

[000引本發(fā)明的目的是提供一株有優(yōu)良益生特性的長雙歧桿菌及其在制備活性雙歧桿 菌發(fā)酵飲料中的應用。
[0009] 長雙歧桿菌炬ifidobacterium longum)BF-10已于2013年06月21日保藏于中 國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中屯、（簡稱CGMCC，地址為；北京市朝陽區(qū)北辰西 路1號院3號，中國科學院微生物研究所），保藏登記號為；CGMCC施.7789。
[0010] 本發(fā)明提供的長雙歧桿菌CGMCC Nq . 7789,具有耐受消化道逆環(huán)境、生物括抗及 抗氧化等保健功效，可用于制備雙歧桿菌活菌飲料。
[0011] 本發(fā)明還提供一種長雙歧桿菌發(fā)酵沙棘構杞復合汁活菌飲料的制備方法，是將長 雙歧桿菌炬ifidobacterium longum)BF-10活化后接種在含有沙棘構杞汁復合汁、乳粉和 庶糖溶液的復合果汁培養(yǎng)基中，在一定溫度下厭氧培養(yǎng)一定時間后，結束發(fā)酵，獲得雙歧桿 菌發(fā)酵沙棘構杞復合汁活菌飲料。
[0012] 所述方法中，沙棘構杞復合汁發(fā)酵培養(yǎng)基按下述方法制備；取新鮮沙棘和質(zhì)量比 為1 : 1的水混合打漿，用四層紗布過濾，得到質(zhì)量百分數(shù)為50%的沙棘汁；準確稱量構杞 子，按料水質(zhì)量比1 : 10加入=角瓶中，在85°C水浴鍋中浸泡兩個小時后打漿，四層紗布 過濾，得到有效成分質(zhì)量百分數(shù)為10 %的構杞提取物；將上述沙棘汁與構杞提取物按體積 比2 : 1混合，得混合果汁；將庶糖75g溶于lOOmL水中得到庶糖溶液；在1L水中加入lOg 脫脂乳粉，充分攬拌溶解，得脫脂復原乳；按照混合果汁50%，庶糖溶液12%，脫脂復原乳 10%，水28%配制復合果汁培養(yǎng)基；用均質(zhì)機在SMI^a條件下進行第一次均質(zhì)，12MI^a條件下 進行第二次均質(zhì)，并用小蘇打（NgHC〇3)調(diào)節(jié)其抑之6.0左右；最后，在復合果汁發(fā)酵培養(yǎng)基 里充氮，使氧還電位降至-〇.〇3eV W下，并在115°C下，高壓蒸汽滅菌lOmin。
[0013] 所述方法中，雙歧桿菌發(fā)酵沙棘構杞復合汁活菌飲料的發(fā)酵溫度為38-42°C，發(fā)酵 時間為24-2化，起始抑值為6. 0,接種量為1 X 106c化/血。
[0014] 本發(fā)明利用長雙歧桿菌BF-10CGMCC N2 . 7789作為發(fā)酵菌株，同時選擇了營養(yǎng)豐 富且含有可促進雙歧桿菌增殖的生理活性物質(zhì)的沙棘汁和構杞提取物為發(fā)酵原料，并添加 一定量庶糖及脫脂乳，制備了一種雙歧桿菌發(fā)酵沙棘構杞復合汁活菌飲料。復合果汁經(jīng)該 雙歧桿菌菌株發(fā)酵后，活菌數(shù)可達8. 7X l(TCFU/mU同時還可產(chǎn)生己酸，乳酸，B族維生素 等多種具有重要生理活性的代謝產(chǎn)物，使產(chǎn)品形成良好的感官和營養(yǎng)品質(zhì)。成品經(jīng)無菌灌 裝，在4°C條件下可貶藏19天，室溫（22°C)下可貶藏8天。本發(fā)明制備的雙歧桿菌發(fā)酵沙 棘構杞復合汁活菌飲料色澤溫和，口感好，風味佳，活菌數(shù)高，貨架期較長，既可發(fā)揮沙棘、 構杞的營養(yǎng)及生理功效，又可增強雙歧桿菌的保健作用，是具有較多生理功能的保健飲品。
【附圖說明】
[0015] 圖1為本發(fā)明的雙歧桿菌發(fā)酵沙棘構杞復合汁活菌飲料樣品（包裝形式之一）。
[0016] 圖2為不同貶藏溫度下，發(fā)酵飲料中雙歧桿菌活菌數(shù)隨時間的變化情況圖。
【具體實施方式】
[0017] 下述實施例中所述實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0018] 實施例 1、長雙歧桿菌炬ifidobacterium longum)BF-10CGMCC 施.7789 的分離鑒 定
[0019] 1、優(yōu)良雙歧桿菌菌株的篩選
[0020] 為獲得耐消化道逆環(huán)境的優(yōu)良雙歧桿菌菌株，W來源于健康母乳嬰兒糞便及長壽 老人腸道（新疆和田于田縣拉依蘇村）的5株雙歧桿菌為出發(fā)菌株，采用改良MRS液體培 養(yǎng)基，模擬人體胃腸道環(huán)境，對其耐消化道逆環(huán)境特性進行研究。出發(fā)菌株編號及來源見表 1〇
[002U (1)酸耐受性試驗：W抑7. 0的PBS緩沖液為基礎，再用37%的鹽酸將其調(diào)至 p冊.0,121°C X20min滅菌后按5%的接種量接入已活化3代的雙歧桿菌BF-10液體培養(yǎng) 物，37°C厭氧培養(yǎng)，分別于0和化取樣，W亨蓋特厭氧滾管法測定活菌數(shù)，并計算存活率。
[0022] (2)膽汁酸鹽耐受性試驗：將菌種活化3代后的液體培養(yǎng)物按2%接種量接入含牛 膽酸鋼為0. 5 %的改良MRS液體培養(yǎng)基中，37°C厭氧培養(yǎng)1化后取樣測定活菌數(shù)；同時W不 含膽汁酸鹽的改良MRS液體培養(yǎng)基作為對照，測定活菌數(shù)。計算存活率。
[002引所用改良MRS培養(yǎng)基的組成如下（W 1000血計）；葡萄糖20g，牛肉浸粉lOg，蛋 白腺lOg，酵母浸粉5g，玉米膏3g，無水己酸鋼5g，巧樣酸=胺2g，磯酸氨二鐘2g，硫酸鋪 0. 25g，硫酸儀0. 58g，k半脫氨酸鹽酸0. 4g，吐溫-80 1血。
[0024] (3)耐胃蛋白酶試驗；W抑7.0的磯酸緩沖液為基礎，用體積分數(shù)37%的鹽酸將其 分別調(diào)至抑3.0,再加入0.5%胃蛋白酶作為模擬胃液，按5%接種量接入菌種活化3代后的 液體培養(yǎng)物，分別于0和化取樣測定活菌數(shù)并計算存活率。
[002引 （4)耐膜蛋白酶試驗；W l/15mol/血，pH7. 0磯酸緩沖液為基礎，加入lOmg/血膜 蛋白酶作為模擬腸液，按5%的接菌量無菌接入菌液，37°C厭氧條件下作用，分別于化和 1化取樣測定活菌數(shù)，計算存活率。
[0026] 表1五株受試菌株對消化道逆環(huán)境的耐受能力比較
[0027]
【主權項】
1. 長雙歧桿菌（Bifidobacterium longum)BF_10CGMCC Ns .7789。
2. -種生產(chǎn)雙歧桿菌發(fā)酵沙棘枸杞復合汁活菌飲料的方法，是發(fā)酵權利要求1所述的 長雙歧桿菌（Bifidobacterium longum) BF-10CGMCC Ns · 7789,得到的活菌飲料。
3. 根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于：所述發(fā)酵培養(yǎng)基按下述方法制備：取新鮮 沙棘和質(zhì)量比為I : 1的水混合打漿，用四層紗布過濾，得到質(zhì)量百分數(shù)為50%的沙棘汁； 準確稱量枸杞子，按料水質(zhì)量比I : 10加入三角瓶中，在85°C水浴鍋中浸泡兩個小時后打 漿，四層紗布過濾，得到有效成分質(zhì)量百分數(shù)為10 %的枸杞提取物；將沙棘汁與枸杞提取 物按一定體積比混合，得混合果汁；將蔗糖75g溶于IOOmL水中得到蔗糖溶液；在IL水中加 入IOg脫脂乳粉，充分攪拌溶解，得脫脂復原乳；將混合果汁，蔗糖溶液，脫脂復原乳及水按 一定比例混合；用均質(zhì)機在SMPa條件下進行第一次均質(zhì)，12MPa條件下進行第二次均質(zhì)，并 用小蘇打（N-JlCO 3)調(diào)節(jié)其pH之6.0左右，得到復合果汁發(fā)酵培養(yǎng)基；最后，在復合果汁發(fā) 酵培養(yǎng)基里充氮，使氧還電位降至-〇.〇3eV以下，并在115°C下，高壓蒸汽滅菌lOmin。
4. 根據(jù)權利要求3所述方法，其特征在于：發(fā)酵培養(yǎng)基組成為混合果汁50 %，蔗糖溶液 12 %，脫脂復原乳10 %，水28 % ;所述百分含量均為體積百分數(shù)。
5. 根據(jù)權利要求3或4所述方法，其特征在于：所述混合果汁中沙棘汁和枸杞提取物 的復配比為2 : 1。
6. 根據(jù)權利要求2或3或4或5所述方法，其特征在于：所述發(fā)酵溫度為38-42?，發(fā) 酵時間為24-26h，起始pH值為6. 0,接種量為I X 106cfu/mL。
7. 權利要求2-6中任意一項所述的方法制備的雙歧桿菌發(fā)酵沙棘枸杞復合汁活菌飲 料。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一株長雙歧桿菌及其在制備活性雙歧桿菌發(fā)酵飲料的應用。該長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)BF-10，其保藏編號為CGMCC №.7789。長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)BF-10 CGMCC №.7789可用于制備活性雙歧桿菌發(fā)酵飲料。本發(fā)明制備的雙歧桿菌發(fā)酵沙棘枸杞復合活菌飲料色澤溫和，口感好，風味佳，活菌數(shù)高，貨架期長，既可發(fā)揮沙棘、枸杞的營養(yǎng)及生理功效，又可增強雙歧桿菌的保健作用，是具有較多生理功能的保健飲品。CGMCC No.778920130621
【IPC分類】A23C9-12, C12R1-01, C12N1-20
【公開號】CN104630099
【申請?zhí)枴緾N201510023615
【發(fā)明人】劉國榮, 蘇航, 宋振芹, 王成濤
【申請人】北京工商大學
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2015年1月19日