一種提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及微生物病毒領(lǐng)域，更具體地說，設(shè)及一種提高豬流行性腹瀉病毒體外 感染效率的細胞親和劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 豬流行性腹瀉病毒嚴重影響了我國的養(yǎng)豬業(yè)，其感染性強、危害性大，是影響全球 養(yǎng)豬業(yè)的最重要病毒之一，哺乳仔豬感染后死亡率可達100 %，母豬常W帶毒而不表現(xiàn)癥狀 形式出現(xiàn)。豬流行性腹瀉病毒屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬的1群，傳染性胃腸炎，貓冠狀病 毒、犬冠狀病毒與其屬于同一冠狀病毒屬扣t iger等，1995a)。豬流行性腹瀉病毒最初在 20世紀70年代被發(fā)現(xiàn)，首次發(fā)現(xiàn)的病毒經(jīng)分離純化及傳代后的病毒被命名為CV777,至今 很多疫苗生產(chǎn)單位仍然在使用該毒株作為疫苗毒株使用。最近幾年在臨床上爆發(fā)了嚴重的 哺乳仔豬腹瀉，且死亡率極高，因此各研究機構(gòu)都在對引起該疾病的病原進行分析。調(diào)查結(jié) 果顯示，引起哺乳仔豬腹瀉并死亡的主要病原為豬流行性腹瀉病毒，通過對現(xiàn)流行毒株的 基因分析，發(fā)現(xiàn)流行毒株與二十世紀70年代分離到的CV777毒力基因發(fā)生了較大的改變， 所W該也許是用含有原始毒株的疫苗免疫失敗的原因之一。
[0003] 目前，各個研究機構(gòu)對臨床分離的豬流行性腹瀉病毒進行了體外細胞感染，試圖 通過體外培養(yǎng)來使該病毒增殖W期用于目前的豬流行性腹瀉的防控。國內(nèi)外有多篇文獻報 道指出，臨床分離到的豬流行性腹瀉病毒可W用多種細胞進行體外感染，如VERO細胞、BHK 細胞等，但從臨床分離到的流行毒株（野毒株）培養(yǎng)較為困難，在相當長的代次內(nèi)仍然看不 到有明顯的細胞病變產(chǎn)生，從而也無法進行病毒效價評估和工業(yè)化生產(chǎn)，該成為了制約含 有流行毒株疫苗面世的最嚴重困難，所W如何提高病毒對細胞的浸染效率使之適應(yīng)體外規(guī) ?；囵B(yǎng)是該病毒體外培養(yǎng)的難點所在。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于，針對現(xiàn)有技術(shù)的上述豬流行性腹瀉病毒體外感染 效率低的缺陷，提供一種提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑及其制備方 法。
[0005] 本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是；提供一種提高豬流行性腹瀉病毒體 外感染效率的細胞親和劑，由原料混合液制成，所述原料混合液由按照質(zhì)量百分數(shù)計的如 下組分：
[0006] 蘋果酸 0. 1-1%; 草酸 0.12-1.2%; 山梨酸 0.1-1%; 蹲酸 0. 01-0. 1%; 無機鹽 0. 36-3%; 去離子水 余量。
[0007] 本發(fā)明所述的提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑，其中，所述原 料混合液由按照質(zhì)量百分數(shù)計的如下組分：
[000引 蘋果酸 0.5%; 草酸 0.12-1.2%; 山梨酸 0. 1-1%; 蹲酸 0. 01-0. 1%; 無機鹽 0. 36-3%; 去離子水 余量。
[0009] 本發(fā)明所述的提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑，其中，所述原 料混合液由按照質(zhì)量百分數(shù)計的如下組分：
[0010] 蘋果酸 0. 1-1%; 草酸 0.8%; 山梨酸 0.1-1%; 鱗酸 0. 01-0. 1%; 無機鹽 0. 36-3%; 去離子水 余量。
[0011] 本發(fā)明所述的提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑，其中，所述原 料混合液由按照質(zhì)量百分數(shù)計的如下組分：
[0012] 蘋果酸 0. 1-1%; 草酸 0.12-1.2%; 山梨酸 0.5%;
[001 引 鱗酸 0. 01-0. 1%; 無機鹽 0. 36-3%; 去離子水 余量。
[0014] 本發(fā)明所述的提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑，其中，所述原 料混合液由按照質(zhì)量百分數(shù)計的如下組分：
[0015] 蘋果酸 0. 1-1%; 草酸 0.12-1.2%; 山梨酸 0.1-1%; 鱗酸 0. 05%; 無機鹽 0. 36-3%; 去離子水 余量。
[0016] 本發(fā)明所述的提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑，其中，所述無 機鹽由氯化鋼、氯化鐘和磯酸二氨鋼組成，所述氯化鋼占細胞親和劑總重的0. 1-1. 2% ;所 述氯化鐘占細胞親和劑總重的0. 6-6%;所述磯酸二氨鋼占細胞親和劑總重的0. 16-1. 6%。
[0017] 本發(fā)明所述的提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑，其中，所述氯 化鋼占細胞親和劑總重的0. 2-0. 8% ;所述氯化鐘占細胞親和劑總重的2-5% ;所述磯酸二 氨鋼占細胞親和劑總重的0. 25-0. 8%。
[001引本發(fā)明還提供一種提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑的制備方 法，按照上述質(zhì)量百分比稱取適量的蘋果酸、草酸、山梨酸、磯酸、氯化鋼、氯化鐘、磯酸二氨 鋼和去離子水，將上述各組分溶于去離子水中，過濾即得。
[0019] 實施本發(fā)明的提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑，具有W下有益 效果；通過改變豬流行性腹瀉病毒與細胞間的微環(huán)境，增加病毒與細胞接觸親和度，從而增 加病毒對細胞的感染率使之適應(yīng)體外規(guī)?；囵B(yǎng)。
【附圖說明】
[0020] 下面將結(jié)合附圖及實施例對本發(fā)明作進一步說明，附圖中：
[0021] 圖1是原代病毒盲傳5-8代次后細胞的病變情況的倒置顯微鏡圖（未添加細胞親 和劑）；
[0022] 圖2是添加本發(fā)明制備的實施例1的細胞親和劑后盲傳5-8代次后細胞的病變情 況的倒置顯微鏡圖；
[0023] 圖3是添加本發(fā)明制備的實施例2的細胞親和劑后盲傳5-8代次后細胞的病變情 況的倒置顯微鏡圖；
[0024] 圖4是添加本發(fā)明制備的實施例3的細胞親和劑后盲傳5-8代次后細胞的病變情 況的倒置顯微鏡圖；
[0025] 圖5是添加本發(fā)明制備的實施例4的細胞親和劑后盲傳5-8代次后細胞的病變情 況的倒置顯微鏡圖；
[0026] 圖6是添加本發(fā)明制備的實施例5的細胞親和劑后盲傳5-8代次后細胞的病變情 況的倒置顯微鏡圖。
【具體實施方式】
[0027] 下面，結(jié)合附圖W及【具體實施方式】，對本發(fā)明做進一步描述：
[002引本發(fā)明提供一種提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑，由原料混合 液制成，所述原料混合液由按照質(zhì)量百分數(shù)計的如下組分：
[0029] 蘋果酸 0. 1-1%; 草酸 0.12-1.2%; 山梨酸 0.1-1%; 蹲酸 0. 01-0. 1%; 無機鹽 0. 36-3%; 去離子水 余量。
[0030] 本發(fā)明所述的提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑，其中，所述無 機鹽由氯化鋼、氯化鐘和磯酸二氨鋼組成，所述氯化鋼占細胞親和劑總重的0. 1-1. 2% ;所 述氯化鐘占細胞親和劑總重的0. 1-1 %;所述磯酸二氨鋼占細胞親和劑總重的0. 16-0. 8%。
[0031] 優(yōu)選地，所述氯化鋼占細胞親和劑總重的0. 2-0. 8% ;所述氯化鐘占細胞親和劑總 重的0. 3-0. 5% ;所述磯酸二氨鋼占細胞親和劑總重的0. 25-0. 5%。
[0032] 本發(fā)明還提供一種提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑的制備方 法，按照上述質(zhì)量百分比稱取適量的蘋果酸、草酸、山梨酸、磯酸、氯化鋼、氯化鐘、磯酸二氨 鋼和去離子水，將上述各組分溶于去離子水中，過濾即得。
[0033] 本發(fā)明設(shè)及的實驗操作步驟均為本領(lǐng)域常規(guī)的步驟，所用物料可從市場上購得。
[0034] 下面，采用本發(fā)明提供的原料組分制備5個實施例的細胞親和劑，所述實施例的 原料組分質(zhì)量百分比如表1所示。按照下表各實施例的原料組分質(zhì)量百分比稱取適量的蘋 果酸、草酸、山梨酸、磯酸、氯化鋼、氯化鐘、磯酸二氨鋼和去離子水，將上述各原料組分溶于 去離子水中，過濾即得。
[0035] 表1細胞親和劑各組分的質(zhì)量百分比（％ )
[0036]
【主權(quán)項】
1. 一種提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑，其特征在于，由原料混合 液制成，所述原料混合液由按照質(zhì)量百分數(shù)計的如下組分： 蘋果酸 0. 1-1%; 草酸 0.12-1.2%; 山梨酸 0.1-1%; 磷酸 0. 01-0. 1%; 無機鹽 0. 36-3%; 去離子水 余量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑，其特征 在于，所述原料混合液由按照質(zhì)量百分數(shù)計的如下組分： 蘋果酸 0. 5%; 草酸 0.12-1.2%; 山梨酸 0. 1-1。/。； 磷酸 0. 01-0, 1%; 無機鹽 0. 36-3%; 去離子水 余量。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑，其特征 在于，所述原料混合液由按照質(zhì)量百分數(shù)計的如下組分： 蘋果酸 0. 1-1%; 草酸 0. 8%; 山梨酸 0.1-1%; 磷酸 0. 01-0. 1%; 無機Jfe 0.. 36-3%; 去離子水 余量。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑，其特征 在于，所述原料混合液由按照質(zhì)量百分數(shù)計的如下組分： 蘋果酸 0. 1-1%; 草酸 0.12-1.2%; 山梨酸 0.5%; 磷酸 0. 01-0. 1%; 無機鹽 0. 36-3%; 去離子水 余量。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑，其特征 在于，所述原料混合液由按照質(zhì)量百分數(shù)計的如下組分： 蘋果酸 0.1-1%; 草酸 0.12-1.2%; 山梨酸 0.1-1%; 磷酸 0. 05。/。； 無機盆 0, 36-3%, 去離子水 余量。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑， 其特征在于，所述無機鹽由氯化鈉、氯化鉀和磷酸二氫鈉組成，所述氯化鈉占細胞親和劑總 重的0. 1-1. 2% ;所述氯化鉀占細胞親和劑總重的0. 1-1% ;所述磷酸二氫鈉占細胞親和劑 總重的 0. 16-0. 8%。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑，其特 征在于，所述氯化鈉占細胞親和劑總重的0. 2-0. 8 % ;所述氯化鉀占細胞親和劑總重的 0. 3-0. 5% ;所述磷酸二氫鈉占細胞親和劑總重的0. 25-0. 5%。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑的制備 方法，其特征在于，按照上述質(zhì)量百分比稱取適量的蘋果酸、草酸、山梨酸、磷酸、氯化鈉、氯 化鉀、磷酸二氫鈉和去離子水，將上述各組分溶于去離子水中，過濾即得。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提高豬流行性腹瀉病毒體外感染效率的細胞親和劑，由原料混合液制成，所述原料混合液由按照質(zhì)量百分數(shù)計的如下組分：蘋果酸0.1-1％；草酸0.12-1.2％；山梨酸0.1-1％；磷酸0.01-0.1％；無機鹽0.36-3％；去離子水余量。本發(fā)明通過改變豬流行性腹瀉病毒與細胞間的微環(huán)境，增加病毒與細胞接觸親和度，從而增加病毒對細胞的感染率使之適應(yīng)體外規(guī)?；囵B(yǎng)。
【IPC分類】C12R1-93, C12N7-00
【公開號】CN104630156
【申請?zhí)枴緾N201510050716
【發(fā)明人】馮曉聲, 賈愛卿, 王貴平
【申請人】廣東海大畜牧獸醫(yī)研究院有限公司
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2015年1月31日