一種哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制作方法
【專利說明】
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域 本發(fā)明為微生物領(lǐng)域,特別涉及一種哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
[0002]
【背景技術(shù)】 微生物培養(yǎng)(microculture)是生物培養(yǎng)的中的一種。所培養(yǎng)的微生物主要有病毒、細(xì) 菌、放線菌、真菌等。微生物培養(yǎng)需要用到培養(yǎng)基,根據(jù)微生物的不同種類和生活習(xí)性來配 制特定的培養(yǎng)基。微生物培養(yǎng)成功的關(guān)鍵在于無菌操作,如果培養(yǎng)器具和培養(yǎng)基不能徹底 滅菌、培養(yǎng)的過程中有雜菌污染是很容易失敗的。
[0003] 腸球菌(Enterococcus)屬腸球菌屬,是人類和動(dòng)物腸道正常菌群的一部分,通常 在引起腹腔和盆腔感染所分離的混合菌絲中發(fā)現(xiàn),既往認(rèn)為腸球菌是對(duì)人類無害的共棲 菌,但近年研究已證實(shí)了腸球菌的致病力。在需氧革蘭陽性球菌中,它是僅次于葡萄球菌的 重要院內(nèi)感染致病菌,腸球菌亦可引起院外感染。腸球菌不僅可引起尿路感染、皮膚軟組織 感染,還可引起危及生命的腹腔感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎和腦膜炎等。
[0004] 溶血性鏈球菌,需氧或兼性厭氧菌,營養(yǎng)要求較高,普通培養(yǎng)基上生長不良,需補(bǔ) 充血清、血液、腹水,大多數(shù)菌株需核黃素、維生素B6、煙酸等生長因子。最適生長溫度為 37°C,在20-42°C能生長,最適pH為7. 4-7. 6。在血清肉湯中易成長鏈,管底呈絮狀或顆粒 狀沉淀生長。在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、邊緣整齊、直徑0. 5-0. 75mm的細(xì) 小菌落,不同菌株溶血不一。
[0005] 糞腸球菌,根據(jù)最新分類原則,糞鏈球菌又叫糞腸球菌。應(yīng)用C多糖抗原,根據(jù)蘭 氏(Lancefield)血清學(xué)分類,可將鏈球菌分成許多群。糞鏈球菌屬于D群。D群鏈球菌分 腸球菌和非腸球菌兩類。前者包括糞鏈球菌(S.faecalis)、屎鏈球菌(S.faecium)和堅(jiān)忍 鏈球菌(S.durans),后者有牛鏈球菌(S.bovis)和馬腸鏈球菌(S.equinus)。
[0006] 其營養(yǎng)要求低,在普通營養(yǎng)瓊脂上也可生長。能在10°C或45°CpH9. 6或含 6. 5%NaCl肉湯培養(yǎng)基中生長,并能耐65°C30分鐘。它可利用精氨酸為能源,發(fā)酵山梨醇, 不發(fā)酵阿拉伯糖。在簡單的培養(yǎng)基上生長不需葉酸。DNA-DNA雜交結(jié)果顯示,腸球菌與鏈球 菌屬同源程度低,故有學(xué)者建議另立腸球菌屬,與人類有關(guān)者為糞腸球菌(E.faecalis)和 屎腸球菌(E.faecium)。
[0007] 培養(yǎng)基(Medium)是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料, 一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。有的培養(yǎng) 基還含有抗菌素和色素,用于單種微生物培養(yǎng)和鑒定。培養(yǎng)基由于配制的原料不同,使用要 求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細(xì)菌污染或分解變 質(zhì),因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對(duì)一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng) 基),較長時(shí)間的貯存,必須放在:T6°C的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長期保管,現(xiàn)在均改 制成粉末。
[0008] 培養(yǎng)基根據(jù)化學(xué)分類為天然培養(yǎng)基、組合培養(yǎng)基和半組合培養(yǎng)基;根據(jù)物理分類 為液體培養(yǎng)基、固定培養(yǎng)基和脫水培養(yǎng)基;根據(jù)微生物分類為選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0009] 本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足,提供一種哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
[0010] 本發(fā)明運(yùn)用生物化學(xué),微生物學(xué)及無機(jī)、有機(jī)、分析化學(xué)和熒光技術(shù)的原理,對(duì)不 同的碳源、氮源、無機(jī)鹽類、維生素、生長促進(jìn)劑等諸類營養(yǎng)組分的組合進(jìn)行篩選,對(duì)培養(yǎng)基 的pH值、離子強(qiáng)度、氧化-還原電勢(shì)、表面張力、氣體環(huán)境等物化因子進(jìn)行了比較,研究出了 本發(fā)明的培養(yǎng)基。
[0011] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為: 一種哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基,所述培養(yǎng)基的組分包括32.lg/L肉浸液肉湯、 10.Og/L酪蛋白胰酶消化物、4.Og/L心胰酶消化物、1. 2g/L玉米淀粉、4. 5g/L肉胃酶消化 物、4. 5g/L酵母浸出粉、0. 18g/L疊氮化鈉、13.0g/L瓊脂,pH值為7. 1-7. 5。
[0012] 在以上方案的基礎(chǔ)上,所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3. 0g、 氯化鈉5. 0g、胰酪蛋白胨12. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g。
[0013] 酪蛋白胰酶消化物、肉胃酶消化物、心胰酶消化物和酵母浸出粉提供碳氮源、維生 素和氨基酸;淀粉能促進(jìn)奈瑟氏菌的生長和增強(qiáng)鏈球菌的溶血特性;氯化鈉維持均衡的滲 透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。 稱取本品39克,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝,121°C高壓滅菌15分鐘,冷至 45-50°C左右時(shí),加入相當(dāng)于20mg慶大霉素的無菌硫酸慶大霉素,混勻,傾入無菌平皿。
[0014] 本發(fā)明的有益效果: 1、 培養(yǎng)基組方簡單,制備操作方便,成本低,利于推廣應(yīng)用; 2、 菌生長迅速,變異率低; 3、 便于觀察,分析。
[0015]
【具體實(shí)施方式】 實(shí)施例1: 一種哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基,所述培養(yǎng)基的組分包括32.lg/L肉浸液肉湯、 10. 0g/L酪蛋白胰酶消化物、4. 0g/L心胰酶消化物、1. 2g/L玉米淀粉、4. 5g/L肉胃酶消化 物、4. 5g/L酵母浸出粉、0.18g/L疊氮化鈉、13.0g/L瓊脂,pH值為7. 1-7. 5。
[0016] 所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3. 0g、氯化鈉5. 0g、胰酪蛋白 胨12. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g。
[0017] 酪蛋白胰酶消化物、肉胃酶消化物、心胰酶消化物和酵母浸出粉提供碳氮源、維生 素和氨基酸;淀粉能促進(jìn)奈瑟氏菌的生長和增強(qiáng)鏈球菌的溶血特性;氯化鈉維持均衡的滲 透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。 稱取本品39克,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝,121°C高壓滅菌15分鐘,冷至 45-50°C左右時(shí),加入相當(dāng)于20mg慶大霉素的無菌硫酸慶大霉素,混勻,傾入無菌平皿。
[0018]在 30_35°C培養(yǎng) 18-24 小時(shí)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基,其特征在于所述培養(yǎng)基的組分包括32. lg/L肉浸 液肉湯、10. 〇g/L酪蛋白胰酶消化物、4. Og/L心胰酶消化物、I. 2g/L玉米淀粉、4. 5g/L肉 胃酶消化物、4. 5g/L酵母浸出粉、0. 18g/L疊氮化鈉、13. 0 g/L瓊脂,pH值為7. 1-7. 5。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的種哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基,其特征在于所述的肉浸液 肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3. 0g、氯化鈉5. 0g、胰酪蛋白胨12. 0g、磷酸氫二鉀 2. Og0
【專利摘要】本發(fā)明為微生物領(lǐng)域,特別涉及一種哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基,所述培養(yǎng)基的組分包括32.1g/L肉浸液肉湯、10.0g/L酪蛋白胰酶消化物、4.0g/L心胰酶消化物、1.2g/L玉米淀粉、4.5g/L肉胃酶消化物、4.5g/L酵母浸出粉、0.18g/L疊氮化鈉、13.0g/L瓊脂,pH值為7.1-7.5。所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3.0g、氯化鈉5.0g、胰酪蛋白胨12.0g、磷酸氫二鉀2.0g。本發(fā)明培養(yǎng)基組方簡單,制備操作方便,成本低,利于推廣應(yīng)用;菌生長迅速,變異率低;便于觀察,分析。
【IPC分類】C12Q1-04
【公開號(hào)】CN104651453
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201310599780
【發(fā)明人】劉漢斌
【申請(qǐng)人】劉漢斌
【公開日】2015年5月27日
【申請(qǐng)日】2013年11月25日