一種甲苯胺藍(lán)-dna酶瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用
【專利說明】-種甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域 本發(fā)明為微生物領(lǐng)域，特別涉及一種甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用。
[0002]
【背景技術(shù)】 金黃色葡萄球菌，也稱"金葡菌"，細(xì)胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽聚糖的 網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)比革蘭氏陰性菌致密，染色時結(jié)晶紫附著后不被酒精脫色故而呈現(xiàn)紫色，相反，陰 性菌的細(xì)胞壁肽聚糖層薄、交聯(lián)度差，脂類含量高，所以紫色復(fù)合物被酒精沖掉然后附著了 沙黃的紅色。金黃色葡萄球菌與青霉素的發(fā)現(xiàn)有很大的淵源。當(dāng)年弗萊明就是在他的金黃 色葡萄球菌的培養(yǎng)皿中發(fā)現(xiàn)有些球菌被殺死了，于是發(fā)現(xiàn)了青霉素。而研究也表明青霉素 只對以金黃色葡萄球菌為代表的革蘭氏陽性菌作用明顯。這也是由肽聚糖層的厚度和結(jié)構(gòu) 造成的。新出現(xiàn)的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，被稱作超級細(xì)菌，幾乎能抵抗人類所有的藥 物，但是萬古霉素可以對付它。典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0. 8ym左右，顯微鏡下 排列成葡萄串狀。
[0003] 金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性。金黃色葡萄球菌 營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37°C，最適生 長pH7.4,干燥環(huán)境下可存活數(shù)周。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑0.5~1. 0mm。血 平板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在l(Tl5%NaCl肉湯 中生長。可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽性，VP反應(yīng)弱陽性。 許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抵 抗力，對磺胺類藥物、青霉素、紅霉素、土霉素、新霉素等抗生素敏感，但易產(chǎn)生耐藥性，原因 是由于這些菌株產(chǎn)生青霉素酶等。對堿性染料敏感，十萬分之一的龍膽紫液即可抑制生長。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基及其應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明運(yùn)用生物化學(xué)，微生物學(xué)及無機(jī)、有機(jī)、分析化學(xué)和熒光技術(shù)的原理，對不 同的碳源、氮源、無機(jī)鹽類、維生素、生長促進(jìn)劑等諸類營養(yǎng)組分的組合進(jìn)行篩選，對培養(yǎng)基 的pH值、離子強(qiáng)度、氧化-還原電勢、表面張力、氣體環(huán)境等物化因子進(jìn)行了比較，研究出了 本發(fā)明的培養(yǎng)基。
[0006] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為： 一種甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括15. 5g/L7. 5%氯化鈉肉 湯、0.5g/LDNA、1.5g/L氯化鈣、6.3g/L三羥甲基氨基甲烷、0.088g/L甲苯胺藍(lán)，pH值為 8. 9-9. 1 〇
[0007] 在以上方案的基礎(chǔ)上，所述的甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，所述7. 5%氯化鈉肉湯 為每升7. 5%氯化鈉肉湯中含有胰蛋白胨10. 0g、牛肉粉5. 0g、氯化鈉75. 0g、磷酸氫二鉀 2. 0g〇
[0008] 本發(fā)明還公開了所述的甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基的應(yīng)用，用于核糖核酸酶檢 測。
[0009]具有脫氧核糖核酸酶的細(xì)菌分解培養(yǎng)基中的脫氧核糖核酸（DNA)，使DNA長鏈水 解成數(shù)個單核苷酸的寡核苷酸短鏈，使指示劑甲苯胺藍(lán)作用變成粉紅色；氯化鈣提供陽離 子作為激活劑；氯化鈉維持均衡的滲透壓；三羥甲基氨基甲烷為緩沖劑；瓊脂為培養(yǎng)基的 凝固劑。
[0010] 稱取本品27. 58g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，分裝三角瓶。
[0011] 如立即使用可不需滅菌。如不立即使用，121°C高壓滅菌15分鐘。
[0012] 已滅菌的培養(yǎng)基在室溫可存放4個月無變化，并經(jīng)數(shù)次熔化后仍可用。 本發(fā)明的有益效果： 1、 培養(yǎng)基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應(yīng)用； 2、 菌生長迅速，變異率低； 3、 便于觀察，分析。
[0013]
【具體實(shí)施方式】 實(shí)施例1 : 一種甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括15. 5g/L7. 5%氯化鈉肉 湯、0.5g/LDNA、1.5g/L氯化鈣、6.3g/L三羥甲基氨基甲烷、0.088g/L甲苯胺藍(lán)，pH值為 8. 9-9. 1 〇
[0014] 所述的甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，所述7. 5%氯化鈉肉湯為每升7. 5%氯化鈉肉 湯中含有胰蛋白胨10. 〇g、牛肉粉5. 0g、氯化鈉75. 0g、磷酸氫二鉀2. 0g。
[0015] 具有脫氧核糖核酸酶的細(xì)菌分解培養(yǎng)基中的脫氧核糖核酸（DNA)，使DNA長鏈水 解成數(shù)個單核苷酸的寡核苷酸短鏈，使指示劑甲苯胺藍(lán)作用變成粉紅色；氯化鈣提供陽離 子作為激活劑；氯化鈉維持均衡的滲透壓；三羥甲基氨基甲烷為緩沖劑；瓊脂為培養(yǎng)基的 凝固劑。
[0016]稱取本品27. 58g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，分裝三角瓶。
[0017] 如立即使用可不需滅菌。如不立即使用，121°C高壓滅菌15分鐘。
[0018] 已滅菌的培養(yǎng)基在室溫可存放4個月無變化，并經(jīng)數(shù)次熔化后仍可用。 35°C培養(yǎng)4h結(jié)果如下：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基的組分包括15. 5g/L 7. 5%氯化鈉肉湯、0· 5g/L DNA、1. 5g/L氯化鈣、6. 3g/L三羥甲基氨基甲烷、0· 088g/L甲苯胺 藍(lán)，pH 值為 8. 9-9. 1。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，其特征在于所述7. 5%氯化鈉 肉湯為每升7. 5%氯化鈉肉湯中含有胰蛋白胨10.0 g、牛肉粉5. Og、氯化鈉75. Og、磷酸氫二 鉀 2. 0g。
3. -種根據(jù)權(quán)利要求1所述的甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基的應(yīng)用，其特征在于用于核 糖核酸酶檢測。
【專利摘要】本發(fā)明為微生物領(lǐng)域，特別涉及一種甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的組分包括15.5g/L7.5%氯化鈉肉湯、0.5g/LDNA、1.5g/L氯化鈣、6.3g/L三羥甲基氨基甲烷、0.088g/L甲苯胺藍(lán)，pH值為8.9-9.1。所述的甲苯胺藍(lán)-DNA酶瓊脂培養(yǎng)基，所述7.5%氯化鈉肉湯為每升7.5%氯化鈉肉湯中含有胰蛋白胨10.0g、牛肉粉5.0g、氯化鈉75.0g、磷酸氫二鉀2.0g。本發(fā)明培養(yǎng)基組方簡單，制備操作方便，成本低，利于推廣應(yīng)用；菌生長迅速，變異率低；便于觀察，分析。
【IPC分類】C12Q1-14, C12R1-445, C12Q1-44
【公開號】CN104651477
【申請?zhí)枴緾N201310599323
【發(fā)明人】劉漢斌
【申請人】劉漢斌
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2013年11月25日