一株對花生果腐病具有防效的金龜子綠僵菌及其發(fā)酵工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物防治領(lǐng)域，特別涉及金龜子綠僵菌菌株、液固雙向發(fā)酵工藝及發(fā)酵菌劑在防治花生果腐病中的應用。
【背景技術(shù)】
[0002]花生果腐病為一種花生生長中后期發(fā)生的土傳病害，是由侵脈新赤殼菌(.Neocosmosporasp.)侵染花生果而引起花生果腐爛的一種病害，該病害發(fā)病特征如下:
(I)發(fā)生病變的莢果主要是中后期的秕果和飽果；(2)初步發(fā)生時，花生莢果的中果皮和外果皮變?yōu)楹诤稚唿c，內(nèi)果皮及種子正常；(3)發(fā)病嚴重時，莢果的整個果皮和種子變黑、腐爛；(4)根部外表皮發(fā)黑，而地上部分不變或者更綠。2006?2011年，該病害在我國河北、山東、吉林、河南等花生種植區(qū)先后被發(fā)現(xiàn)，爛果率在30?100%，這嚴重損害了當?shù)鼗ㄉN植戶的利益。目前市場上還沒有有效的防治該病害藥物。因此，提供一種能夠有效防治花生果腐病的藥物具有重要現(xiàn)實意義。
[0003]綠僵菌作為當今世界應用最為廣泛的一種昆蟲病原真菌，因?qū)ハx的致病力強、寄主范圍廣，對人、畜、作物無毒害而受到人們的重視。目前，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)金龜子綠僵菌能夠寄生的昆蟲約有200余種，許多國家對它們在生產(chǎn)、應用和安全性等方面都做了大量細致的研究，對有些害蟲已開發(fā)出綠僵菌殺蟲劑，并收到良好防治效果。近年來，科研人員發(fā)現(xiàn)綠僵菌對植物病原菌也有一定的抑制作用，田間試驗表明部分綠僵菌制劑對植物病害具有良好的防治效果。因此，急需一種能夠?qū)崿F(xiàn)持續(xù)控制花生果腐病和地下害蟲，降低花生果農(nóng)藥殘留，實現(xiàn)防病蟲、保果、增產(chǎn)作用的綠僵菌生物制劑。目前還未見綠僵菌對花生果腐病有防治作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]有鑒于此，本發(fā)明提供一株金龜子綠僵菌菌株及其在防治花生果腐病中的應用。該金龜子綠僵菌的保藏編號為CGMCC N0.8385。該金龜子綠僵菌菌株能夠持續(xù)控制花生果腐病，降低花生果農(nóng)藥殘留，實現(xiàn)防病、保果、增產(chǎn)。
[0005]為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案:
本發(fā)明提供了一株金龜子綠僵菌，其保藏編號為CGMCC N0.8385。
[0006]該菌株ITS在GenBank序列登記號為KF913494。
[0007]本發(fā)明的金龜子綠僵菌，菌落絨毛狀或棉絮狀，最初白色，產(chǎn)生孢子時呈綠色；菌絲具分隔和分枝，透明，直徑1.5?2.0 μ m ;分生孢子梗很難與菌絲區(qū)別，直徑約2.0 μ m，其末端產(chǎn)生瓶形小梗，(8.0?16.0 μ m)* (1.5?2.2) μ m,從瓶梗的末端以向基式連續(xù)形成長串鏈的分生孢子；在同一小梗上，第一層分生孢子后面形成第二層、第三層分生孢子，呈現(xiàn)一系列念珠狀排列的孢子；分生孢子為單細胞，長橢圓形，兩端鈍截形或鈍圓，大小變化很大，(5.0?7.0) μπι* (2.0?3.0) μ m，單個存在時色亮，成堆時呈橄欖綠色，脫落的孢子常聚成菱形孢子團塊或殼狀結(jié)構(gòu)；平皿對峙實驗表明該菌對花生果腐病菌具有明顯的抑制作用。
[0008]本發(fā)明還提供了保藏編號為CGMCC N0.8385的金龜子綠僵菌在制備抑制花生果腐病菌藥物中的應用。
[0009]本發(fā)明還提供了一種菌劑，其包括保藏編號為CGMCC N0.8385的金龜子綠僵菌及菌劑中可接受的佐劑。
[0010]作為優(yōu)選，所述金龜子綠僵菌的含量彡18孢子/克。
[0011]本發(fā)明還提供了上述菌劑的液固雙向發(fā)酵工藝，包括如下步驟:
步驟1:挑取保藏編號為CGMCC N0.8385的金龜子綠僵菌接種于PPDA固體培養(yǎng)基上，于24?30°C培養(yǎng)9?12d，刮取孢子置于研磨器中，用0.05%吐溫-80無菌水配制成濃度為I?5X 18個/mL的孢子懸液，得第一培養(yǎng)物；
步驟2:吸取2?4mL第一培養(yǎng)物，置于SDAY改良液體培養(yǎng)基中，于25?30°C、160?200 rpm培養(yǎng)70?75h，得第二培養(yǎng)物；
步驟3:將14?16mL第二培養(yǎng)物做為固態(tài)發(fā)酵的種子液轉(zhuǎn)接至80?100克/袋的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，混勻后于25?30°C培養(yǎng)6?9 d后即得。所述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基包括:麥殼I?3重量份,麥麩6?10重量份,水87?93重量份。
[0012]作為優(yōu)選,上述菌劑的施用量為I?10萬億孢子/畝。
[0013]本發(fā)明提供一株金龜子綠僵菌菌株及其在防治花生果腐病中的應用。該金龜子綠僵菌的保藏編號為CGMCC N0.8385。包含保藏編號為CGMCC N0.8385的金龜子綠僵菌的菌劑按I?10萬億孢子/畝穴施于花生，田間防病試驗表明對花生果腐病的防治效果60%以上，增產(chǎn)5?12%，實現(xiàn)了在控制病害的同時，達到保果，增產(chǎn)的目的。本發(fā)明涉及的金龜子綠僵菌能對花生果腐病有良好的防治效果；其次，該菌株還具有促生增產(chǎn)作用；同時，該菌劑無毒無致病性，對人畜安全，不污染環(huán)境，生產(chǎn)成本低。
【主權(quán)項】
1.一株金龜子綠僵菌，其特征在于，其保藏編號為CGMCC N0.8385。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金龜子綠僵菌在制備抑制花生果腐病菌中的應用。
3.一種菌劑，其特征在于，其包括保藏編號為CGMCC N0.8385的金龜子綠僵菌及菌劑中可接受的佐劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述菌劑，其特征在于，所述金龜子綠僵菌的含量>18孢子/克。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述菌劑的液固雙向發(fā)酵工藝，其特征在于:包括如下步驟: 步驟1:挑取保藏編號為CGMCC N0.8385的金龜子綠僵菌接種于PPDA固體培養(yǎng)基上，于24?30°C培養(yǎng)9?12d，刮取孢子置于研磨器中，用0.05%吐溫-80無菌水配制成濃度為I?5X 18個/mL的孢子懸液，得第一培養(yǎng)物； 步驟2:吸取2?4mL第一培養(yǎng)物，置于SDAY改良液體培養(yǎng)基中，于25?30°C、160?200 rpm培養(yǎng)70?75h，得第二培養(yǎng)物； 步驟3:將14?16mL第二培養(yǎng)物做為固態(tài)發(fā)酵的種子液轉(zhuǎn)接至80?100克/袋的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，混勻后于25?30°C培養(yǎng)6?9 d后即得。
6.所述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基包括:麥殼I?3重量份,麥麩6?10重量份,水87?93重量份。
7.根據(jù)權(quán)利要求3、4或5任一項所述菌劑，其特征在于，其施用量為I?10萬億孢子/畝。
【專利摘要】本發(fā)明涉及微生物防治領(lǐng)域，特別涉及金龜子綠僵菌菌株、液固雙相發(fā)酵工藝及發(fā)酵菌劑在防治花生果腐病中的應用。包含保藏編號為CGMCCNo.8385的金龜子綠僵菌菌劑1～10萬億孢子/畝穴施于花生，田間防病試驗表明對花生果腐病的防治效果為60%以上，增產(chǎn)5～12%，實現(xiàn)了在控制病害的同時，達到保果增產(chǎn)的目的。本發(fā)明涉及的金龜子綠僵菌對花生果腐病有良好的防治效果；其次，該菌株還具有促生增產(chǎn)作用；同時，該菌劑的孢子含量高、用量少，且無毒無致病性，對人畜安全，不污染環(huán)境，生產(chǎn)成本低。CGMCC No838520131025
【IPC分類】A01P3-00, C12N1-14, C12R1-645, A01N63-04
【公開號】CN104694395
【申請?zhí)枴緾N201310657681
【發(fā)明人】郭巍, 李瑞軍, 陸秀君, 于浩海, 孫偉明, 趙丹, 徐大慶, 康占海, 王偉
【申請人】河北農(nóng)業(yè)大學
【公開日】2015年6月10日
【申請日】2013年12月9日