一種辛弗林對映體的分離方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于對映體分離技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及采用高效液相色譜手性流動相添加劑技術(shù)分離辛弗林對映體的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]辛弗林(Sym5Phrine)化學(xué)名1-(4_羥基苯基)_2_ (甲基氨基)乙醇，是腎上腺素α-受體興奮劑，有收縮血管、升高血壓、擴(kuò)張氣管和支氣管的作用，臨床用于支氣管哮喘及手術(shù)和麻醉時低血壓、虛脫及休克、體位性低血壓等病的治療；辛弗林還具有以下作用:提高新陳代謝、增加熱量消耗、提高能量水平、氧化脂肪、減肥，所以，辛弗林也作為減肥藥物中的有效成分，因此，辛弗林廣泛用于醫(yī)藥、保健食品中。其結(jié)構(gòu)式有一個手性中心，目前，該藥仍然以消旋體形式應(yīng)用，而其中L-辛弗林是該藥的有效對映體，D-辛弗林是無效對映體，對人體會產(chǎn)生代謝負(fù)擔(dān)，也可能產(chǎn)生毒副作用。
[0003]傳統(tǒng)的制藥方法是從植物中提取藥物，天然的辛弗林可以從植物中提取，比如:蕓香料植物酸橙(citrus aurantium)的干燥幼果，吳茱萸(Evodia rutaecarpa)，仙人掌科植物仙人球(coryphantha rami I 1sa Cutak)全草等，目前，化學(xué)合成方法是制藥領(lǐng)域的主要發(fā)展方向，化學(xué)合成法是獲得藥物是主要來源，藥物產(chǎn)量高、純度高，傳統(tǒng)的制藥方式正逐漸被合成藥物所取代。辛弗林可化學(xué)合成，化學(xué)合成法得到的是其外消旋體。
[0004]辛弗林有效對映體L-辛弗林在植物中的含量很低，最高含量為0.2%?0.4%，因此，如果直接從植物中提出單一對映體難度大、消耗大、工藝復(fù)雜；而合成的辛弗林為外消旋體，如何便捷、快速、經(jīng)濟(jì)、高效地對其進(jìn)行分離是本領(lǐng)域的關(guān)健。
[0005]現(xiàn)有的分離方法，如2009年4月8日的公開號為CN101402577的“從個青皮中提取分離左旋-辛弗林的方法”專利，生產(chǎn)的安全性差，不利于規(guī)模生產(chǎn)。如2010年8月4日的公開號為101792394A的“一種萃取分離L-辛弗林的方法”專利，該方法所用儀器設(shè)備較多，操作繁鎖，消耗時間長。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的之一在于提供一種辛弗林對映體的拆分方法，本發(fā)明使用常規(guī)色譜柱、常用添加劑，短時間內(nèi)在高效液相色譜儀上即能實(shí)現(xiàn)辛弗林的分離。添加劑羧甲基-β -環(huán)糊精是一種低聚糖，由七個葡萄糖單元相連構(gòu)成“錐筒”形，其環(huán)狀分子中含有特殊空腔，內(nèi)腔具有疏水性，外腔因羥基而具有親水性，其大分子上含有許多手性中心，能選擇性的與對映體作用，對映體分子的體積正好與空腔大小適合，緊密裝入空腔，與其形成穩(wěn)定性不同的、可逆的包合物，通過高效液相色譜儀的固定相時，因保留時間不同達(dá)到分離目的；辛弗林對映體有一個手性中心和一個苯環(huán)結(jié)構(gòu)能順利進(jìn)入羧甲基-環(huán)糊精空腔內(nèi)形成包合物，本發(fā)明利用它們的這種特性，將辛弗林樣品溶解，將羧甲基-β_環(huán)糊精添加到流動相中，辛弗林進(jìn)入羧甲基-β -環(huán)糊精的疏水空腔內(nèi)發(fā)生包合作用，其極性部分與羧甲基-環(huán)糊精邊緣的羥基發(fā)生極性作用；其氨基也可以與羧甲基產(chǎn)生靜電作用，幾種作用共同的影響，形成色譜行為差異較大的、穩(wěn)定性不同的非對映體包合物，通過高效液相色譜儀實(shí)現(xiàn)辛弗林對映體分離。
[0007]一種辛弗林對映體的分離方法，包含以下步驟:
[0008]樣品溶液的配制:取原料藥鹽酸辛弗林，加超純水溶解配制溶液，以針筒式濾膜過濾，再超聲脫氣；
[0009]流動相的配制:取羧甲基環(huán)糊精溶于超純水中，加入三乙胺和冰乙酸調(diào)節(jié)pH值為4.0?4.4，然后分別加入甲醇和乙腈，溶液經(jīng)微孔濾膜過濾，超聲脫氣；
[0010]色譜分離:紫外檢測波長為202nm，流動相流速為0.1?0.4ml/min，用平頭進(jìn)樣器進(jìn)樣。
[0011]所述超純水為電導(dǎo)率值:0?30ys/cm，電阻值〈18.3ΜΩ/cm，孔徑:0.001?0.0001 μ mD
[0012]所述針筒式濾膜為0.45 μm針筒式濾膜，所述超聲脫氣的時間為30分鐘。
[0013]本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明使用常規(guī)色譜柱、常用添加劑，短時間內(nèi)在高效液相色譜儀上，即能實(shí)現(xiàn)辛弗林的分離，具有高效、快速、經(jīng)濟(jì)、操作簡便等特點(diǎn)。為手性藥物對映體的進(jìn)一步研宄提供了一種具有指導(dǎo)意義的方法，可廣泛應(yīng)用于制藥行業(yè)對藥物對映體進(jìn)行分離分析的研宄中。
【附圖說明】
[0014]圖1所示為pH = 4.4、流速為0.3ml/min時鹽酸辛弗林拆分效果圖。
[0015]圖2所示為pH = 4.2、流速為0.2ml/min時鹽酸辛弗林拆分效果圖。
[0016]圖3所示為pH = 4.0、流速為0.lml/min時鹽酸辛弗林拆分效果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0017]下文將結(jié)合具體實(shí)施例詳細(xì)描述本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)注意的是，下述實(shí)施例中描述的技術(shù)特征或者技術(shù)特征的組合不應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為是孤立的，它們可以被相互組合從而達(dá)到更好的技術(shù)效果。
[0018]實(shí)施例1
[0019]1、樣品溶液的配制:
[0020]準(zhǔn)確稱取0.0050g原料藥鹽酸辛弗林，加超純水溶解后轉(zhuǎn)入1ml容量瓶中并定容至刻度，使用前以0.45 μ m針筒式濾膜過濾，超聲脫氣30min。
[0021]2、紫外波長的確定:
[0022]稱取0.0OlOg的鹽酸辛弗林分別用超純水、甲醇-水(80:20)、乙腈-水(70:30)作為溶劑溶解至1ml比色管中。以相應(yīng)溶劑作為參比溶液，通過紫外分光光度計(jì)進(jìn)行波長掃描，再通過高效液相色譜的紫外檢測器檢驗(yàn)，最終確定最佳分析波長為202nm。
[0023]3、流動相的配制
[0024]準(zhǔn)確稱取0.06g幾甲基_β _環(huán)糊精溶于15ml超純水中，加入二乙胺和冰乙酸調(diào)節(jié)PH值，用酸度計(jì)測量其pH值為4.4，然后分別加入15ml甲醇和70ml乙腈，溶液經(jīng)0.45 μ m微孔濾膜過濾，超聲脫氣20min備用。
[0025]4、色譜分離實(shí)驗(yàn)
[0026]選用Hypersil ODS柱(4.6mmX 200mm, 5 μ m)作為本發(fā)明所用色譜柱，確定高效液相色譜儀紫外檢測波長為202nm，流動相為步驟3中所制得體積比為15:70:15的甲醇-乙腈-水(含0.6g/L羧甲基-β -環(huán)糊精)10ml溶液，調(diào)節(jié)流動相流速為0.3ml/min，用平頭進(jìn)樣器抽取步驟2中配制的5%辛弗林2μ I進(jìn)樣，在此操作條件下，辛弗林對映體基線分離，見圖1，圖1所示為pH = 4.4、流速為0.3ml/min時鹽酸辛弗林拆分效果圖。
[0027]實(shí)施例2
[0028]1、樣品溶液的配制:
[0029]準(zhǔn)確稱取0.0050g原料藥鹽酸辛弗林，加超純水溶解后轉(zhuǎn)入1ml容量瓶中并定容至刻度，使用前以0.45 μ m針筒式濾膜過濾，超聲脫氣30min。
[0030]2、紫外波長的確定:
[0031]稱取0.0OlOg的鹽酸辛弗林分別用超純水、甲醇-水(80:20)、乙腈-水(70:30)作為溶劑溶解至1ml比色管中。以相應(yīng)溶劑作為參比溶液，通過紫外分光光度計(jì)進(jìn)行波長掃描，再通過高效液相色譜的紫外檢測器檢驗(yàn)，最終確定最佳分析波長為202nm。
[0032]3、流動相的配制
[0033]準(zhǔn)確稱取0.06g羧甲基-β -環(huán)糊精溶于15ml超純水中，加入三乙胺和冰乙酸調(diào)節(jié)PH值，用酸度計(jì)測量其pH = 4.2，然后分別加入15ml甲醇和70ml乙腈，溶液經(jīng)0.45 μ m微孔濾膜過濾，超聲脫氣20min備用。
[0034]4、色譜分離實(shí)驗(yàn)
[0035]選用Hypersil ODS柱(4.6mmX 200mm, 5 μ m)作為本發(fā)明所用色譜柱，確定高效液相色譜儀紫外檢測波長為202nm，流動相為步驟3中所制得體積比為15:70:15的甲醇-乙腈-水(含0.6g/L羧甲基-β -環(huán)糊精)10ml溶液，調(diào)節(jié)流動相流速為0.2ml/min，用平頭進(jìn)樣器抽取步驟2中配制的5%辛弗林2μ I進(jìn)樣，在此操作條件下，辛弗林對映體基線分離，見圖2，圖2所示為pH = 4.2、流速為0.2ml/min時鹽酸辛弗林拆分效果圖。
[0036]實(shí)施例3
[0037]1、樣品溶液的配制:
[0038]準(zhǔn)確稱取0.0050g原料藥鹽酸辛弗林，加超純水溶解后轉(zhuǎn)入1ml容量瓶中并定容至刻度，使用前以0.45 μ m針筒式濾膜過濾，超聲脫氣30min。
[0039]2、紫外波長的確定:
[0040]稱取0.0OlOg的鹽酸辛弗林分別用超純水、甲醇-水(80:20)、乙腈-水(70:30)作為溶劑溶解至1ml比色管中。以相應(yīng)溶劑作為參比溶液，通過紫外分光光度計(jì)進(jìn)行波長掃描，再通過高效液相色譜的紫外檢測器檢驗(yàn)，最終確定最佳分析波長為202nm。
[0041]3、流動相的配制
[0042]準(zhǔn)確稱取0.06g幾甲基_ β _環(huán)糊精溶于15ml超純水中，加入二乙胺和冰乙酸調(diào)節(jié)pH值，用酸度計(jì)測量pH = 4.0，然后分別加入15ml甲醇和70ml乙腈，溶液經(jīng)0.45 ym微孔濾膜過濾，超聲脫氣20min備用。
[0043]4、色譜分離實(shí)驗(yàn)
[0044]選用Hypersil ODS柱(4.6mmX 200mm，5 μ m)作為本發(fā)明所用色譜柱，確定高效液相色譜儀紫外檢測波長為202nm，流動相為步驟3中所制得體積比為15:70:15的甲醇-乙腈-水(含0.6g/L羧甲基-β -環(huán)糊精)10ml溶液，調(diào)節(jié)流動相流速為0.lml/min，用平頭進(jìn)樣器抽取步驟2中配制的5%辛弗林2μ I進(jìn)樣，在此操作條件下，辛弗林對映體基線分離，見圖3，圖3所示為pH = 4.0、流速為0.lml/min時鹽酸辛弗林拆分效果圖。
[0045]本文雖然已經(jīng)給出了本發(fā)明的一些實(shí)施例，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，在不脫離本發(fā)明精神的情況下，可以對本文的實(shí)施例進(jìn)行改變。上述實(shí)施例只是示例性的，不應(yīng)以本文的實(shí)施例作為本發(fā)明權(quán)利范圍的限定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種辛弗林對映體的分離方法，其特征在于，包含以下步驟: 樣品溶液的配制:取原料藥鹽酸辛弗林，加超純水溶解配制溶液，以針筒式濾膜過濾，再超聲脫氣； 流動相的配制:取羧甲基-β-環(huán)糊精溶于超純水中，加入三乙胺和冰乙酸調(diào)節(jié)pH值為.4.0?4.4，然后分別加入甲醇和乙腈，溶液經(jīng)微孔濾膜過濾，超聲脫氣； 色譜分離:紫外檢測波長為202nm，流動相流速為0.1?0.4ml/min，用平頭進(jìn)樣器進(jìn)樣。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的辛弗林對映體的分離方法，其特征在于，所述超純水為電導(dǎo)率值在O?30 μ s/cm之間，電阻值小于18.3ΜΩ /cm，孔徑在0.001?0.0001 μ m之間。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的辛弗林對映體的分離方法，其特征在于，所述針筒式濾膜為.0.45 μ m針筒式濾膜，所述超聲脫氣的時間為30分鐘。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高效液相色譜分離辛弗林藥物對映體的方法。本發(fā)明以化工原料藥鹽酸辛弗林為實(shí)驗(yàn)材料，利用其與環(huán)糊精類添加劑形成穩(wěn)定性不同的非對映體包合物，經(jīng)高效液相色譜儀固定相后保留時間不同而實(shí)現(xiàn)了辛弗林對映體的分離。本發(fā)明使用普通的色譜柱，而且色譜柱可以反復(fù)使用；所用添加劑羧甲基-β-環(huán)糊精易溶于水、無毒、用量少、不堵塞色譜柱；鹽酸辛弗林樣品用量少，經(jīng)過色譜柱后不被破壞，損耗??；所用流動相為亦可回收利用；因此，本發(fā)明具有經(jīng)濟(jì)、高效、快速、操作簡便等特點(diǎn)，為手性藥物對映體的進(jìn)一步研究提供了一種具有指導(dǎo)意義的方法，可廣泛應(yīng)用于制藥行業(yè)對藥物對映體的進(jìn)行分離分析的研究中。
【IPC分類】C07C215-60, C07C213-10
【公開號】CN104710318
【申請?zhí)枴緾N201510061061
【發(fā)明人】翟明翚, 齊海燕, 王穎, 蘇立強(qiáng), 張曉紅, 祖廣權(quán)
【申請人】齊齊哈爾大學(xué)
【公開日】2015年6月17日
【申請日】2015年2月6日