利用綠色木霉制備黃芪甲苷的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種以中藥黃芪為原料利用綠色木霉轉(zhuǎn)化制備黃 芪甲苷的新方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 黃芪性甘，微溫，是扶正固本的常用中藥。中國(guó)藥典規(guī)定，中藥黃芪為豆 科植物膜莢黃苗Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge和蒙古黃苗Astragalus membranaceus(Fisch. )Bge.Var.mongholicus(Bge.)Hsiao的干燥根。它的別名有綿苗、綿 黃芪?，F(xiàn)代研宄發(fā)現(xiàn)黃芪根包含多種要用成分。其中蒙古黃芪的根中含有黃芪甲苷、異鼠李 素、槲皮素、0 _谷留醇、鼠李果素、亞油酸及亞麻酸等；膜莢黃芪根中含有黃芪甲苷、甜菜 堿、膽堿、蔗糖、氨基酸、葡萄糖醛酸及微量的葉酸。黃芪皂苷種類(lèi)非常多，能夠從黃芪根中 分離鑒定出來(lái)的就有數(shù)十種，黃苗甲苷（AstragalosidelV，AST)是主要有效成分之一。它 具有加強(qiáng)免疫力，增加能量，抵抗疲勞，保護(hù)肝臟，清除體內(nèi)自由基和抑制破骨細(xì)胞的作用， 具有很高的藥用價(jià)值。
[0003] 目前黃芪甲苷的制備方法主要為天然產(chǎn)物提取，申請(qǐng)?zhí)枮?00410014786. 9的中 國(guó)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)了利用中藥黃芪粉末為原料制備黃芪甲苷的方法，主要步驟為乙醇回 流、乙酸乙酯萃取、甲醇重結(jié)晶，傳統(tǒng)方法主要以醇類(lèi)溶劑提取，有效成分損失嚴(yán)重。申請(qǐng)?zhí)?為2009100681. 7的中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)了一種利用罐組逆流式提取技術(shù)、離心機(jī)高速 離心及微濾、納濾技術(shù)生產(chǎn)黃芪甲苷的方法，該方法不耗用有機(jī)溶劑，易于大規(guī)模生產(chǎn)但是 設(shè)備成本高得到的產(chǎn)品純度較低。申請(qǐng)?zhí)枮?01010615265. 4的中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)了 一種利用微生物轉(zhuǎn)化黃芪總皂苷制備黃芪甲苷的方法，該方法無(wú)污染，專(zhuān)一性強(qiáng)但是原料 為黃芪總皂苷需要提前制得。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于克服原料成本高，黃芪甲苷產(chǎn)率低，工藝復(fù)雜污染嚴(yán)重等缺點(diǎn)， 直接采用中藥黃芪為原料，利用綠色木霉進(jìn)行微生物轉(zhuǎn)化后經(jīng)過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，硅膠柱層 析及甲醇重結(jié)晶等方法純化最終得到純度98%以上的黃芪甲苷。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 利用綠色木霉制備黃芪甲苷的方法，以中藥黃芪為原料，依次包括如下步驟： A. 中藥黃芪利用綠色木霉進(jìn)行發(fā)酵 綠色木霉凍干粉活化后制成試管斜面保藏，取綠色木霉試管斜面加無(wú)菌水制成孢子懸 浮液，接種于液體培養(yǎng)基的溫度26°C，搖床轉(zhuǎn)速為120r/min培養(yǎng)48h得到種子液；取種子 液加入到發(fā)酵培養(yǎng)基中溫度26°C，搖床轉(zhuǎn)速為120r/min培養(yǎng)120h得到發(fā)酵液； B. 發(fā)酵液中黃芪甲苷的分離提取 上述發(fā)酵液混合后濃縮過(guò)濾得到上樣液，經(jīng)HPD100樹(shù)脂柱分離，洗脫雜質(zhì)后洗脫得 到產(chǎn)品經(jīng)正丁醇萃取得到得到產(chǎn)品純度在10%以上；硅膠柱層析純化用洗脫劑氯仿-甲 醇-水體積比13:8:2的下層溶液進(jìn)行洗脫。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是：步驟A中發(fā)酵培養(yǎng)基配方為10g/L黃芪粉 末 5g/L酵母粉，（NH4) 2S042. 8g/L，KH2P044g/L，MgS04 ? 7H20 0? 9g/L，無(wú)水CaCl20. 9g/L，吐溫 801ml/L，調(diào)節(jié)pH為 5. 0。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及利用綠色木霉制備黃芪甲苷的方法。本發(fā)明的方法利用綠色木霉進(jìn)行對(duì)中藥黃芪進(jìn)行微生物轉(zhuǎn)化，在一定發(fā)酵培養(yǎng)條件下實(shí)現(xiàn)有效成分黃芪甲苷的富集。然后將生物法得到的黃芪甲苷粗提物，利用大孔吸附樹(shù)脂HPD100進(jìn)行分離純化，進(jìn)一步利用硅膠柱層析及甲醇重結(jié)晶等方法純化最終得到純度98％以上的黃芪甲苷。本方法的目的在于克服原料成本高，黃芪甲苷產(chǎn)率低，工藝復(fù)雜污染嚴(yán)重等缺點(diǎn)，適合大規(guī)模生產(chǎn)不同純度的黃芪甲苷。
【IPC分類(lèi)】C12R1-885, C12P33-20
【公開(kāi)號(hào)】CN104711312
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510112855
【發(fā)明人】袁其朋, 王立媛
【申請(qǐng)人】北京化工大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年6月17日
【申請(qǐng)日】2015年3月15日