吖啶酯衍生物及其合成方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及吖啶酯衍生物，尤其涉及一種化學(xué)發(fā)光吖啶酯衍生物及其合成方法， 本發(fā)明還涉及該吖啶酯衍生物作為化學(xué)發(fā)光物質(zhì)在免疫檢測(cè)中的應(yīng)用，屬于化學(xué)發(fā)光底物 吖啶酯衍生物領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 化學(xué)發(fā)光免疫分析（ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)是將化學(xué)發(fā)光或生 物發(fā)光體系與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于檢測(cè)微量抗原或抗體的一種新型標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)。 其檢測(cè)免疫反應(yīng)原理與放射免疫（RIA)和酶免疫（EIA)相同，不同之處是以發(fā)光物質(zhì)代替 顯色物質(zhì)等，以樣本檢測(cè)相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度（RLU)，定量或定性推導(dǎo)待測(cè)物含量。其分析方法優(yōu) 點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、快速且易于標(biāo)準(zhǔn)化操作，另外測(cè)試中不使用有害的試劑，試劑保 持期長(zhǎng)，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研宄和臨床實(shí)驗(yàn)診斷等領(lǐng)域。
[0003] 經(jīng)過近十多年CLIA的迅猛發(fā)展，現(xiàn)已開發(fā)出多種類型的化學(xué)發(fā)光底物，常見的類 型主要有吖啶酯類、魯米諾及其衍生物、過氧化草酸酯類、金剛烷類等。其中吖啶酯和吖啶 酰胺類吖啶衍生物作為免疫分析示蹤物具有許多優(yōu)點(diǎn)：無需催化劑、高特異性、發(fā)光量子產(chǎn) 率高，穩(wěn)定性好等，從而得到廣泛的應(yīng)用。
[0004] 目前，在以堿性磷酸酶（ALP)為標(biāo)記酶的化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑系統(tǒng)中尚缺乏一 種靈敏度高，發(fā)光持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，使用簡(jiǎn)便，在室溫情況下強(qiáng)度恒定的化學(xué)發(fā)光免疫分析示蹤 物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種新的化學(xué)發(fā)光吖啶酯衍生物，適用于以堿 性磷酸酶（ALP)為標(biāo)記酶的化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑系統(tǒng)。
[0006] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：
[0007] 本發(fā)明首先公開了一種化學(xué)發(fā)光吖啶酯衍生物，其結(jié)構(gòu)式為式I所示：
[0008]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種吖啶酯衍生物，其特征在于，其結(jié)構(gòu)式為式I所示：
2. -種合成權(quán)利要求1所述吖啶酯衍生物的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟： (1) 、吖啶-9-硫代羧酸對(duì)三氟甲基苯酯的合成：將4-三氟甲基苯硫酚和吖啶-9-碳酰 氯加入到二氯甲烷中，滴加三乙胺進(jìn)行攪拌反應(yīng)，反應(yīng)完畢，蒸去溶劑，過濾，水洗，干燥，得 到吖啶-9-硫代羧酸對(duì)三氟甲基苯酯； (2) 、10-甲基-吖啶-9-硫代羧酸對(duì)三氟甲基苯酯的合成：將上步制備的吖啶-9-硫 代羧酸對(duì)三氟甲基苯酯和溶劑二氯甲烷加入到反應(yīng)器中，冰浴控溫在〇~5°C，向反應(yīng)器中 滴加三氟甲烷磺酸甲酯，滴加完畢，撤掉冰水浴，常溫下攪拌反應(yīng)1-8小時(shí)，收集反應(yīng)產(chǎn)物， 即得； (3) 、10-甲基-9, 10-二氫化吖啶-9-硫代羧酸對(duì)三氟甲基苯酯的合成：將步驟⑵制 備的產(chǎn)物加入到無水甲醇溶液中，加入氰基硼氫化鈉進(jìn)行回流反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后靜置至室 溫，過濾，濾液濃縮，得到二氫化硫酯粗產(chǎn)物； (4) 、TfS-APS 的合成： a、 將二異丙基氨基鋰（LDA)的溶液加入到反應(yīng)瓶中，外用干冰浴； b、 滴加步驟（3)的反應(yīng)產(chǎn)物的THF溶液，控制混合物溫度在-65~-70°C，滴加完畢，攪 拌反應(yīng)； c、 加入三氯氧磷的四氫呋喃溶液，10-60分鐘后撤去冰浴，再攪拌反應(yīng)60-120分鐘； d、 向反應(yīng)器中加入3-羥基丙氰，室溫下攪拌反應(yīng)6-14小時(shí)； e、 過濾，除去固體物，濾液用乙酸乙酯稀釋后，水洗，干燥，除去溶劑，得到固體物； f、 將固體物溶于丙酮溶液中，通氮?dú)獗Ｗo(hù)下，加入2N氫氧化鈉的水溶液，然后室溫下 攪拌反應(yīng)8-36小時(shí)，即得。
3. 按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：按摩爾比計(jì)，步驟（1)中4-三氟甲基苯 硫酚和吖啶-9-碳酰氯的比例為1:1 ;所述的攪拌反應(yīng)溫度優(yōu)選為40~50°C。
4. 按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2)中向反應(yīng)器中滴加 I. 1當(dāng)量的 三氟甲烷磺酸甲酯；所述的常溫為20-35°C ;所述的攪拌反應(yīng)的時(shí)間為4小時(shí)。
5. 按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2)中所述的收集反應(yīng)產(chǎn)物為將反 應(yīng)產(chǎn)物過濾，濾餅用無水乙醚沖洗1~2遍，50°C真空干燥6-8小時(shí)，即得。
6. 按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（3)中加入1. 5摩爾量的氰基硼氫 化鈉回流反應(yīng)1. 5~2小時(shí)。
7. 按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（4)的a步驟中外用干冰浴，使體系 溫度控制在-70 °C ;步驟（4)的b步驟中控制混合物溫度在-65~-70 °C ;步驟（4)的c步 驟中加入三氯氧磷的四氫呋喃溶液反應(yīng)30分鐘后撤去冰浴，再攪拌反應(yīng)90分鐘；f步驟中 將固體物溶于丙酮溶液中，通氮?dú)獗Ｗo(hù)下，加入2N氫氧化鈉的水溶液，室溫下攪拌反應(yīng)24 小時(shí)。
8. 權(quán)利要求1所述的吖啶酯衍生物作為免疫分析示蹤物中的用途。
9. 一種化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于：以權(quán)利要求1所述的吖啶酯衍生物作 為免疫分析示蹤物。
10. 按照權(quán)利要求9所述的化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于：以堿性磷酸酶為標(biāo) 記酶。
【專利摘要】本發(fā)明公開了吖啶酯衍生物及其合成方法和應(yīng)用。本發(fā)明所提供的化學(xué)發(fā)光吖啶酯衍生物的結(jié)構(gòu)式為式Ⅰ所示。本發(fā)明進(jìn)一步公開了合成式Ⅰ所述化合物的方法，包括：(1)、合成吖啶-9-硫代羧酸對(duì)三氟甲基苯酯；(2)、合成10-甲基-吖啶-9-硫代羧酸對(duì)三氟甲基苯酯；(3)、合成10-甲基-9,10-二氫化吖啶-9-硫代羧酸對(duì)三氟甲基苯酯；(4)、合成TfS-APS。本發(fā)明吖啶酯衍生物作為免疫分析示蹤物適用于以堿性磷酸酶為標(biāo)記酶的化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑系統(tǒng)。應(yīng)用效果證明，本發(fā)明試劑盒可檢測(cè)到1×10-19mol的ALP分子，具有靈敏度高，發(fā)光持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，使用簡(jiǎn)便，在室溫情況下強(qiáng)度恒定，無需精確溫控等優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類】G01N33-535, C09K11-06, C07F9-64
【公開號(hào)】CN104761584
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510090045
【發(fā)明人】葉建峰
【申請(qǐng)人】北京利德曼生化股份有限公司
【公開日】2015年7月8日
【申請(qǐng)日】2015年2月27日