醋酸去氨加壓素的固相制備工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及多肽藥物化學(xué)合成領(lǐng)域，具體涉及一種醋酸去氨加壓素的固相制備工 〇
【背景技術(shù)】
[0002] 去氨加壓素的氨基酸序列為：3_疏基丙氨酰-L-酪氨酰-L-苯丙氨酰-L-谷氨酰 胺氨酰-L-天冬酰胺氨酰-L-半胱氨酰-L-脯氨酰-D-精氨酰-甘氨酰胺（1 - 6)環(huán)二硫 化物，其結(jié)構(gòu)如下?
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種醋酸去氨加壓素的固相制備工藝，其特征在于：包括以下步驟： 步驟一、以替代度為I. 6~2.Ommol/g的AmResin樹(shù)脂，溶脹、抽干為起始原料，偶聯(lián)FmocRinkAmideAM-Linker，制得功能基載體； 步驟二、采用固相多肽逐步縮合法，根據(jù)肽序從C端至N端，首先將Fmoc-Gly-OH與步 驟一RinkAmide-AMResin偶聯(lián)反應(yīng)獲得Fmoc-Gly-功能基載體； 步驟三、去除步驟二Fmoc-Gly-功能基載體的保護(hù)基Fmoc，從而獲得H-Gly-功能基載 體； 步驟四、根據(jù)肽序，按照Fmoc/tBu固相逐步合成策略，重復(fù)以上脫Fmoc保護(hù)和 偶聯(lián)操作步驟，從C端到N端開(kāi)始再依次偶聯(lián)Fmoc-D-Arg(pbf) -OH、Fmoc-Pro-OH、 Fmoc-Cys(Trt) -OH、Fmoc-Asn(Trt) -OH、Fmoc-Gln(Trt) -OH、Fmoc-Phe-OH、 Fmoc-Tyr(tBu) -〇H、Mpr(Trt) -0H，期間依次脫去Fmoc-保護(hù)基團(tuán)，直至完成線肽樹(shù)脂的合 成； 步驟五、在所述線肽樹(shù)脂中加入I2溶液，從而將線性肽樹(shù)脂氧化成氧化型肽樹(shù)脂，所述 12溶液為將12溶解于由DMF、MeOH按照1 :1體積比形成的溶劑中，所述12的量為線肽樹(shù)脂 的摩爾數(shù)的4~8倍； 步驟六、將所述氧化型肽樹(shù)脂緩緩加入裂解液中，待全部加完后，再在室溫裂解2h，待 裂解時(shí)間結(jié)束后，將樹(shù)脂濾掉得到含多肽的裂解液，所述裂解液由TFA、TIS、H2O按照95 : 2~3 :2~3體積份比例混合形成； 步驟七、將含多肽的裂解液緩緩加入到的冰乙醚中，析出白色的固體粗肽，靜置后離 心，并用冰的無(wú)水乙醚交替研磨洗滌、離心，所述粗品經(jīng)真空干燥至恒重，得到干燥后的粗 肽； 步驟八、將所述干燥后的粗肽采用乙腈：純水=2 :8的溶液溶解，借助制備型反相HPLC純化，收集目的產(chǎn)物，旋蒸，凍干得到醋酸去氨加壓素成品。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的醋酸去氨加壓素的固相制備工藝，其特性在于：所述步驟二 和步驟四中Fmoc保護(hù)的氨基酸的投料量為與其進(jìn)行的偶聯(lián)的樹(shù)脂的摩爾數(shù)的2~4倍。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的醋酸去氨加壓素的固相制備工藝，其特征在于：所述步驟六 中裂解液由TFA、TIS、H2O按照95 :2. 5 :2. 5體積份比例混合形成。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的醋酸去氨加壓素的固相制備工藝，其特征在于：所述步驟八 中A相選擇磷酸鹽緩沖液，B相為磷酸鹽緩沖液-乙腈。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的醋酸去氨加壓素的固相制備工藝，其特征在于：所述步驟二 和步驟四中采用DIC/HOBt縮合體系。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的醋酸去氨加壓素的固相制備工藝，其特征在于：所述干燥后 的粗肽的溶解濃度2. 5~3. 5mmol/L。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明一種醋酸去氨加壓素的固相制備工藝，包括以下步驟：以替代度為1.6~2.0mmol/g的Am Resin樹(shù)脂，溶脹、抽干為起始原料，偶聯(lián)Fmoc Rink Amide AM-Linker；根據(jù)肽序，從C端到N端開(kāi)始再依次偶聯(lián)，直至完成線肽樹(shù)脂的合成；在線肽樹(shù)脂中加入I2溶液，從而將線性肽樹(shù)脂氧化成氧化型肽樹(shù)脂，I2溶液為將I2溶解于由DMF、MeOH按照1：1體積比形成的溶劑中；將氧化型肽樹(shù)脂緩緩加入裂解液中，待全部加完后，再在室溫裂解2h，待裂解時(shí)間結(jié)束后，將樹(shù)脂濾掉得到含多肽的裂解液；將含多肽的裂解液緩緩加入到的冰乙醚中，析出白色的固體粗肽，從而得到干燥后的粗肽。本發(fā)明產(chǎn)品純度可達(dá)到99%以上，總收率可超過(guò)45%，生產(chǎn)效率較高，對(duì)設(shè)備要求低，并且可以實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，有較好的經(jīng)濟(jì)社會(huì)價(jià)值和廣泛的應(yīng)用前景。
【IPC分類(lèi)】C07K1-20, C07K7-16, C07K1-06, C07K1-04
【公開(kāi)號(hào)】CN104761619
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510004651
【發(fā)明人】高魯, 胡影莉, 陳逸民, 王良友
【申請(qǐng)人】蘇州天馬醫(yī)藥集團(tuán)天吉生物制藥有限公司
【公開(kāi)日】2015年7月8日
【申請(qǐng)日】2015年1月6日