一種核酸提取方法及核酸提取試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明生物化學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種核酸提取方法及核酸提取試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，核酸DNA提取方法研宄的發(fā)展將趨于用非有機溶劑提取法替代傳統(tǒng)的有 機溶劑提?。粚崿F(xiàn)一步提取法，省去繁瑣的提取和多次離心過程，更適于批量操作；利用物 理吸附法，操作簡便、提取效率高、對基因組DNA沒有損傷作用，適宜于自動化操作；提取過 程自動化，把基因組DNA的提取與其他分子生物學(xué)技術(shù)（毛細細管電脈，PCR，基因芯片技術(shù) 等）結(jié)合起來，實現(xiàn)從樣品處理到基因分析過程的全部自動化操作。
[0003] 核酸DNA提取常用方法主要：酚-氯仿抽提法、堿抽提法、CTAB抽提法、硅基質(zhì)離 心柱法、磁珠法和Chelex-100法。
[0004] 當(dāng)檢材較少時或者基因分型只需要少量的DNA時，一般采用Chelex-100提取方法 提取。
[0005] 但是，Chelex-100提取方法中螯合樹脂Chelex-100的配制和加入不易操作且難 以控制，同時螯合樹脂溶液長期儲存會導(dǎo)致性能下降，不利于實際應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供了一種核酸提取方法及核酸提取試劑盒，結(jié)構(gòu)簡單，易于操作。
[0007] 另外，本發(fā)明一種核酸提取方法及核酸提取試劑盒簡化了核酸提取的流程，有效 減少核酸提取過程中核酸的損失。
[0008] 同時，由于采用預(yù)裝螯合樹脂的方法，螯合樹脂的加入量準確易控制，成本低，有 利于推廣應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明提供的核酸提取試劑盒包括管體、管蓋和預(yù)裝到管體中的螯合樹脂，所述 管蓋與所述管體采用螺紋、樞軸或折頁連接。
[0010] 優(yōu)選的，所述管體由圓柱體和圓錐體兩部分構(gòu)成，所述圓錐體的底部為弧形球面。
[0011] 優(yōu)選的，所述核酸提取試劑盒的容量為l-2ml。
[0012] 優(yōu)選的，所述核酸提取試劑盒還包括甘油或PVP，所述螯合樹脂為聚苯乙烯二乙烯 基苯和甘油或PVP的懸濁液，經(jīng)干燥處理附著于管體底部。
[0013] 優(yōu)選的，所述螯合樹脂的添加量為0. 001-0. 12g。
[0014] 本發(fā)明還提供一種核酸提取方法，所述核酸提取方法使用前述核酸提取試劑盒提 取核酸，包括：
[0015] 將細胞樣本加入到所述核酸提取試劑盒中，第一次離心；
[0016] 除去第一上清液，加入裂解緩沖液；
[0017] 加熱使細胞膜破裂，蛋白質(zhì)變性；
[0018] 第二次離心；
[0019] 分離得到第二上清液。
[0020] 優(yōu)選的，所述第一次離心的速率為10000轉(zhuǎn)/分-15000轉(zhuǎn)/分，離心時間為3-10 分鐘。
[0021] 優(yōu)選的，所述裂解緩沖液的添加量為30-60 y L。
[0022] 優(yōu)選的，所述第二次離心的速率為10000轉(zhuǎn)/分-15000轉(zhuǎn)/分，離心時間為1-5 分鐘。
[0023] 優(yōu)選的，所述裂解緩沖液為三羥甲基氨基甲烷緩沖液，pH為11-12,使用量為 10-200ul〇
[0024] 從以上技術(shù)方案可以看出，本發(fā)明實施例具有以下優(yōu)點：本發(fā)明核酸提取試劑盒 包括管體、管蓋和預(yù)裝到管體中的螯合樹脂，所述管蓋與所述管體采用螺紋、樞軸或折頁連 接，結(jié)構(gòu)簡單，操作容易，提取的DNA用于PCR反應(yīng)的效果好。另外，本發(fā)明一種核酸提取方 法及核酸提取試劑盒簡化了核酸提取的流程，有效減少核酸提取過程中核酸的損失。同時， 由于采用懸浮液（包含甘油或PVP)稀釋螯合樹脂方法，螯合樹脂的加入量準確易控制，成 本低，有利于推廣應(yīng)用。
【附圖說明】
[0025] 為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本 發(fā)明的實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù) 提供的附圖獲得其他的附圖。
[0026] 圖1為本發(fā)明實施例核酸提取試劑盒與現(xiàn)有核酸提取試劑盒定量PCR擴增管家基 因片段效果對比；
[0027] 圖2為本發(fā)明實施例核酸提取試劑盒10個樣本提取核酸定量PCR擴增曲線圖；
[0028] 圖3為現(xiàn)有核酸提取試劑盒10個樣本提取核酸定量PCR擴增曲線圖；
[0029] 圖4為本發(fā)明實施例核酸提取試劑盒10個樣本提取核酸定量PCR熔解曲線圖； [0030] 圖5為現(xiàn)有核酸提取試劑盒10個樣本提取核酸定量PCR熔解曲線圖；
[0031] 圖6為Gapdh引物qPCR擴增靈敏度驗證圖；
[0032] 圖7為Gapdh引物標準曲線結(jié)果圖；
[0033] 圖8為本發(fā)明實施例核酸提取試劑盒與現(xiàn)有核酸提取試劑盒提取核酸濃度效果 對比。
【具體實施方式】
[0034] 本發(fā)明提供了一種核酸提取試劑盒，結(jié)構(gòu)簡單，易于操作，能夠快速簡便地提取細 胞中的核酸。
[0035] 將螯合樹脂直接加入到小管中，制成核酸提取試劑盒，直接加入細胞樣本，離心， 離心后去上清，加入配制好的pH確定的裂解緩沖液，混勻，加熱使得細胞膜破裂，蛋白質(zhì)變 性，離心分離得到上清液。本發(fā)明實施例方法可以快速完成核酸的提取。本發(fā)明核酸提取 試劑盒結(jié)構(gòu)簡單，易于操作，有效減少核酸提取過程中核酸的損失。
[0036] 或者，將螯合樹脂用懸浮液（包含甘油或PVP)稀釋螯合樹脂方法，加入到小管中， 經(jīng)干燥處理制成核酸提取試劑盒，加入細胞樣本，離心，離心后去上清，加入配制好的pH 確定的裂解緩沖液，混勻，加熱使得細胞膜破裂，蛋白質(zhì)變性，離心分離得到上清液。本發(fā)明 核酸提取方法可以快速完成核酸的提取，試劑盒結(jié)構(gòu)簡單，易于操作，提取的DNA用于PCR 反應(yīng)的效果好。同時，由于懸浮液（包含甘油或PVP)稀釋螯合樹脂方法，螯合樹脂的加入 量準確易控制，成本低，有利于推廣應(yīng)用。
[0037] 如圖1-8和表1-3所示，本發(fā)明核酸提取試劑盒與DNA純化試劑盒比較，同樣樣本 量提取核酸的量更高（提取DNA濃度比對比試劑盒高1倍，如表3及圖8所示），提取DNA 用于PCR反應(yīng)的效果更好，但本發(fā)明核酸提取試劑盒結(jié)構(gòu)簡單，生產(chǎn)成本為現(xiàn)有核酸提取 試劑盒的25%，遠低于現(xiàn)有DNA純化試劑盒，有利于推廣應(yīng)用。
[0038] 表1本發(fā)明核算提取試劑盒與現(xiàn)有核酸提取試劑盒對比
【主權(quán)項】
1. 一種核酸提取試劑盒，其特征在于，所述核酸試提取劑盒包括管體、管蓋和預(yù)裝到管 體中的螯合樹脂，所述管蓋與所述管體采用螺紋、樞軸或折頁連接。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸提取試劑盒，其特征在于，所述管體由圓柱體和圓錐體 兩部分構(gòu)成，所述圓錐體的底部為弧形球面。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸提取試劑盒，其特征在于，所述核酸提取試劑盒的容量 為l_2ml〇
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸提取試劑盒，其特征在于，所述核酸試提取劑盒還包括 甘油或PVP，所述螯合樹脂為聚苯乙烯二乙烯基苯和甘油或PVP的懸濁液，經(jīng)干燥處理附著 于所述管體底部。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸提取試劑盒，其特征在于，所述螯合樹脂的添加量為 0. 001-0. 12g〇
6. -種核酸提取方法，其特征在于，所述核酸提取方法使用權(quán)利要求1-5任一項所述 的核酸提取試劑盒提取核酸，包括： 將細胞樣本加入到所述核酸提取試劑盒中，第一次離心； 除去第一上清液，加入裂解緩沖液； 加熱使細胞膜破裂，蛋白質(zhì)變性； 第二次離心； 分離得到第二上清液。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的核酸提取方法，其特征在于，所述第一次離心的速率為10000 轉(zhuǎn)/分-15000轉(zhuǎn)/分，離心時間為3-10分鐘。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的核酸提取方法，其特征在于，所述裂解緩沖液的添加量為 30_60 u L0
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸提取方法，其特征在于，所述第二次離心的速率為10000 轉(zhuǎn)/分-15000轉(zhuǎn)/分，離心時間為1-5分鐘。
10. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的核酸提取方法，其特征在于，所述裂解緩沖液為三羥甲基氨 基甲烷緩沖液，pH為11-12,使用量為10-200ul。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種核酸提取試劑盒，結(jié)構(gòu)簡單，易于操作。本發(fā)明提供的核酸提取試劑盒，所述核酸提取試劑盒包括管體、管蓋和預(yù)裝到管體中的螯合樹脂，所述管蓋與所述管體采用螺紋、樞軸或折頁連接，結(jié)構(gòu)簡單，操作容易，提取的DNA用于PCR反應(yīng)的效果好。本發(fā)明還提供一種核酸提取方法，簡化了核酸提取的流程，有效減少核酸提取過程中核酸的損失。同時，由于采用懸浮液(包含甘油或PVP)稀釋螯合樹脂方法，螯合樹脂的加入量準確且易控制，成本低，有利于推廣應(yīng)用。
【IPC分類】C12N15-10
【公開號】CN104762297
【申請?zhí)枴緾N201510218707
【發(fā)明人】范靜彥, 周榮華, 李必松
【申請人】廣州鴻琪光學(xué)儀器科技有限公司
【公開日】2015年7月8日
【申請日】2015年4月30日