一種分子標記輔助選擇提高黑羽番鴨脂肪沉積的育種方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及一種育種方法，具體是一種分子標記輔助選擇提高黑羽番鴨脂肪沉積 的育種方法。
【背景技術】
[0002] 黑羽番鴨是是由江蘇農牧科技職業(yè)學院與江蘇現(xiàn)代畜牧科技園合作培育，W法國 白羽番鴨為父本、本±番鴨為母本進行雜交，通過雜交后代的繼代選育，W培育遺傳性能穩(wěn) 定、生長速度較快、肉質較好的黑羽型優(yōu)質番鴨為育種目標。黑羽番鴨作為一種瘦肉型肉鴨 品種，商品代上市時間大致在13周齡左右，其脂肪沉積量較低，會影響肌肉中肌巧酸的含 量降低肌肉的品質，故提高黑羽番鴨脂肪沉積量可W相應提高肌肉中肌巧酸的含量，提高 烹任效果。

【發(fā)明內容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種檢測方法簡單、節(jié)省育種費用的分子標記輔助選擇提 高黑羽番鴨脂肪沉積的育種方法，W解決上述【背景技術】中提出的問題。
[0004] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案： 一種分子標記輔助選擇提高黑羽番鴨脂肪沉積的育種方法，具體步驟包括： 1) 提取黑羽番鴨基因組DNA; 2) 參照野鴨的A-FABP基因序列設計引物，引物序列為： 上游序列F;5' -TCTTCAGTCCATAGCACCCC-3'，如SEQIDNO: 1 所示； 下游序列R: 5' -AAAAGGAACTCACCACCACC-3'，如SEQIDN0:2 所示； 3) W黑羽番鴨基因組DM為模板進行PCR擴增；PCR擴增產物長度為17化P; 4)PCR擴增產物采用SSCP檢測或直接測序，判定被檢測個體屬于W下哪種基因型；MM 型、麗型、順型，其中匪型的基因序列如SEQIDNO:3所示；麗型的基因序列如SEQID NO:4所示；順型的基因序列如SEQIDNO: 5所示； 如果某個體的基因型為匪型，則表示該個體脂肪沉積能力高，能作為種用，用于生產MM型后代；麗型也可作為種用，用于生產MM型；順型不能產生MM型，直接淘汰。通過配種 產生MM型的方式主要有3種情況：①雙親均為MM型，則后代100%為MM型；②雙親一方為 匪型，另外一方為麗型，則后代50%為匪型，50%為麗型；⑨雙親均為麗型，則后代25% 為匪型，50%為麗型，25%為順型。
[0005] 作為本發(fā)明進一步的方案；所述PCR擴增條件： ①反應液組成： 10XPCRBuffer，含Mg2+，2. 5yL，dNTP，2. 5mM，2yL， 正向引物，1化M，1uL反向引物，1化M，1 Taq聚合酶，5U/yL，0. 2yL， 地2〇，17. 3yL， DM模板，1化， ②擴增條件： a. 95°C預變性 5min; b. 95°C變性 30s; c. 67°C退火 30s; d. 72°C延伸 30s; e. 72°C延伸lOmin; f. 4°C保存5min;其中步驟b-d需要經過35個循環(huán)周期。
[0006] 與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明在黑羽番鴨育種過程中，在4周齡 左右即可進行個體基因型判斷，然后淘汰非目標基因型個體，可W達到早期選育，降低非目 標個體的飼養(yǎng)量時間，節(jié)省育種費用。該檢測方法簡單、基因型容易判斷，因此具有推廣價 值。
【附圖說明】
[0007] 圖1是本發(fā)明過程中PCR擴增產物SSCP檢測結果圖。
【具體實施方式】
[000引下面將結合本發(fā)明實施例，對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述， 顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的 實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都 屬于本發(fā)明保護的范圍。
[0009] 實施例1 本發(fā)明實施例中，一種分子標記輔助選擇提高黑羽番鴨脂肪沉積的育種方法，具體步 驟包括： 1)黑羽番鴨基因組DNA的提取。
[0010] 2)參照野鴨的A-FABP基因序列(序列號：冊640428)設計引物，引物序列為； 上游序列F;5' -TCTTCAGTCCATAGCACCCC-3'設日沈QIDNO: 1 所示）； 下游序列R: 5' -AAAAGGAACTCACCACCACC-3'巧日SEQIDNO:2 所示）； 3)黑羽番鴨基因組DM為模板進行PCR擴增。PCR擴增條件如表1所示。PCR擴增產 物長度為17化P。
[0011] 表 1
【主權項】
1. 一種分子標記輔助選擇提高黑羽番鴨脂肪沉積的育種方法，其特征在于，具體步驟 包括： 1) 提取黑羽番鴨基因組DNA; 2) 參照野鴨的A-FABP基因序列設計引物，引物序列為： 上游序列F:5' -TCTTCAGTCCATAGCACCCC-3'，如SEQIDNO: 1 所示； 下游序列R: 5' -AAAAGGAACTCACCACCACC-3'，如SEQIDN0:2 所示； 3) 以黑羽番鴨基因組DNA為模板進行PCR擴增；PCR擴增產物長度為171bp; 4)PCR擴增產物采用SSCP檢測或直接測序，判定被檢測個體屬于以下哪種基因型：MM 型、麗型、NN型，其中麗型的基因序列如SEQIDNO:3所示；麗型的基因序列如SEQID NO:4所示；NN型的基因序列如SEQIDNO: 5所示； 如果某個體的基因型為麗型，則表示該個體脂肪沉積能力高，能作為種用，用于生產MM型后代；MN型也能作為種用，用于生產MM型；NN型不能產生MM型，直接淘汰。
2. 根據權利要求1所述的分子標記輔助選擇提高黑羽番鴨脂肪沉積的育種方法，其特 征在于，所述PCR擴增條件： ① 反應液組成： 10XPCRBuffer，含Mg2+，2. 5yL，dNTP，2. 5mM，2yL， 正向引物，10pM，lyL， 反向引物，10pM，lyL， Taq聚合酶，5U/yL，0. 2yL，dH20,17. 3yL， DNA模板，IyL， ② 擴增條件： a. 95°C預變性 5min; b. 95°C變性 30s; c. 67°C退火 30s; d. 72°C延伸 30s; e. 72°C延伸IOmin; f. 4°C保存5min;其中步驟b-d需要經過35個循環(huán)周期。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種分子標記輔助選擇提高黑羽番鴨脂肪沉積的育種方法，通過提取黑羽番鴨基因組DNA；參照野鴨的A-FABP基因序列設計引物，以黑羽番鴨基因組DNA為模板進行PCR擴增；PCR擴增產物采用SSCP檢測或直接測序，判定被檢測個體屬于以下哪種基因型：MM型、MN型、NN型。如果某個體的基因型為MM型，則表示該個體脂肪沉積能力高，能作為種用，用于生產MM型后代；MN型也可作為種用，用于生產MM型；NN型不能產生MM型，直接淘汰。本發(fā)明在黑羽番鴨4周齡即可進行個體基因型判斷，淘汰非目標基因型個體，達到早期選育，降低非目標個體的飼養(yǎng)量時間，節(jié)省育種費用。該檢測方法簡單、基因型容易判斷，具有推廣價值。
【IPC分類】C12Q1-68
【公開號】CN104774964
【申請?zhí)枴緾N201510217456
【發(fā)明人】董飚, 秦豪榮, 王健, 孫國波, 段修軍, 紀榮超, 卞友慶
【申請人】江蘇農牧科技職業(yè)學院
【公開日】2015年7月15日
【申請日】2015年4月30日