一種從蛋清提取溶菌酶的簡(jiǎn)便方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及溶菌酶提取制備領(lǐng)域，具體涉及一種從蛋清提取溶菌酶的簡(jiǎn)便方法。
【背景技術(shù)】
[0002]從蛋清中提取溶菌酶的方法有
[0003]1、鹽沉淀法，因鹽濃度過高，損害酶的活性；
[0004]2、樹脂吸附洗脫法，程序較復(fù)雜，不易工業(yè)化生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種從蛋清提取溶菌酶的簡(jiǎn)便方法，聯(lián)合使用等電點(diǎn)和熱處理法沉淀除去雜蛋白，方法簡(jiǎn)便高效；用超濾法濃縮酶溶液，用烘干法得到成品，高效、快速、不損害酶活力并能獲得較高產(chǎn)量。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:
[0007]一種從蛋清提取溶菌酶的簡(jiǎn)便方法，包括如下步驟:
[0008]S1、將新鮮蛋清加2?3倍蒸餾水，攪拌均勻后紗布過濾，取濾液；
[0009]S2、取步驟SI所得的濾液，緩慢加入2mol/L的鹽酸溶液，調(diào)節(jié)pH = 4.6 ;然后在80?100°C加熱I?2分鐘使雜蛋白沉淀，離心，取上清液；
[0010]S3、將步驟S2所得的上清液用膜截留分子量為5000?7000道爾頓的超濾膜裝置超濾濃縮酶溶液，所述超濾膜由下列質(zhì)量份數(shù)的原料組成:丙烯腈30份、乙酸乙酯30份、松節(jié)油衍生物65份、脂肪醇聚氧乙烯醚磺酸鈉15份；
[0011]S4、將步驟S3所得的濃縮酶溶液置于30?40 °C溫箱烘干，得成品。
[0012]本發(fā)明具有以下有益效果:
[0013]聯(lián)合使用等電點(diǎn)和熱處理法沉淀除去雜蛋白，方法簡(jiǎn)便、快速、生產(chǎn)周期短(I?2天)；采用的超濾膜表層孔徑細(xì)小，截留性能優(yōu)異，下層孔徑稍大，保證高截留率過濾膜的通量和過濾速度，且采用無毒無害的植物源有機(jī)溶劑，減少了有毒有害物質(zhì)的殘留；提取過程酶的活力得到較好保護(hù)；可以獲得較高產(chǎn)量(達(dá)3%左右)和較高的酶比活力(達(dá)19000u/mg 左右)。
【具體實(shí)施方式】
[0014]為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0015]本實(shí)施例中超濾膜的制備方法為:將丙烯腈與乙酸乙酯按1:1的比例混合，攪拌均勻得到共聚物；將上述共聚物完全溶解于松節(jié)油衍生物溶液中得到鑄膜液；向上述鑄膜液中加入表面活性劑，均勻攪拌，放置2天熟化；將熟化后的鑄膜液在25°C下流延成膜，待溶液揮發(fā)凝固后得到成品。
[0016]實(shí)施例1
[0017]一種從蛋清提取溶菌酶的簡(jiǎn)便方法，包括如下步驟:
[0018]S1、將新鮮蛋清加2倍蒸餾水，攪拌均勻后紗布過濾，取濾液；
[0019]S2、取步驟SI所得的濾液，緩慢加入2mol/L的鹽酸溶液，調(diào)節(jié)pH = 4.6 ;然后在80°C加熱2分鐘使雜蛋白沉淀，離心，取上清液；
[0020]S3、將步驟S2所得的上清液用膜截留分子量為5000道爾頓的超濾膜裝置超濾濃縮酶溶液；
[0021]S4、將步驟S3所得的濃縮酶溶液置于30°C溫箱烘干，得成品。
[0022]實(shí)施例2
[0023]一種從蛋清提取溶菌酶的簡(jiǎn)便方法，包括如下步驟:
[0024]S1、將新鮮蛋清加3倍蒸餾水，攪拌均勻后紗布過濾，取濾液；
[0025]S2、取步驟SI所得的濾液，緩慢加入2mol/L的鹽酸溶液，調(diào)節(jié)pH = 4.6 ;然后在100°C加熱I分鐘使雜蛋白沉淀，離心，取上清液；
[0026]S3、將步驟S2所得的上清液用膜截留分子量為7000道爾頓的超濾膜裝置超濾濃縮酶溶液；
[0027]S4、將步驟S3所得的濃縮酶溶液置于40 °C溫箱烘干，得成品。
[0028]實(shí)施例3
[0029]一種從蛋清提取溶菌酶的簡(jiǎn)便方法，包括如下步驟:
[0030]S1、將新鮮蛋清加2.5倍蒸餾水，攪拌均勻后紗布過濾，取濾液；
[0031]S2、取步驟SI所得的濾液，緩慢加入2mol/L的鹽酸溶液，調(diào)節(jié)pH = 4.6 ;然后在90°C加熱1.5分鐘使雜蛋白沉淀，離心，取上清液；
[0032]S3、將步驟S2所得的上清液用膜截留分子量為6000道爾頓的超濾膜裝置超濾濃縮酶溶液；
[0033]S4、將步驟S3所得的濃縮酶溶液置于35 °C溫箱烘干，得成品。
[0034]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以作出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種從蛋清提取溶菌酶的簡(jiǎn)便方法，其特征在于，包括如下步驟: 51、將新鮮蛋清加2?3倍蒸餾水，攪拌均勻后紗布過濾，取濾液； 52、取步驟SI所得的濾液，緩慢加入2mol/L的鹽酸溶液，調(diào)節(jié)pH= 4.6 ;然后在80?100°C加熱I?2分鐘使雜蛋白沉淀，離心，取上清液； 53、將步驟S2所得的上清液用膜截留分子量為5000?7000道爾頓的超濾膜裝置超濾濃縮酶溶液，所述超濾膜由下列質(zhì)量份數(shù)的原料組成:丙烯腈30份、乙酸乙酯30份、松節(jié)油衍生物65份、脂肪醇聚氧乙烯醚磺酸鈉15份； 54、將步驟S3所得的濃縮酶溶液置于30?40°C溫箱烘干，得成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從蛋清提取溶菌酶的簡(jiǎn)便方法，其特征在于，所述松節(jié)油衍生物為蒎烯的異構(gòu)、歧化產(chǎn)物。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從蛋清提取溶菌酶的簡(jiǎn)便方法，包括如下步驟：將新鮮蛋清加2～3倍蒸餾水，攪拌均勻后紗布過濾，取濾液；緩慢加入2mol/L的鹽酸溶液，調(diào)節(jié)pH＝4.6；然后在80～100℃加熱1～2分鐘使雜蛋白沉淀，離心，取上清液；用膜截留分子量為5000～7000道爾頓的超濾膜裝置超濾濃縮酶溶液，置于30～40℃溫箱烘干，得成品。本發(fā)明聯(lián)合使用等電點(diǎn)和熱處理法沉淀除去雜蛋白，方法簡(jiǎn)便高效；用超濾法濃縮酶溶液，用烘干法得到成品，高效、快速、不損害酶活力并能獲得較高產(chǎn)量。
【IPC分類】C12N9-36
【公開號(hào)】CN104789541
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510161910
【發(fā)明人】黃威權(quán), 趙鋒, 朱秋融, 任敏, 呂葆真
【申請(qǐng)人】西安天星生物藥業(yè)股份有限公司
【公開日】2015年7月22日
【申請(qǐng)日】2015年4月4日