一種七葉皂苷鈉的制備方法、包含其的外用制劑及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種七葉皂苷鈉的制備方法包含其的外用制 劑及其應(yīng)用。具體而言，本發(fā)明涉及從中藥娑羅子中提取七葉皂苷鈉的制備技術(shù)及用該技 術(shù)制備的七葉皂苷鈉制備成外用型制劑藥物（氣霧劑/噴霧劑）的技術(shù)，并將其外用制劑 應(yīng)用到外傷導(dǎo)致組織水腫等損傷的治療中。
【背景技術(shù)】
[0002] 人體輕微外傷，包括各種挫傷、擦傷、扭傷等，常會引起患者傷處的水腫、疼痛和活 動受限，給生活、工作帶來不便，有些甚至因傷后處理不當(dāng)容易引發(fā)嚴(yán)重后果。傷后24小時(shí) 內(nèi)的損傷，會引起局部組織滲出和腫脹、疼痛、制動等，皮膚創(chuàng)面損傷后局部抵抗力下降，容 易繼發(fā)細(xì)菌感染等，后者可以進(jìn)一步加重病情。因此，損傷后創(chuàng)面的保護(hù)、防護(hù)感染以及消 腫止痛是處理軟組織損傷的基本原則。目前治療這些輕微外傷的方法雖然很多，如使用紅 汞、紫藥水、碘伏、乙醇等各種消毒劑；或者云南白藥噴霧劑等。但是這些方法大部分功能單 一，只能起到防止創(chuàng)面感染和創(chuàng)面的部分保護(hù)作用，止痛消腫效果差，而云南白藥噴霧劑效 果雖然較好，但是兩個(gè)噴瓶的使用不方便攜帶和操作。
[0003] 七葉阜苷又稱七葉阜苷酸，為七葉樹科植物七葉樹（Aesculus hippocastanum L.也稱為天師栗（Aesculus Wilsonii Rehd.)、梭稷樹、梭稷子、猴板栗等）的干燥成熟果 實(shí)娑羅子中提取得到的總皂苷、七葉皂苷或異七葉皂苷等的總稱。目前在臨床中應(yīng)用 最多的為總七葉皂苷（Total escin)，主要含有七葉皂苷A、B、C和D。在我國根據(jù)液相色譜 出峰時(shí)間的先后，A-D的物質(zhì)分別對應(yīng)escin Ia、escin Ib、isoescin Ia及isoescin Ib0 其中的七葉皂苷A和B是β-型七葉皂苷，其結(jié)構(gòu)式如下式（1)所示。七葉皂苷C和D是 七葉皂苷A和B的C21-羥基上乙酸酯轉(zhuǎn)位到C28-羥基的異構(gòu)體，是Crypto-型（異型） 七葉皂苷，其結(jié)構(gòu)式如下式（2)所示。
[0004]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種七葉皂苷鈉的制備方法，其特征在于，所述方法包括提取和分離純化步驟，所述 提取是將娑羅子粉用0-80%的乙醇或甲醇溶液（優(yōu)選乙醇）進(jìn)行提取，所述分離純化包括 以無機(jī)鈉鹽水溶液為流動相進(jìn)行的離子交換層析。
2. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述提取是使用0-80%的乙醇或甲醇 溶液進(jìn)行多次提取，并且所述乙醇或甲醇溶液的濃度不變或逐次遞減； 優(yōu)選的是，所述提取進(jìn)行三次，第一次提取時(shí)使用0~80 %的乙醇溶液，料液比為 1:3-1:8千克/升，優(yōu)選1:5千克/升；第二次提取時(shí)使用0~80%的乙醇溶液，料液比為 1:2-1:5千克/升；第三次提取時(shí)使用0~80的乙醇溶液，料液比為1:1-1:4千克/升，其 中如果第一、二次提取時(shí)料液比中液體量偏大第三次提取可省略； 更優(yōu)選的是，所述提取包括下述步驟：將娑羅子粉與提取液按料液比1:3-1:8重量體 積比、優(yōu)選1:5千克/升浸泡0. 5-1. 5小時(shí)、常規(guī)回流提取1-2小時(shí)；過濾后得到的濾渣再 按料液比1:3加入同第一次的提取液或比第一次醇濃度略低的提取液常規(guī)回流提取1小 時(shí)，過濾后的濾渣再按料液比1:3加入同第二次的提取液或比第二次醇濃度略低的提取液 常規(guī)回流提取0. 5小時(shí)（若第一、二次提取液醇濃度大于50%，則不需要第三次提?。?，過 濾、棄渣；提取的溫度控制在45°C -80°C ;合并三次濾液。
3. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述分離純化依次包括脫色、離子交換 層析、精制和結(jié)晶步驟； 優(yōu)選的是，所述脫色為活性炭脫色或中性氧化鋁脫色，優(yōu)選脫色后將脫色液離心去沉 淀或靜置澄清，上清過濾，濃縮回收乙醇； 更優(yōu)選的是，所述流動相為PH4~7無機(jī)鹽緩沖液作為平衡液和強(qiáng)酸強(qiáng)堿鹽作為洗脫 液，如以5~IOOmM Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液（pH4~7)作為樣品緩沖液和平衡液A，優(yōu)選 pH5. 7 的 IOmM Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液，以 0? 5 ~2M NaCl-5 ~IOOMNa2HPO4-NaH2PO4緩沖液 作為洗脫液8，優(yōu)選說似(：1-101^ &2即04-似4?04緩沖液；線性梯度洗脫仏液從100%開始 洗脫，逐步遞減到洗脫完變成0% ;B液從0%開始洗脫，逐步遞加到洗脫完變?yōu)?00% )，洗 脫體積為柱床體積的2~5倍； 還優(yōu)選的是，所述離子交換層析步驟包括：裝柱：將離子交換介質(zhì)裝入層析柱內(nèi)，以平 衡液（A液）平衡，將過濾的提取上清液上樣，用平衡液（A液）洗去末結(jié)合的組分，收集穿 過峰（檢測無目標(biāo)物后棄去）；鹽梯度洗脫：以平衡液為A液，以A液+NaCl為B液，線性 梯度洗脫，起始比例：A:B = 100:0 ;終始比例：A:B = 0:100,洗脫時(shí)間依床體積和流速而 定，收集洗脫峰，若吸附量大可以不裝柱而用介質(zhì)直接攪拌吸附，待吸附完全后（被吸附液 中檢測不到七葉皂甙），濾去被吸附液，用平衡液洗去末吸附的雜質(zhì)，裝柱，按前述方法梯度 洗脫或用B液攪拌洗脫三次，收集洗脫液。
4. 如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述精制、結(jié)晶包括醇提或酸沉； 優(yōu)選的是，所述醇提結(jié)晶包括以下步驟：（1)醇沉皂苷：向上清液中邊攪邊加入無水 乙醇至75~85%，靜置；（2)過（抽）濾：將沉淀物過（抽）濾至干，收集濾液；（3)濃縮 回收濾液中乙醇，濃縮液中結(jié)晶出七葉皂甙鈉，過濾或離心收集晶體；(4)向濃縮母液中加 入適量無水乙醇，混勻；（5)濃縮回收乙醇，濃縮液中結(jié)晶出七葉皂甙鈉，過濾或離心收集 晶體；（6)合并收集晶體，加入無水乙醇脫水三次，繼續(xù)抽濾至干，沉淀結(jié)晶物呈疏松狀，色 白；（7)裝盤干燥：結(jié)晶物分裝于烘盤內(nèi)，厚度l-2cm，按常規(guī)真空干燥法在干燥箱內(nèi)烘干， 即制備得七葉皂苷鈉； 所述酸沉包括以下步驟：（1)調(diào)PH :在收集峰液中邊攪拌邊加入稀鹽酸液或醋酸，調(diào)pH 值到1-3,靜置；（2)按前述（2)抽濾或離心、收集沉淀物、（6)無水乙醇脫水、（7)裝盤干燥 制備得七葉皂苷鈉。
5. 如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述七葉皂苷鈉包括七葉皂苷鈉A、七 葉皂苷鈉B、七葉皂苷鈉C和七葉皂苷鈉D ; 優(yōu)選的是，所述七葉皂苷鈉A、B、C、D組分峰面積占比之和為90 %以上（HPLC法），且 A、B、C、D各組分峰面積的百分比符合藥用標(biāo)準(zhǔn)。
6. -種外用制劑，所述外用制劑包括根據(jù)權(quán)利要求1~5中任一項(xiàng)方法制得的七葉皂 苷鈉和藥學(xué)上可接受的藥物載體，優(yōu)選其重量比為1-5 :12-30。
7. 如權(quán)利要求6所述的外用制劑，其特征在于，所述外用制劑為氣霧劑或噴霧劑； 優(yōu)選的是，所述氣霧劑或噴霧劑還包含麻醉藥，優(yōu)選為奴夫卡因。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的外用制劑，其特征在于，對于所述氣霧劑或噴霧劑，精密過濾 后的藥液測定其固定性物含量，應(yīng)在1.0% (W/V)以上；過濾質(zhì)量的監(jiān)控取精密過濾的濾液 200ml，用已稱重的玻砂坩堝過濾，干燥2小時(shí)，稱重，其重量增加彡0.0 lg。
9. 如權(quán)利要求6所述的外用制劑，其特征在于，所述外用制劑用于預(yù)防或治療外傷導(dǎo) 致的組織水腫。
10. 權(quán)利要求1~5中任一項(xiàng)方法制得的七葉皂苷鈉在制備用于預(yù)防或治療外傷導(dǎo)致 的組織水腫的藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種七葉皂苷鈉的制備方法、包含其的外用制劑及其應(yīng)用。具體而言，涉及一種七葉皂苷鈉的制備方法、外用制劑的制備及其在制備預(yù)防或治療外傷導(dǎo)致的組織水腫的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述方法包括提取和分離純化步驟，所述提取為將娑羅子粉用0-80％的乙醇或甲醇溶液(優(yōu)選乙醇)進(jìn)行提取，所述分離純化包括以無機(jī)鈉鹽水溶液為流動相進(jìn)行離子交換層析。本發(fā)明方法制得產(chǎn)品純度高、生產(chǎn)周期短、成本低及無環(huán)境污染等問題，符合制備天然、安全、高純七葉皂苷的發(fā)展趨勢。
【IPC分類】A61P29-00, C07J63-00, C07H15-256, A61P7-10, A61K31-166, A61P23-00, C07H1-08, A61K31-704
【公開號】CN104804060
【申請?zhí)枴緾N201510229253
【發(fā)明人】王增祿, 王多寧, 于愛華, 張伯慶
【申請人】西安藍(lán)綠卓生物科技有限公司
【公開日】2015年7月29日
【申請日】2015年5月7日