新型巴弗洛霉素、其提取微生物和提取方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及巴弗洛霉素類抗生素技術領域，具體而言，涉及一種新型巴弗洛霉素、 其提取微生物和提取方法。
【背景技術】
[0002] 巴弗洛霉素類抗生素的發(fā)現(xiàn)始于20世紀80年代初期，該類抗生素是一類含有16 元環(huán)骨架的多烯大環(huán)內酯類抗生素。同時巴弗洛霉素又是一類在化學結構上極為特殊的大 環(huán)內酯抗生素，其大部分衍生物的側鏈結構中都含有一個六元環(huán)的半縮醛結構。
[0003] 目前已經發(fā)現(xiàn)并報道了 14種該類抗生素，其中，巴弗洛霉素A1、A2、B1、B2、C1、C2、 D、E、F、G、H、I、J，均由國外科學家首先報道，巴弗洛霉素K則由我國科學家首次報道。其 中，巴弗洛霉素D和E的側鏈半縮醛環(huán)呈開環(huán)狀態(tài)，從而有別于其它12種巴弗洛霉素。
[0004] 巴弗洛霉素具有抗細菌、抗真菌、抗腫瘤以及免疫抑制劑功能。某些巴弗洛霉素可 專一性抑制空泡型ATP酶。其中，巴弗洛霉素A1應用最廣泛，此外巴弗洛霉素A1還具有抗 瘧疾活性。巴弗洛霉素B1和C1是潛在的抗腫瘤藥物，可用來治療骨溶性疾病。巴弗洛霉 素D和E具有很強殺蟲活性。巴弗洛霉素K則具有廣譜抗真菌活性。
[0005] 巴弗洛霉素類抗生素具有共同的16元環(huán)骨架結構，各衍生物間的差別主要在于 其側鏈結構和主體骨架結構上取代基的不同。鑒于巴弗洛霉素所具備的對常見植物病原真 菌及格蘭仕陽性病原細菌的抗性，尋找新型結構的巴弗洛霉素并將其應用到農業(yè)生產的植 物病害防控中是人們亟待解決的一個技術問題。
[0006] 有鑒于此，特提出本發(fā)明。

【發(fā)明內容】

[0007] 本發(fā)明的第一目的在于提供一種新型的新型巴弗洛霉素，該化合物的分子式為 C4(lH65N3On，其分子量為763. 97 ;該化合物具有廣譜抑菌活性，可以很好的應用到植物病害 防治中。
[0008] 本發(fā)明的第二目的在于提供一種所述的新型巴弗洛霉素的生產菌株，該菌株的分 類命名為卡伍爾鏈霉菌（Streptomycescavourensis)。
[0009] 本發(fā)明的第三目的在于提供一種利用所述的生產菌株制取新型巴弗洛霉素的方 法。
[0010] 為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術方案：
[0011] 本發(fā)明提供了一種新型巴弗洛霉素，其結構式為：
[0012]
【主權項】
1. 一種新型巴弗洛霉素，其特征在于，其結構式為：
2. -種用于提取權利要求1所述的新型巴弗洛霉素的微生物，其特征在于，所述微生 物的分類命名為卡伍爾鏈霉菌（Streptomyces cavourensis);其保藏單位為：中國微生物 菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中 國科學院微生物研宄所，保藏日期為：2014年11月06日；保藏編號為：CGMCC No. 9946。
3. -種根據(jù)權利要求2所述的微生物提取新型巴弗洛霉素的方法，其特征在于，包括 以下步驟： 1) 、將篩選分離得到的卡伍爾鏈霉菌以劃線的方式接種于菌種斜面培養(yǎng)基于26-30°C 避光培養(yǎng)至長出成熟孢子，得到斜面種子； 2) 、將所述斜面種子接種到一級液體種子培養(yǎng)基中，于26-30°C搖床培養(yǎng)22-26小時， 得到一級液體種子； 3) 、將所述一級液體種子接種到二級液體種子培養(yǎng)基中，于26-30°C搖床培養(yǎng)22-26小 時，得到二級液體種子； 4) 、將所述二級液體種子接種到發(fā)酵液體培養(yǎng)基中，于26-30°C搖床培養(yǎng)92-100小時， 得到發(fā)酵液； 5) 、收集所述發(fā)酵液，在攪拌條件下加入酸，并調節(jié)至pH為2. 0-3. 5,離心收集下層沉 淀物，得到粗提物； 6) 、利用丙酮抽提所述粗提物2-3次，得到丙酮抽提液，并依次在40-45°C水浴條件下 進行減壓蒸發(fā)除去丙酮，鼓風干燥，得到水相烘干物； 7) 、將所述水相烘干物利用丙酮復溶后抽濾，得到丙酮抽濾液，并將所述丙酮抽濾液于 40-45°C的水浴條件下濃縮至無沉淀析出，得到丙酮濃縮液； 8) 、在所述丙酮濃縮液中按照所含丙酮體積的10-15倍、1/6-1/5分別加入蒸餾水以及 非極性大孔樹脂，并調PH為8-8. 5后吸附3-5小時，過濾收集吸附后大孔樹脂； 9) 、按照體積倍數(shù)計，向所述吸附后大孔樹脂加入5-10倍的80-90%的丙酮水溶液后 調pH為8-9后解析2-4小時，收集解析液并于40°C _45°C水浴條件下減壓蒸發(fā)掉所述解吸 液中的丙酮，得到剩余水相； 10) 、將所述剩余水相用等體積的乙酸乙酯萃取后靜置分層，取上層乙酸乙酯；并將所 述上層乙酸乙酯于40°C -45°C水浴條件下蒸干，得到蒸干提取物； 11) 、向所述蒸干提取物中滴加乙酸乙酯，直至蒸干提取物全部溶解，再加入體積為滴 加所用乙酸乙酯20-30倍的正己烷，于-KTC-0°C重結晶8-15小時后進行抽濾，收集重結 晶后抽濾液； 12)、將所述重結晶后抽濾液于40°C-45°C水浴條件下減壓蒸干，再次滴加乙酸乙酯進 行溶解后，繼續(xù)加入體積為所滴加乙酸乙酯50-60倍的正己烷，于-KTC_0°C重結晶8-15 小時，待析出沉淀后進行抽濾，得到粉末狀新型巴弗洛霉素。
4. 根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，在步驟1)中，所述菌種斜面培養(yǎng)基按照重 量份數(shù)計，其原料組分包括：葡萄糖1. 6-2. 0份、蛋白胨0. 3-0. 6份、黃豆餅粉0. 2-0. 4份、 酵母膏0. 1份、碳酸鈣0. 025份，瓊脂粉1. 8-2. 2份。
5.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，所述一級液體種子培養(yǎng)基按 照重量份數(shù)計，其原料組份包括：葡萄糖1. 6-2. 0份、蛋白胨0. 3-0. 6份、黃豆餅粉0. 2-0. 4 份、酵母膏〇.1份、碳酸鈣〇.025份。
6. 根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，在步驟3)中，所述二級液體種子培養(yǎng)基按 照重量份數(shù)計，其原料組份包括：葡萄糖1. 6-2. 0份、蛋白胨0. 3-0. 6份、黃豆餅粉0. 2-0. 4 份、酵母膏〇. 1份、碳酸鈣〇. 025份。
7. 根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，在步驟4)中，所述發(fā)酵液體培養(yǎng)基按照重 量份數(shù)計，其原料組份包括：葡萄糖1. 8-2. 2份、蛋白胨0. 5-0. 7份、黃豆餅粉0. 2-0. 4份、 磷酸氫二鉀（K2HPO4) 0. 02-0. 04份、硫酸鎂（MgSO4) 0. 008-0. 012份、酵母膏0. 15份、碳酸鈣 0.02 份。
8. 根據(jù)權利要求3-7任一項所述的方法，其特征在于，在步驟6)中，每次抽提的時間為 3-4小時，且鼓風干燥的溫度為40-50°C。
9. 根據(jù)權利要求8所述的方法，其特征在于，在步驟9)中，所述蒸發(fā)采用旋轉蒸發(fā)儀進 行。
10. 根據(jù)權利要求9所述的方法，其特征在于，在步驟10)中，所述萃取的次數(shù)為2-3 次。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種新型巴弗洛霉素、其提取微生物和提取方法。屬于巴弗洛霉素類抗生素技術領域。該新型巴弗洛霉素化合物的分子式為C40H65N3O11，其分子量為763.97，是一種新型結構的巴弗洛霉素，該抗生素對多種農業(yè)生產上的常見植物病原真菌及格蘭仕陽性病原菌(如辣椒炭疽、稻瘟、水稻白葉枯、番茄灰霉、番茄早疫以及甜瓜枯萎等病原菌)具有強烈的抗性，尤其對農業(yè)生產上極難防治的馬鈴薯晚疫病具有較強抗性，抑菌譜廣，可作為一種新型農用抗生素使用。CGMCC No.994620141106
【IPC分類】C12R1-465, C07D407-06, C12P17-16, C12N1-20
【公開號】CN104817547
【申請?zhí)枴緾N201510117541
【發(fā)明人】黃永春
【申請人】農業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2015年3月17日