一株膠紅酵母及其在發(fā)酵生產(chǎn)海紅蝦青素中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株膠紅酵母及其在發(fā)酵生產(chǎn)海紅蝦青素 中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 海紅蝦青素是一種類胡蘿卜素，具有極強(qiáng)的抗氧化能力和生物著色能力，已廣泛 應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、化妝品、飼料等許多領(lǐng)域。在預(yù)防心腦血管疾病、保護(hù)眼睛和中樞神經(jīng) 系統(tǒng)、防紫外線輻射、抑制腫瘤、抗炎、緩解運(yùn)動(dòng)疲勞等方面具有較高的應(yīng)用價(jià)值。海紅蝦 青素，一種具有高抗氧化能力的類胡蘿卜素，薄層層析時(shí)其迀移率與天然蝦青素酯接近，抗 氧化能力也與天然左旋蝦青素接近而得名，DPPH法檢測(cè)其抗氧化能力強(qiáng)于天然左旋蝦青素 20~40%左右。
[0003] 蝦青素的制備方法，已知有化學(xué)合成法、從水產(chǎn)廢物提取或藻類中提取的方法、利 用微生物進(jìn)行生產(chǎn)的方法等。化學(xué)合成法，生產(chǎn)成本較高，許多國家不允許使用合成蝦青 素用于飼料添加劑方面；從水產(chǎn)廢物提取，原料來源廣泛、成本低，但生產(chǎn)易受季節(jié)限制，生 產(chǎn)條件要求苛刻，生產(chǎn)成本高，產(chǎn)量較低，產(chǎn)品純度不高；從藻類中提取，藻類中的蝦青素含 量較高，原料成本較低。但藻類的生長條件苛刻，對(duì)水質(zhì)、環(huán)境及光的要求很高，大規(guī)模生產(chǎn) 依然存在難度；利用微生物進(jìn)行生產(chǎn)的方法，采用糖質(zhì)原料發(fā)酵生產(chǎn)，利于大規(guī)模高密度生 產(chǎn)，而且不受地域和氣候的限制，生產(chǎn)成本相對(duì)低廉。
[0004] 近年來，國內(nèi)外對(duì)蝦青素及類似產(chǎn)品的需求量越來越大，具有廣闊的市場(chǎng)前景。目 前美國、加拿大、歐盟等國的許多生物技術(shù)公司正致力于開發(fā)生產(chǎn)這類產(chǎn)品，但遠(yuǎn)不能滿足 市場(chǎng)需求，故價(jià)格較高。因此加緊對(duì)海紅蝦青素產(chǎn)品的研制開發(fā)，對(duì)于增強(qiáng)國際競(jìng)爭(zhēng)力，有 十分重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一株膠紅酵母（Rhodotorula mucilaginosa) GH101，保藏編號(hào)為：CGMCC No. 10123。
[0006] 本發(fā)明還提供了所述的膠紅酵母在發(fā)酵生產(chǎn)海紅蝦青素中的應(yīng)用。
[0007] 所述膠紅酵母在發(fā)酵生產(chǎn)海紅蝦青素中的應(yīng)用，通過以下步驟實(shí)現(xiàn)：將所述的膠 紅酵母先后進(jìn)行斜面培養(yǎng)和種子培養(yǎng)，得到活化種子液；按照體積百分比2-10%的接種 量將種子液接種到含海紅蝦青素發(fā)酵培養(yǎng)基中，于25-33°C，pH5. 5-7. 0,120-160rpm振蕩 培養(yǎng)60-76h，得到含有海紅蝦青素的膠紅酵母菌體，所述含海紅蝦青素發(fā)酵培養(yǎng)基成分 為：葡萄糖6-48g/L，酵母粉l-8g/L，尿素0. 4-2g/L，磷酸二氫鉀0. 1-0. 8g/L，磷酸氫二鉀 0? 1-0. 8g/L，氯化鈉 l-3g/L，其余成分為水，pH5. 5-6. 8。
[0008] 優(yōu)選地，所述的斜面培養(yǎng)溫度25-33°C，培養(yǎng)時(shí)間60-76h，斜面培養(yǎng)基成分為：麥 芽浸粉 130. lg/L，蒸餾水 1000g/L，瓊脂 15-20g/L，調(diào)節(jié) pH5. 5-7. 0。
[0009] 優(yōu)選地，所述種子培養(yǎng)溫度25-30°C，培養(yǎng)時(shí)間24-36h，搖床轉(zhuǎn)速140~160r/ min，種子培養(yǎng)基成分為：葡萄糖10-12g/L，酵母粉2-3g/L，氯化鈉6-9g/L，其余成分為水， pH5. 5-7. 0〇
[0010] 本發(fā)明的膠紅酵母菌（英文名Rhodotorula mucilaginosa)，保藏于中國微生物 菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏 日期：2014年12月01日，保藏編號(hào)：CGMCC No. 10123。
[0011] 對(duì)本發(fā)明所分離的菌株的18S rRNA基因序列進(jìn)行測(cè)序，將獲得的18SrRNA基因 序列輸入GenBank，通過Blastn程序?qū)?shù)據(jù)庫中的所有序列進(jìn)行比較分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)本發(fā) 明的18S rRNA基因序列與膠紅酵母屬的已有模式菌株具有較高的相似性，如表1，其中與 Rhodotorula mucilaginosa isolate ZH9的序列相似性為100%，并與多株膠紅酵母的序 列相似性在98%，從而確定分離出來的菌株GH101為膠紅酵母屬的新菌株系，并命名為膠 紅酵母（Rhodotorula mucilaginosa)GH101。
[0012] 進(jìn)行18S rRNA擴(kuò)增，測(cè)序序列為：
[0013] CATCCGTATTGTTCAAATTTTAAGCATAACAGTGAAACTGCGAATGGCTCATTAAATCAGTCATAGTTT ATTTGATGGTACCTTACTACATGGATAACTGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCTGAAAAATCCCGACTTCTGGA AGGGATGTATTTATTAGATCCAAAACCAATGGCCTTCGGGTCCCTATGGTGAATCATGATAACTGCTCGAATCGCAT GGCCTTGCGCCGGCGATGCTTCATTCAAATATCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGAGGCCTACCATGGTG ATGACGGGTAACGGGGAATAAGGGTTCGATTCCGGAGAGAGGGCCTGAGAAACGGCCCTCAGGTCTAAGGACACGCA GCAGGCGCGCAAATTATCCCCTGGCAACACTTTGCCGAGATAGTGACAATAAATAACAATGCAGGGCTCTTACGGGT CTTGCAATTGGAATGAGTACAATTTAAATCCCTTAACGAGGATCAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCG GTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAATTGTTGCCGTTAAAAAGCTCGTAGTCGAACTTCGGGCTCTGTCAGC CGGTCCGCCTTCTTGGTGTGTACTTGTTTGACGGAGCCTTACCTCCTGGTGAACGGCGATGTCCTTTACTGGGTGTC GTCGCAAACCAGGACTTTTACTTTGAAAAAATTAGAGTGTTCAAAGCAGGCCTTTGCCCGAATACATTAGCATGGAA TAATAAAATAGGACGCGCGTTCCCATTTTGTTGGTTTCTGAGATCGCCGTAATGATTAATAGGGATAGTTGGGGGCA TTTGTATTCCGTCGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTGCCGGAAGACAAACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGT TTTCATTGATCAAGAACGAAGGAAGGGGGATCGAAAACGATTAGATACCGTTGTAGTCTCTTCTGTAAACTATGCCA ATTGGGGATCGGTACAGGATTTTTAATGACTGTATCGGCACCCGAAGAGAAATCTTTAAATGAGGTTCGGGGGGGAG TATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAATTGACGGAAGGGCACCACCAGGTGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACT CAACACGGGGAAACTCACCAGGTCCAGACACAATAAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCTTGATCTTGTGGTTGG TGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAATTCCGATAACGAACGAG。經(jīng)過Blast序列 比對(duì)。
[0014] 表1基因序列比對(duì)
[0015]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一株膠紅酵母（Rhodotorula mucilaginosa)GH101，保藏編號(hào)為：CGMCC No. 10123。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠紅酵母在發(fā)酵生產(chǎn)海紅蝦青素中的應(yīng)用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的膠紅酵母在發(fā)酵生產(chǎn)海紅蝦青素中的應(yīng)用，其特征在于，通 過以下步驟實(shí)現(xiàn)：將所述的膠紅酵母先后進(jìn)行斜面培養(yǎng)和種子培養(yǎng)，得到活化種子液；按 照體積百分比2-10%的接種量將種子液接種到含海紅蝦青素發(fā)酵培養(yǎng)基中，于25-33?， pH5. 5-7. 0,120-160rpm振蕩培養(yǎng)60-76h，得到含有海紅蝦青素的膠紅酵母菌體，所述含海 紅蝦青素發(fā)酵培養(yǎng)基成分為：葡萄糖6-48g/L，酵母粉l-8g/L，尿素0. 4-2g/L，磷酸二氫鉀 0· 1-0. 8g/L，磷酸氫二鉀(λ 1-0. 8g/L，氯化鈉 l-3g/L，其余成分為水，ρΗ5· 5-6. 8。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的膠紅酵母在發(fā)酵生產(chǎn)海紅蝦青素中的應(yīng)用，其特征在于， 所述的斜面培養(yǎng)溫度25-33°C，培養(yǎng)時(shí)間60-76h，斜面培養(yǎng)基成分為：麥芽浸粉130. lg/L， 蒸餾水 1000g/L，瓊脂 15-20g/L，調(diào)節(jié) ρΗ5· 5-7. 0。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的膠紅酵母在發(fā)酵生產(chǎn)海紅蝦青素中的應(yīng)用，其特征在于，所 述種子培養(yǎng)溫度25-30°C，培養(yǎng)時(shí)間24-36h，搖床轉(zhuǎn)速140-160r/min，種子培養(yǎng)基成分為： 葡萄糖10-12g/L，酵母粉2-3g/L，氯化鈉6-9g/L，其余成分為水，ρΗ5· 5-7. 0。
【專利摘要】本申請(qǐng)公開了一株膠紅酵母(Rhodotorula mucilaginosa)GH101，本發(fā)明還公開了所述膠紅酵母在發(fā)酵生產(chǎn)海紅蝦青素中的應(yīng)用，通過以下步驟實(shí)現(xiàn)：將所述的膠紅酵母先后進(jìn)行斜面培養(yǎng)和種子培養(yǎng)，得到活化種子液；按照體積百分比2-10％的接種量將種子液接種到含海紅蝦青素發(fā)酵培養(yǎng)基中，于25-33℃，pH5.5-7.0，120-160rpm振蕩培養(yǎng)60-76h，得到含有海紅蝦青素的膠紅酵母菌體。本發(fā)明提供的膠紅酵母可用于發(fā)酵生產(chǎn)海紅蝦青素，利用膠紅酵母生產(chǎn)海紅蝦青素，并對(duì)生產(chǎn)菌株進(jìn)行反復(fù)篩選，獲得一株生長繁殖力強(qiáng)、海紅蝦青素產(chǎn)量較高的菌株，對(duì)蝦青素的工業(yè)化生產(chǎn)提供有良好的應(yīng)用前景。CGMCC NO.1012320141201
【IPC分類】C12N1-16, C12P23-00
【公開號(hào)】CN104830703
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510242747
【發(fā)明人】魏升寧, 張文麗, 孫常明, 程振偉, 張美麗, 李紀(jì)豐
【申請(qǐng)人】威海利達(dá)生物科技有限公司
【公開日】2015年8月12日
【申請(qǐng)日】2015年5月13日