適用于石油降解的菌株aw29和其用途以及海底沉降石油降解菌劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株適用于石油降解的菌株AW29(Bacillusthermotolerans，CGMCCNo. 10352)以及利用該菌株海洋環(huán)境治理領(lǐng)域的 應(yīng)用，尤其是涉及石油污染后引起的石油污染的生物治理領(lǐng)域的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來隨著海洋石油的運(yùn)輸、開采、裝卸、加工和使用，海洋石油泄漏事件時(shí)有發(fā) 生，海洋石油污染日益加劇。石油對生物多樣性的破壞嚴(yán)重，包括人們常見的各種魚類、 鳥類以及其它生物都受到了嚴(yán)重影響，石油可沾附在魚鰓上，使魚窒息，抑制水鳥產(chǎn)卵和孵 化，破壞其羽毛的不透水性，降低水產(chǎn)品質(zhì)量；同時(shí)，泄露的石油可形成油膜，阻礙水體的復(fù) 氧作用，影響海洋浮游生物生長，破壞海洋生態(tài)平衡；此外還可破壞海濱風(fēng)景，影響海濱美 學(xué)價(jià)值。
[0003] 目前，針對于石油污染，尤其是大面積石油泄漏，通常采用的應(yīng)急措施除了采油人 工打撈等物理方法，還采用加入消油劑使石油乳化，迅速沉降的方法以恢復(fù)海面暫時(shí)的清 潔，雖然這一方法短時(shí)看似起到了治理的效果，但背后卻隱藏著危機(jī)，其會(huì)造成二次化學(xué)污 染。
[0004] 因此，實(shí)施物理化學(xué)方法進(jìn)行生態(tài)環(huán)境的重建幾乎不可能實(shí)現(xiàn)，生物修復(fù)海洋污 染成為唯一可行的途徑。但相對于陸地，海洋植物相對匱乏，污染海洋的生物修復(fù)還主要依 賴海洋微生物的降解作用，尤其依賴于已經(jīng)適應(yīng)海底環(huán)境的各種土著石油降解微生物。這 些石油降解微生物在海底能夠利用石油作為其唯一碳源，克服海底黑暗、低溫、寡養(yǎng)、缺氧 的極端條件，以石油為食，將石油進(jìn)行分解轉(zhuǎn)化，從而改變而海底荒漠化問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了解決石油泄露引發(fā)的污染問題，如海面的漂浮石油的污染問題；又如化學(xué)治 理引發(fā)的二次污染，尤其是為了解決石油污染后引起的海底沉降石油污染及繼而引發(fā)的海 底荒漠化問題，發(fā)明人設(shè)法獲得高效的海洋土著石油微生物并進(jìn)行研宄，最終得到了一株 適用于石油降解的菌株AW29。發(fā)明人在要求保護(hù)此菌株的同時(shí)要求對其用途進(jìn)行保護(hù)。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0007] -株適用于石油降解的菌株AW29,該菌株的建議分類命名為Bacillus thermotolerans。其 16SrRNA序列如SEQIDNo. 1 所不。
[0008] 所述的適用于石油降解的菌株AW29是發(fā)明人從自然界中分離得到的一株芽孢桿 菌。菌株AW29從大連新港石油污染海域采集的海底沉積物中分離獲得，采集者姓名劉長 建、采集者聯(lián)系方式0411-87656046。
[0009] 所述的適用于石油降解的菌株AW29已提交保藏，具體保藏信息如下：
[0010] 保藏單位名稱：中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心（CGMCC);
[0011] 保藏單位地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研宄所；
[0012] 保藏日期：2015年01月13日；
[0013]保藏編號：CGMCCNo. 10352;
[0014] 所述的適用于石油降解的菌株AW29的形態(tài)及生理生化特征為：菌落圓形，光滑全 緣，近透明；菌體圓形或橢圓形，表面光滑無紋飾，大小0. 6-0. 8ym。革蘭氏陽性細(xì)菌，產(chǎn)生 芽孢，氧化酶、過氧化氫酶陽性，生長溫度范圍15-65°C，最適溫度50°C，pH范圍5. 0-9. 0,最 適8. 0-8. 5,在NaCl濃度0-10%范圍內(nèi)均能生長，最適NaCl濃度3% ;兼性厭氧，好氧和厭 氧情況下均可生長。厭氧時(shí)，以蒽醌2, 6-二磺酸（AQDS)作為氧化還原的電子轉(zhuǎn)移中間體， NO3-作為電子受體。
[0015] 所述的菌株AW29的用途為以石油降解的方式進(jìn)行石油污染的治理。
[0016] 進(jìn)一步的，所述的菌株AW29用于處理石油污染后產(chǎn)生的海底沉降石油。
[0017] 優(yōu)選的，該用途是以可沉降菌劑顆粒的形式實(shí)現(xiàn)的。
[0018] 發(fā)明人的第一個(gè)技術(shù)構(gòu)思為：研發(fā)一種石油降解微生物的載體，不僅能夠?yàn)榫?AW29提供寄居的空間，同時(shí)該載體可為菌株AW29提供緩釋營養(yǎng)并且具備沉降特性。
[0019] 本發(fā)明的此目的通過下述方案實(shí)現(xiàn)：
[0020] 海底沉降石油降解菌劑，是將適于石油降解的菌種AW29的發(fā)酵料與石油降解微 生物載體的制備原料按照1:5-15的質(zhì)量比，優(yōu)選1:10的質(zhì)量比混合后造粒烘干而得；進(jìn)一 步的，使最終的菌劑濃度為l〇1(lCfu/ml以上為佳；
[0021] 所述的石油降解微生物載體的制備原料及其配比包括：
[0022]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一株適用于石油降解的菌株AW29,其特征在于，其保藏編號為CGMCC No. 10352,其 16SrRNA 序列如 SEQ ID No. 1 所示。
2. 如權(quán)利要求1所述的一株適用于石油降解的菌株AW29,形態(tài)及生理生化特征：菌落 圓形，光滑全緣，近透明；菌體圓形或橢圓形，表面光滑無紋飾，大小0. 6-0. 8 μm，革蘭氏陽 性細(xì)菌，產(chǎn)生芽孢，氧化酶、過氧化氫酶陽性，生長溫度范圍15-65°C，最適溫度50°C，pH范 圍5. 0-9. 0,最適8. 0-8. 5,在NaCl濃度0-10%范圍內(nèi)均能生長，最適NaCl濃度3% ;兼性 厭氧，好氧和厭氧情況下均可生長。
3. 如權(quán)利要求1所述的一株適用于石油降解的菌株AW29在以石油降解的方式進(jìn)行石 油污染的治理的用途。
4. 一種海底沉降石油降解菌劑，是將權(quán)利要求1所述的一株適于石油降解的菌種AW29 的發(fā)酵料與石油降解微生物載體的制備原料按照1:5-15的質(zhì)量比，優(yōu)選1:10的質(zhì)量比混 合后造粒烘干而得； 所述的石油降解微生物載體的制備原料及其配比包括： 〇
5. 如權(quán)利要求4所述的海底沉降石油降解菌劑，其特征在于：適于石油降解的菌種 AW29的發(fā)酵料是將活化好的適于石油降解的菌種AW29培養(yǎng)料與繁殖培養(yǎng)基按照1:5-10質(zhì) 量比，優(yōu)選1:10的質(zhì)量比混合；于20~50 °C、優(yōu)選37 °C下固體發(fā)酵3~7天，優(yōu)選發(fā)酵5 天而得菌種AW29的發(fā)酵料； 所述的活化好適于石油降解的菌種AW29培養(yǎng)料是在LB斜面挑取待活化適于石油降解 的菌株接入活化液體LB培養(yǎng)基中25-50°C下、優(yōu)選37°C進(jìn)行活化而得；從而得到活化后菌 體濃度為l〇1(lcfu/ml的的培養(yǎng)料；所述活化液體LB培養(yǎng)基為：蛋白胨10g/L，NaCl 10g/L， 酵母膏 5g/L，pH 7· 0 ~7· 5 ;121°C，30min 滅菌； 所述的繁殖培養(yǎng)基固態(tài)原料及配比：
繁殖培養(yǎng)基成品的濕度優(yōu)選55 %。
6. 如權(quán)利要求4所述的海底沉降石油降解菌劑，其特征在于：所述的造粒烘干是將混 合料加入攪拌機(jī)中并加入粘結(jié)劑攪拌，加水充分混合使含水量低于25wt %，擠壓造粒，80°C 以下順流烘干IOmin以下；冷卻后即得菌劑，保證菌劑中活菌數(shù)達(dá)到109cfu/ml。
7. 如權(quán)利要求6所述的海底沉降石油降解菌劑，其特征在于：所述的順流烘干是將濕 顆粒通過烘干機(jī)前部的中間倉進(jìn)入烘干筒內(nèi)，與此同時(shí)熱風(fēng)以順流方式進(jìn)入烘干筒，在旋 轉(zhuǎn)筒體的內(nèi)抄板帶動(dòng)下，物料被抄起，形成分撒均勻的較密集的料幕。
8. 如權(quán)利要求4所述的海底沉降石油降解菌劑，其特征在于：所述的石油降解微生物 載體的制備原料均為20目以下的細(xì)粉。
9. 如權(quán)利要求4所述的海底沉降石油降解菌劑，其特征在于：所述繁殖培養(yǎng)基的制備 原料均為20目以下的細(xì)粉。
【專利摘要】適用于石油降解的菌株AW29和其用途以及海底沉降石油降解菌劑，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，發(fā)明人提供一株適用于石油降解的菌株AW29，所述的菌株AW29的用途為以石油降解的方式進(jìn)行石油污染的治理。以可沉降菌劑顆粒的形式實(shí)現(xiàn)的。菌劑顆粒按照以下步驟獲得活化培養(yǎng)料、制繁殖培養(yǎng)基；菌種擴(kuò)培制適于石油降解的菌種的發(fā)酵料；混合造粒，得菌劑顆粒；本發(fā)明首次從海洋土著微生物中篩選出適用于石油降解的菌株AW29；研發(fā)的一種海底石油降解菌劑，不僅使石油降解微生物擁有寄居的空間，同時(shí)微生物可獲得緩釋的營養(yǎng)；該降解菌劑具備沉降特性，解決了石油污染后引起的海底沉降石油污染及繼而引發(fā)的海底荒漠化問題。1035220150113
【IPC分類】C02F3-34, C12N11-10, C12N11-14, C12R1-07, C02F101-32, C12N1-20
【公開號】CN104830720
【申請?zhí)枴緾N201510218039
【發(fā)明人】劉秋, 于基成, 劉長建, 潘俊華
【申請人】大連民族學(xué)院
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年4月30日