一種冬蟲夏草分子身份證及鑒定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥材來源品種鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種冬蟲夏草分子身份證及 鑒定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 冬蟲夏草（OphiocordycepsSinensis)為麥角菌科真菌冬蟲夏草菌寄生在蝙蝠 蛾科昆蟲幼蟲上的子座和幼蟲尸體的干燥復(fù)合體。是我國珍稀名貴中藥材。由于冬蟲夏 草本身的生境特殊，生長緩慢，天然產(chǎn)量有限，加上生態(tài)環(huán)境的破壞和長期過度采挖，其 自然資源逐漸枯竭。目前冬蟲夏草價格比黃金還貴，市場上常出現(xiàn)其混偽品。如：古尼 蟲草C.gunnii，蝴花C.cicadae，蛹蟲草C.militaris，下垂蟲草0?nutans,羅伯茨蟲草 O.robertsii等。由于冬蟲夏草與其近緣種、混偽品外形類似，傳統(tǒng)的性狀鑒別對冬蟲夏草 與其近緣種的鑒定有一定困難。這就需要尋找到一種穩(wěn)定可靠的方法將冬蟲夏草藥材加以 鑒定區(qū)分。
[0003] 現(xiàn)有的對冬蟲夏草的傳統(tǒng)鑒別方法在實際運用中要進行準確鑒別難度極大，且存 在主觀性大，通用性差，且對觀察者經(jīng)驗要求高等缺陷。而分子鑒別手段比較準確可靠，但 都需要測序或是大量PCR和電泳及后期數(shù)據(jù)處理，也不利于規(guī)模化標準化建立。
[0004] 因此有必要開發(fā)一種結(jié)果準確且鑒定過程簡便快速的冬蟲夏草分子鑒定方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于克服傳統(tǒng)鑒別技術(shù)中存在的上述缺陷，提供一種結(jié)果準確靈 敏，鑒定過程簡便快速的冬蟲夏草鑒定方法。
[0006] 為達到以上目的，本發(fā)明的發(fā)明人在對大量的樣品的篩選過程中，尋找出能夠?qū)?正品冬蟲夏草與混偽品進行精確區(qū)分的正品冬蟲夏草的特異分子身份證序列，并提供了對 冬蟲夏草鑒別較為快速，簡便，廉價的方法。
[0007] 具體的，本發(fā)明提供了一種冬蟲夏草分子身份證，所述分子身份證中含有如SEQ IDNo.1和/或SEQIDNo. 2所示的核苷酸序列。
[0008] 可選的，所述分子身份證為SEQIDNo.1和/或SEQIDNo. 2所示的核苷酸序列。
[0009] 在本發(fā)明的一種實施方式中，所述分子身份證為SEQIDNo.1所不的序列。
[0010] 在本發(fā)明的另一種實施方式中，所述分子身份證為SEQIDNo. 2所不的序列。
[0011] 本發(fā)明提供了一種冬蟲夏草的鑒定方法，其中，所述方法包括檢測樣品基因組DNA 中是否存在本發(fā)明所述的分子身份證。
[0012] 可選的，所述方法包括如下步驟：
[0013]1)以待測樣品基因組DNA為模板，對所述分子身份證進行PCR擴增，獲得擴增產(chǎn) 物；
[0014] 2)對擴增產(chǎn)物進行測序，拼接后去除引物區(qū)獲得擴增片段，檢測擴增片段中是否 存在所述分子身份證。
[0015]當存在SEQIDNo. 1和/或SEQIDNo. 2所示的片段時可以判定被測樣品中存在 冬蟲夏草成分或為冬蟲夏草。相反，如果既不存在SEQIDNo. 1所示的片段也不存在SEQ IDNo. 2所示的片段時，判定被測樣品為偽品。
[0016]本發(fā)明對于PCR所使用的引物無特別的限制，只要能夠?qū)λ龇肿由矸葑C進行擴 增即可，為了獲得最佳的鑒定效果，所述PCR擴增使用的引物為：
[0017]ITSF5' -GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3，（SEQIDNo. 3 所示的核苷酸序列），
[0018] ITSR 5' -TCCTCCGCTTAITGATATGC-3' （SEQ IDNo. 4 所示的核苷酸序列）。
[0019]可選的，所述PCR擴增的反應(yīng)程序為：
[0020]
【主權(quán)項】
1. 冬蟲夏草分子身份證，其特征在于，所述分子身份證中含有如SEQ ID No. 1和/或 SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分子身份證，其特征在于，所述分子身份證為SEQ ID No. 1和 /或SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列。
3. -種冬蟲夏草鑒定方法，其特征在于，所述方法包括檢測樣品基因組DNA中是否存 在權(quán)利要求1-2中任意一項所述的分子身份證。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的鑒定方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟： 1) 以待測樣品基因組DNA為模板，對所述分子身份證進行PCR擴增，獲得擴增產(chǎn)物； 2) 對擴增產(chǎn)物進行測序，拼接后去除引物區(qū)獲得擴增片段，檢測擴增片段中是否存在 所述分子身份證。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，檢測擴增片段中是否存在SEQ ID No. 1和 /或SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列。
6. 權(quán)利要求1-2所述的分子身份證序列或權(quán)利要求3-5中任意一項所述的鑒定方法在 冬蟲夏草鑒定中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種冬蟲夏草子身份證，所述分子身份證中含有如SEQ ID No.1和/或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。利用本發(fā)明所提供的分子身份證和方法可以準確的將冬蟲夏草與形態(tài)特征相似的偽品區(qū)分開，本發(fā)明所提供的方法適用性更廣，能檢測所有能提取出DNA的任何樣品。因此，能夠?qū)崿F(xiàn)冬蟲夏草原藥材及菌絲體的快速、準確鑒定。
【IPC分類】C12N15-11, C12Q1-68
【公開號】CN104830970
【申請?zhí)枴緾N201510117046
【發(fā)明人】韓建萍, 向麗, 廖保生, 陳士林
【申請人】中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年3月17日