一種酸性蛋白酶培養(yǎng)基的制作方法
【專(zhuān)利說(shuō)明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及酸性蛋白酶培養(yǎng)基的技術(shù)領(lǐng)域。
【【背景技術(shù)】】
[0002]酸性蛋白酶是由隆科特黑曲霉優(yōu)良菌種經(jīng)發(fā)酵精制提煉而成，它能在低PH條件下，有效水解蛋白質(zhì)，廣泛應(yīng)用于酒精、白酒、啤酒、釀造、食品加工、飼料添加、皮革加工等行業(yè)。酸性蛋白酶是一類(lèi)斷裂肽鏈的水解酶，其PH在2到4左右，主要來(lái)源于動(dòng)物的器臟，研宄比較徹底的是胃蛋白酶，但是通過(guò)改善培養(yǎng)基的配方，提高菌株的產(chǎn)酶量是研宄尚未報(bào)道的。
【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0003]本發(fā)明的目的就是解決現(xiàn)有技術(shù)中的問(wèn)題，提出一種酸性蛋白酶培養(yǎng)基，具有高產(chǎn)量，高酶活，提高發(fā)酵水平、增加酶活、高效合成蛋白酶等優(yōu)點(diǎn)。
[0004]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出了一種酸性蛋白酶培養(yǎng)基，包括以下組分且各組分的比例為:玉米粉:7份?12份，魚(yú)粉:11份?14份，豆餅粉:25份?35份，磷酸氫二鉀:2份?7份，氯化媽:4份?6份，氯化錢(qián):15份?30份，氯化鈉:I份?4份，氧化1?:20份?50份，組合酶:10份?30份，培養(yǎng)基水解液:5份?15份，碳源補(bǔ)充劑:6份?14份，氮源補(bǔ)充劑:4份?6份，能量補(bǔ)充劑:3份?15份，表面活性劑:5份?15份，氧載體:5份?10份。
[0005]作為優(yōu)選，所述組合酶是纖維素酶、蝸牛酶、溶菌酶的混合液，纖維素酶、蝸牛酶、溶菌酶的比例為6.5:2.4:1.3。
[0006]作為優(yōu)選，所述碳源補(bǔ)充劑采用糊精、馬鈴薯淀粉、可溶性淀粉、小麥粉、麩皮中的任意一種。
[0007]作為優(yōu)選，所述氮源補(bǔ)充劑采用蛋白胨、酵母膏、玉米漿、黃豆粉、豆餅水解液中的任意一種。
[0008]作為優(yōu)選，所述能量補(bǔ)充劑采用磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、中的任意一種。
[0009]作為優(yōu)選，所述表面活性劑采用芐苯氧基氯化銨、壬基酚聚氧乙烯醚中任意一種。
[0010]作為優(yōu)選，所述氧載體采用正十二烷、全氟化碳、液態(tài)烷烴中任意一種，液態(tài)烷烴為12 — 16碳直鏈烷烴中任意一種。
[0011]作為優(yōu)選，包括以下組分且各組分的比例為:玉米粉:8份，魚(yú)粉:12份，豆餅粉:30份，磷酸氫二鉀:3份，氯化鈣:4份，氯化銨:4份，氯化鈉:2份，氧化鈣:5份，組合酶:10份，培養(yǎng)基水解液:6份，碳源補(bǔ)充劑:8份，氮源補(bǔ)充劑:4份，能量補(bǔ)充劑:4份，表面活性劑:5份，氧載體:5份。
[0012]作為優(yōu)選，包括以下組分且各組分的比例為:玉米粉:12份，魚(yú)粉:14份，豆餅粉:35份，磷酸氫二鉀:7份，氯化鈣:6份，氯化銨:30份，氯化鈉:4份，氧化鈣:7份，組合酶:30份，培養(yǎng)基水解液:15份，碳源補(bǔ)充劑:14份，氮源補(bǔ)充劑:6份，能量補(bǔ)充劑:15份，表面活性劑:15份，氧載體:10份。
[0013]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明采用碳源補(bǔ)充劑來(lái)避免單一碳源引起的酸性蛋白酶分解代謝阻遏使產(chǎn)酶量降低，在黑曲霉生產(chǎn)酸性蛋白酶時(shí)，需要較高濃度的氮源濃度，所以有機(jī)氮源補(bǔ)充劑存在時(shí)，NH4+或N03-對(duì)黑曲霉生產(chǎn)酸性蛋白酶有顯著促進(jìn)作用，采取高濃度的有機(jī)氮并輔與無(wú)機(jī)氮源，可以加速水解，能量補(bǔ)充劑主要是磷酸鹽，在磷酸氫二鉀消耗時(shí)輔助提供ATP的組成成分，加速微生物生長(zhǎng)代謝，向培養(yǎng)基中添加適量表面活性劑，特別是非離子表面活性劑如:芐苯氧基氯化銨、壬基酚聚氧乙烯醚，可以改善細(xì)胞膜的通透性并且誘導(dǎo)酸性蛋白酶的生成，在一定條件下可顯著促進(jìn)酸性蛋白酶的生產(chǎn)，氧載體采用正十二烷、全氟化碳，液態(tài)烷烴(為12 —16碳直鏈烷烴混合物)中任意一種，使培養(yǎng)基中氧傳遞速度加快，產(chǎn)生氣泡少，剪切力小，能明顯提高菌株產(chǎn)酸性蛋白酶的量。
【【具體實(shí)施方式】】
[0014]本發(fā)明一種酸性蛋白酶培養(yǎng)基，包括以下組分且各組分的比例為:玉米粉:7份?12份，魚(yú)粉:11份?14份，豆餅粉:25份?35份，磷酸氫二鉀:2份?7份，氯化鈣:4份?6份，氯化銨:15份?30份，氯化鈉:I份?4份，氧化鈣:20份?50份，組合酶:10份?30份，培養(yǎng)基水解液:5份?15份，碳源補(bǔ)充劑:6份?14份，氮源補(bǔ)充劑:4份?6份，能量補(bǔ)充劑:3份?15份，表面活性劑:5份?15份，氧載體:5份?10份。
[0015]所述組合酶是纖維素酶、蝸牛酶、溶菌酶的混合液，比例依次為6.5:2.4:1.3，所述碳源補(bǔ)充劑采用糊精、馬鈴薯淀粉、可溶性淀粉、小麥粉、麩皮中的任意一種，所述氮源補(bǔ)充劑采用蛋白胨、酵母膏、玉米漿、黃豆粉、豆餅水解液中的任意一種，所述能量補(bǔ)充劑采用磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、中的任意一種，所述表面活性劑采用芐苯氧基氯化銨、壬基酚聚氧乙烯醚中任意一種，氧載體采用正十二烷、全氟化碳，液態(tài)烷烴(為12 —16碳直鏈烷烴混合物)中任意一種。
[0016]培養(yǎng)基的起始pH對(duì)酸性蛋白酶產(chǎn)量有較大的影響，改變氯化銨的濃度可以有效的調(diào)節(jié)PH為4.5?5.5左右，組合酶是纖維素酶、蝸牛酶、溶菌酶的混合液，比例依次為6.5:2.4:1.3，于室溫下處理2h，紫外誘變處理50s，得到的菌株比原始菌株酶活提高30%，添加5份?15份的表面活性劑，特別是非離子表面活性劑如:芐苯氧基氯化銨、壬基酚聚氧乙烯醚，可以改善細(xì)胞膜的通透性并且誘導(dǎo)酸性蛋白酶的生成，發(fā)酵開(kāi)始后，向培養(yǎng)基中加入5份?10份的正十二烷、全氟化碳，液態(tài)烷烴(為12 —16碳直鏈烷烴混合物)等氧載體，使培養(yǎng)基中氧傳遞速度加快，產(chǎn)生氣泡少，剪切力小，能明顯提高菌株產(chǎn)酸性蛋白酶的量。
[0017]實(shí)施例一:
[0018]一種酸性蛋白酶培養(yǎng)基，包括以下組分且各組分的比例為:玉米粉:8份，魚(yú)粉:12份，豆餅粉:30份，磷酸氫二鉀:3份，氯化鈣:4份，氯化銨:4份，氯化鈉:2份，氧化鈣:5份，組合酶:10份，培養(yǎng)基水解液:6份，碳源補(bǔ)充劑:8份，氮源補(bǔ)充劑:4份，能量補(bǔ)充劑:4份，表面活性劑:5份，氧載體:5份，所述組合酶是纖維素酶、蝸牛酶、溶菌酶的混合液，比例依次為6.5:2.4:1.3，所述碳源補(bǔ)充劑采用糊精所述氮源補(bǔ)充劑采用蛋白胨，所述能量補(bǔ)充劑采用磷酸二氫鈉，所述表面活性劑采用芐苯氧基氯化銨，所述氧載體采用正十二烷。
[0019]實(shí)施例二:
[0020]一種酸性蛋白酶培養(yǎng)基，包括以下組分且各組分的比例為:玉米粉:12份，魚(yú)粉:14份，豆餅粉:35份，磷酸氫二鉀:7份，氯化鈣:6份，氯化銨:30份，氯化鈉:4份，氧化鈣:7份，組合酶:30份，培養(yǎng)基水解液:15份，碳源補(bǔ)充劑:14份，氮源補(bǔ)充劑:6份，能量補(bǔ)充劑:15份，表面活性劑:15份，氧載體:10份，所述組合酶是纖維素酶、蝸牛酶、溶菌酶的混合液，比例依次為6.5:2.4:1.3，所述碳源補(bǔ)充劑采用馬鈴薯淀粉，所述氮源補(bǔ)充劑采用豆餅水解液，所述能量補(bǔ)充劑采用磷酸二氫鉀，所述表面活性劑采用壬基酚聚氧乙烯醚，所述氧載體采用全氟化碳。
[0021]上述實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的說(shuō)明，不是對(duì)本發(fā)明的限定，任何對(duì)本發(fā)明簡(jiǎn)單變換后的方案均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種酸性蛋白酶培養(yǎng)基，其特征在于:包括以下組分且各組分的比例為:玉米粉:7份?12份，魚(yú)粉:11份?14份，豆餅粉:25份?35份，磷酸氫二鉀:2份?7份，氯化鈣:4份?6份，氯化銨:15份?30份，氯化鈉:1份?4份，氧化鈣:20份?50份，組合酶:10份?30份，培養(yǎng)基水解液:5份?15份，碳源補(bǔ)充劑:6份?14份，氮源補(bǔ)充劑:4份?6份，能量補(bǔ)充劑:3份?15份，表面活性劑:5份?15份，氧載體:5份?10份。
2.如權(quán)利要求1所述的一種酸性蛋白酶培養(yǎng)基，其特征在于:所述組合酶是纖維素酶、蝸牛酶、溶菌酶的混合液，纖維素酶、蝸牛酶、溶菌酶的比例為6.5:2.4:1.3。
3.如權(quán)利要求1所述的一種酸性蛋白酶培養(yǎng)基，其特征在于:所述碳源補(bǔ)充劑采用糊精、馬鈴薯淀粉、可溶性淀粉、小麥粉、麩皮中的任意一種。
4.如權(quán)利要求1所述的一種酸性蛋白酶培養(yǎng)基，其特征在于:所述氮源補(bǔ)充劑采用蛋白胨、酵母膏、玉米漿、黃豆粉、豆餅水解液中的任意一種。
5.如權(quán)利要求1所述的一種酸性蛋白酶培養(yǎng)基，其特征在于:所述能量補(bǔ)充劑采用磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀中的任意一種。
6.如權(quán)利要求1所述的一種酸性蛋白酶培養(yǎng)基，其特征在于:所述表面活性劑采用芐苯氧基氯化銨、壬基酚聚氧乙烯醚中任意一種。
7.如權(quán)利要求1所述的一種酸性蛋白酶培養(yǎng)基，其特征在于:所述氧載體采用正十二烷、全氟化碳、液態(tài)烷烴中任意一種，所述液態(tài)烷烴為12?16碳直鏈烷烴中任意一種。
8.如權(quán)利要求1所述的一種酸性蛋白酶培養(yǎng)基，其特征在于:包括以下組分且各組分的比例為:玉米粉:8份，魚(yú)粉:12份，豆餅粉:30份，磷酸氫二鉀:3份，氯化鈣:4份，氯化銨:4份，氯化鈉'2份，氧化鈣:5份，組合酶:10份，培養(yǎng)基水解液:6份，碳源補(bǔ)充劑:8份，氮源補(bǔ)充劑:4份，能量補(bǔ)充劑:4份，表面活性劑:5份，氧載體:5份。
9.如權(quán)利要求1所述的一種酸性蛋白酶培養(yǎng)基，其特征在于:玉米粉:12份，魚(yú)粉:14份，豆餅粉:35份，磷酸氫二鉀:7份，氯化鈣:6份，氯化銨:30份，氯化鈉:4份，氧化鈣:7份，組合酶:30份，培養(yǎng)基水解液:15份，碳源補(bǔ)充劑:14份，氮源補(bǔ)充劑:6份，能量補(bǔ)充劑:15份，表面活性劑:15份，氧載體:10份。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種酸性蛋白酶培養(yǎng)基，包括以下組分且各組分的比例為：玉米粉：7份～12份，魚(yú)粉：11份～14份，豆餅粉：25份～35份，磷酸氫二鉀：2份～7份，氯化鈣：4份～6份，氯化銨：15份～30份，氯化鈉：1份～4份，氧化鈣：20份～50份，組合酶：10份～30份，培養(yǎng)基水解液：5份～15份，碳源補(bǔ)充劑：6份～14份，氮源補(bǔ)充劑：4份～6份，能量補(bǔ)充劑：3份～15份，表面活性劑：5份～15份，氧載體：5份～10份，本發(fā)明具有高產(chǎn)量,高酶活，提高發(fā)酵水平、增加酶活、高效合成蛋白酶等優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類(lèi)】C12N9-62
【公開(kāi)號(hào)】CN104877981
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510361888
【發(fā)明人】楊海霞, 黃紅林
【申請(qǐng)人】黃紅林
【公開(kāi)日】2015年9月2日
【申請(qǐng)日】2015年6月24日