一種從紅豆杉枝葉中分離提純10-去乙酰基巴卡亭iii的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種從紅豆杉枝葉中分離提純10-去乙?；涂ㄍII (10-DAB III) 的方法，特別是利用10-DAB III粗品與咪唑類化合物結(jié)晶純化獲得高純度10-DAB III的 分離方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 多西紫杉醇被認(rèn)為是迄今療效最顯著的抗癌藥物之一，1996年經(jīng)FDA確認(rèn)開(kāi)始用 于肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌等方面的臨床藥物。多西紫杉醇和紫杉醇（Taxol) -樣具有廣譜 的抗白血病和抗實(shí)體腫瘤活性，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，多官能團(tuán)和多手性中心等，全合成成本高、難度 較大。當(dāng)發(fā)現(xiàn)歐洲紅豆杉的針葉中提取到濃度較高的紫杉烷類似物10-去乙?；涂ㄍ?(10-deacetyl baccatin III，簡(jiǎn)稱10-DAB III)中間體后，多西紫杉醇的合成及規(guī)?；?產(chǎn)才成為可能。10-DAB III的結(jié)構(gòu)式如下：
[0003]
[0004] 10-DAB III主要分布在紅豆杉的枝葉中，其含量可高達(dá)0. 1 %以上，而在多年生的 樹(shù)皮含量最少。其分布與紫杉醇的分布剛好相反，紫杉醇主要分布在多年生的紅豆杉樹(shù)皮 中，含量多在〇. 03%以下，而在葉中含量極低，大多不及樹(shù)皮中含量的十分之一。枝葉是可 再生資源，因此生產(chǎn)10-DAB III不象生產(chǎn)紫杉醇以犧牲有限的紅豆杉資源為代價(jià)，因此，研 宄10-DAB III的提取和純化工藝具有十分重要的意義。
[0005]目前，關(guān)于10-DAB III的提取分離已有大量文獻(xiàn)和專利報(bào)道，基本上都是采取提 取、分離、結(jié)晶三個(gè)步驟，其中分離和結(jié)晶是影響得率和純度的關(guān)鍵步驟。常規(guī)采用甲 醇或酒精進(jìn)行浸泡提取，萃取濃縮，然后多次硅膠柱層析分離，重結(jié)晶得到一定純度的 10-DABIII。多次柱層析分離和重結(jié)晶過(guò)程不僅費(fèi)時(shí)費(fèi)力，增加溶劑成本，還會(huì)降低得率。因 而如何簡(jiǎn)化分離純化工藝，盡可能少的利用有機(jī)溶劑方便的獲得高質(zhì)量的10-DABIII成為 該領(lǐng)域研宄的重點(diǎn)。
[0006] 中國(guó)專利公開(kāi)號(hào)CN1473821A公開(kāi)了一種提取10-DABIII的方法，采用常規(guī)硅膠柱 層析分離提取處理出的半成品10-DABIII，該方法較耗費(fèi)時(shí)間，溶劑消耗量也大，容易造成 得率的損失。中國(guó)專利公開(kāi)號(hào)CN1398859A公開(kāi)了一種從種植紅豆杉枝葉用后殘?jiān)刑崛?10-DABIII的方法，該方法涉及制備液相色譜分離過(guò)程，但所用溶劑體系和梯度洗脫手段在 規(guī)?；a(chǎn)中顯得工藝復(fù)雜，溶劑消耗量大。中國(guó)專利公開(kāi)號(hào)CN101045719A公開(kāi)了一種利 用制備液相色譜分離純化10-DABIII的半成品，用分析純四氫呋喃、正己烷和甲醇混合溶 劑為洗脫流動(dòng)相，制備工藝較為復(fù)雜，更適合于實(shí)驗(yàn)室小批量生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 針對(duì)10-DABIII的提取純化需要使用多次柱層析及重結(jié)晶，或者使用復(fù)雜的制備 色譜技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)的現(xiàn)狀，本發(fā)明提出將10-DABIII粗品經(jīng)一次柱層析和一次添加咪唑類 化合物進(jìn)行結(jié)晶純化獲得高純度精品的簡(jiǎn)化分離方法?？紤]到10-DAB III的結(jié)構(gòu)中含有 多羥基，如果加入含氮有機(jī)化合物，則兩者之間可能通過(guò)氫鍵形成結(jié)晶化合物，我們研宄 發(fā)現(xiàn)，10-DAB III易與咪唑形成結(jié)晶配合物，而不受其它雜質(zhì)影響，更為重要的是，形成的結(jié) 晶配合物加水后可以方便的用有機(jī)溶劑提取出來(lái)，這樣的結(jié)晶分離過(guò)程為獲得高純度的 10-DAB III提供了方便。
[0008] 本發(fā)明的目的在于提供一種簡(jiǎn)易高效分離純化10-DABIII粗品，獲得高純度 10-DABIII 的方法。
[0009] 本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0010] (1)將紅豆杉枝葉粉碎烘干后，按固液比1:10的比例用體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇水 溶液回流提取5小時(shí)，連續(xù)提取3次，合并濾液，減壓濃縮后得到10-DABIII提取物，其中 10-DABIII的質(zhì)量含量為8-20% ;
[0011] (2)將10-DABIII提取物用溶劑溶解后干法上樣，用洗脫液洗脫，收集含 10-DABIII的洗脫液，蒸除溶劑得10-DABIII半成品；
[0012] (3)將上述10-DABIII半成品用二氯甲烷溶解后，按摩爾比為10-DABIII半成品： 咪唑類化合物=I :1. 5-4. 0的比例加入咪唑類化合物，室溫?cái)嚢?0min后，靜置，(TC冷卻， 將所得晶狀固體過(guò)濾，真空干燥，得10-DABIII與咪唑的結(jié)晶配合物；
[0013] (4)將上述10-DABIII與咪唑的結(jié)晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取三次，合并 有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，去除溶劑后得10-DAB III純品。
[0014] 步驟（2)所述溶解10-DABIII提取物的溶劑為四氫呋喃、二氯甲烷、甲醇中的一種 或幾種；
[0015] 步驟（2)所述的洗脫液選自下述混合溶劑中的任意一種：乙酸乙酯-石油醚、甲 醇-四氫呋喃-正己烷、乙酸乙酯-環(huán)己烷；
[0016] 步驟（3)所述的咪唑類化合物為咪唑、1-甲基咪唑、2-甲基咪唑中的一種或幾種。
[0017] 本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0018] (1)利用10-DAB III易與咪唑類化合物形成結(jié)晶配合物的特點(diǎn)，方便的實(shí)現(xiàn)了 10-DAB III與其它紫杉烷類化合物進(jìn)行分離的目的；
[0019] (2) 10-DAB III與咪唑類化合物形成結(jié)晶配合物后，可以方便的用有機(jī)溶劑提取分 離，從而獲得高純度產(chǎn)品；
[0020] (3)分離過(guò)程僅需一次柱層析和一次結(jié)晶分離過(guò)程，避免了連續(xù)多次的柱層析及 重結(jié)晶操作，大大減少了人力、物力耗費(fèi)；
[0021] (4)與10-DAB III形成結(jié)晶配合物的咪唑類化合物可以回收，循環(huán)使用，成本更低 也更環(huán)保。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 實(shí)施例1 :
[0023] (1)將紅豆杉枝葉烘干后粉碎成100目的細(xì)粉，取Ikg細(xì)粉按固液比1:10的比例 用體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇水溶液回流提取5小時(shí)，連續(xù)提取3次，合并濾液，減壓濃縮后得 10-DABIII 提取物 120g。
[0024] (2)將10-DABIII提取物用300mL四氫呋喃溶解后干法上樣，用乙酸乙酯-石 油醚（體積比乙酸乙酯：石油醚=2:1)洗脫，收集含10-DABIII的洗脫液，蒸除溶劑得 10-DABIII 半成品 L 85g。
[0025] (3)將上述10-DABIII半成品用20mL二氯甲烷溶解后，加入咪唑0. 20g，室溫?cái)嚢?30min后，靜置，0°C冷卻，將所得晶狀固體過(guò)濾，真空干燥，得10-DABIII與咪唑的結(jié)晶配合 物 1.08g。
[0026] (4)將上述10-DABIII與咪唑的結(jié)晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取三次，合并 有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，去除溶劑后得10-DAB III純品0. 896g，純度99. 2%。
[0027] 實(shí)施例2 :
[0028] (1)將紅豆杉枝葉烘干后粉碎成100目的細(xì)粉，取IOkg粉末按固液比1:10的比例 用體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇水溶液回流提取5小時(shí)，連續(xù)提取3次，合并濾液，減壓濃縮后得 10-DABIII 提取物 1350g。
[0029] (2)將10-DABIII提取物用3000mL四氫呋喃溶解后多次干法上樣，用乙酸乙 酯-環(huán)己烷（體積比乙酸乙酯：環(huán)己烷=2:1)洗脫，收集含10-DABIII的洗脫液，蒸除溶劑 得 10-DABIII 半成品 22. 8g。
[0030] (3)將上述10-DABIII半成品用200mL二氯甲烷溶解后，加入咪唑3. 0g，室溫?cái)嚢?30min后，靜置，0°C冷卻，將所得晶狀固體過(guò)濾，真空干燥，得10-DABIII與咪唑的結(jié)晶配合 物 11.9g。
[0031] (4)將上述10-DABIII與咪唑的結(jié)晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取三次，合并 有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，去除溶劑后得10-DAB III純品9. 35g，純度99. 4%。
[0032] 實(shí)施例3 :
[0033] (1)將紅豆杉枝葉烘干后粉碎成100目的細(xì)粉，取5kg粉末按固液比1:10的比例 用體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇水溶液回流提取5小時(shí)，連續(xù)提取3次，合并濾液，減壓濃縮后得 10-DABIII 提取物 680g。
[0034] (2)將10-DABIII提取物用1200mL二氯甲烷溶解后多次干法上樣，用乙酸乙 酯-石油醚（體積比乙酸乙酯：石油醚=2:1)洗脫，收集含10-DABIII的洗脫液，蒸除溶劑 得 10-DABIII 半成品 10. 9g。
[0035] (3)將上述10-DABIII半成品用IOOmL二氯甲烷溶解后，加入咪唑2. 0g，室溫?cái)嚢?30min后，靜置，0°C冷卻，將所得晶狀固體過(guò)濾，真空干燥，得10-DABIII與咪唑的結(jié)晶配合 物 5. 8g。
[0036] (4)將上述10-DABIII與咪唑的結(jié)晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取三次，合并 有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，去除溶劑后得10-DAB III純品4. 38g，純度99. 5%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從紅豆杉枝葉中高效分離提純10-去乙酰基巴卡亭III的方法，其特征在于包 括如下步驟： (1) 將紅豆杉枝葉粉碎烘干后，按固液比1:10的比例用體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇水 溶液回流提取5小時(shí)，連續(xù)提取3次，合并濾液，減壓濃縮后得到10-DABIII提取物，其中 10-DABIII的質(zhì)量含量為8-20% ; (2) 將10-DABIII提取物用溶劑溶解后干法上樣，用洗脫液洗脫，收集含10-DABIII的 洗脫液，蒸除溶劑得10-DABIII半成品； (3) 將上述10-DABIII半成品用二氯甲烷溶解后，按摩爾比為10-DABIII半成品：咪唑 類化合物=I:1.5-4.0的比例加入咪唑類化合物，室溫?cái)嚢?0min后，靜置，(TC冷卻，將所 得晶狀固體過(guò)濾，真空干燥，得10-DABIII與咪唑的結(jié)晶配合物； (4) 將上述10-DABIII與咪唑的結(jié)晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取三次，合并有機(jī) 相，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，去除溶劑后得10-DABIII純品。2. 如權(quán)利要求1所述的一種從紅豆杉枝葉中高效分離提純10-去乙酰基巴卡亭III的 方法，其特征在于：步驟（2)中溶解10-DABIII提取物的溶劑為四氫呋喃、二氯甲烷、甲醇中 的一種或幾種。3. 如權(quán)利要求1所述的一種從紅豆杉枝葉中高效分離提純10-去乙?；涂ㄍII的 方法，其特征在于：步驟（2)中的洗脫液選自下述混合溶劑中的一種：乙酸乙酯-石油醚、 甲醇-四氫呋喃-正己烷、乙酸乙酯-環(huán)己烷。4. 如權(quán)利要求1所述的一種從紅豆杉枝葉中高效分離提純10-去乙?；涂ㄍII的 方法，其特征在于：步驟（3)中的咪唑類化合物為咪唑、1-甲基咪唑、2-甲基咪唑中的一種 或幾種。5. 如權(quán)利要求1所述的一種從紅豆杉枝葉中高效分離提純10-去乙酰基巴卡亭III 的方法，其特征在于：經(jīng)過(guò)一次柱層析和一次添加咪唑類化合物進(jìn)行結(jié)晶純化獲得高純度 10-DABIII〇6. 如權(quán)利要求1所述的一種從紅豆杉枝葉中高效分離提純10-去乙?；涂ㄍII的 方法，其特征在于：所得10-DABIII與咪唑的結(jié)晶配合物加水分離，有機(jī)溶劑萃取得純品。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種從紅豆杉枝葉中分離提純10-去乙?；涂ㄍII的方法。它包含以下工藝過(guò)程1)將紅豆杉枝葉粉碎烘干后，用80％乙醇回流提取5小時(shí)，連續(xù)提取3次，濾液減壓濃縮后得10-DABIII提取物。2)將10-DABIII提取物溶解后干法上樣，收集含10-DABIII的洗脫液，蒸除溶劑得10-DABIII半成品。3)將10-DABIII半成品溶解后，按1：1.5-4的摩爾比加入咪唑類化合物，攪拌30min后靜置，0℃冷卻，過(guò)濾，干燥，得10-DABIII與咪唑的結(jié)晶配合物。4)將10-DABIII與咪唑的結(jié)晶配合物加水溶解，萃取，干燥，去除溶劑后得10-DABⅢ純品含量在99％以上。
【IPC分類】C07D305/14
【公開(kāi)號(hào)】CN104892551
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510357296
【發(fā)明人】隋巖, 羅志剛, 陳麗
【申請(qǐng)人】井岡山大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年9月9日
【申請(qǐng)日】2015年6月25日