一種縮宮素多肽的合成方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種縮宮素多肽的合成方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 縮宮素（Oxytocin)，用于引產(chǎn)、催產(chǎn)、產(chǎn)后及流產(chǎn)后因?qū)m縮無力或縮復(fù)不良而引起 的子宮出血；了解胎盤儲備功能（催產(chǎn)素激惹試驗(yàn)）；滴鼻可促使排乳?？s宮素能間接刺激 子宮平滑肌收縮，模擬正常分娩的子宮收縮作用，導(dǎo)致子宮頸擴(kuò)張，子宮對縮宮素的反應(yīng)在 妊娠過程中逐漸增加，足月時(shí)達(dá)高峰?？s宮素也可刺激乳腺的平滑肌收縮，有助于乳汁自乳 房排出，但并不增加乳腺的乳汁分泌量。
[0003] 縮宮素最初是由豬、牛腦神經(jīng)垂體中提取制得，自20世紀(jì)50年代，使用液相法完 成了縮宮素的全合成，至今已合成縮宮素的類似物有數(shù)百種之多，有的生物活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過 天然縮宮素，而提取的縮宮素因其純度較低，含少量的加壓素，易產(chǎn)生升壓的副作用，正逐 漸為化學(xué)合成法所替代，目前，國內(nèi)合成方法有：液相合成法、固相合成法。
[0004] 通過在液體介質(zhì)中反應(yīng)制備縮宮素，采用逐步合成或片段縮合方法，適合于短肽 的合成，每步中間產(chǎn)物都可以純化，制備工藝簡單，但是，反應(yīng)物混合均勻、工藝過程中需要 嚴(yán)格控制反應(yīng)體系的PH值、溫度、攪拌速度等條件，且產(chǎn)生雜質(zhì)較多每步都需要純化，且純 化難度較大，此外耗時(shí)較長，合成得到的縮宮素雜質(zhì)多，純化步驟多。
[0005] 利用固相合成法原理，以第一個(gè)氨基酸的羧基與固相載體（樹脂）的氨基以共價(jià) 鍵的形式連接起來，再以這個(gè)氨基酸的氨基為起點(diǎn)，與下一個(gè)氨基酸的羧基連接，依次循 環(huán)，直至目標(biāo)肽形成為止。優(yōu)點(diǎn)是不需要每步純化提高了合成速度，產(chǎn)率較高，缺點(diǎn)是氨基 酸原料投料較大，沒有中間純化步驟，有時(shí)長肽粗品純度較低，需要反相色譜純化。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明為了克服現(xiàn)有技術(shù)不足，提供一種高收率、低成本、反應(yīng)條件溫和、環(huán)境污 染小，利于產(chǎn)業(yè)化的手工固相合成多肽工藝，采用全保護(hù)多肽樹脂為原料，經(jīng)裂解切肽、精 制制成，不經(jīng)偶合、接肽等反應(yīng)過程，縮短了多肽原料藥生產(chǎn)步驟，具有反應(yīng)周期短、收率 高，生產(chǎn)過程中污染物產(chǎn)生量少等優(yōu)點(diǎn)。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0008] -種縮宮素多肽的合成方法，包括以下步驟：
[0009] 以縮宮素多肽全保護(hù)樹脂為原料，將縮宮素多肽全保護(hù)樹脂加入裂解切肽釜中， 加入三氟乙酸和水進(jìn)行裂解，得到多肽原料藥粗品，再經(jīng)結(jié)晶、HPLC合成、洗脫進(jìn)行精制后 即可得到縮宮素多肽原料藥成品。
[0010] 具體反應(yīng)方程式如下所示：
[0011]
[0013] 進(jìn)一步，裂解完成后，旋蒸回收三氟乙酸，濃縮液進(jìn)入結(jié)晶釜，加入乙酸丁酯冷凍 結(jié)晶。
[0014] 進(jìn)一步，結(jié)晶后過濾，過濾得到的濕固體后真空干燥。
[0015] 進(jìn)一步，干燥完后的固體加水溶解，然后進(jìn)入HPLC儀純化，用乙腈和水作為流動(dòng) 相洗脫純化。
[0016] 進(jìn)一步，裂解溫度為O-KTC。
[0017] 進(jìn)一步，裂解時(shí)間2_3h。
[0018] 進(jìn)一步，所述縮宮素多肽全保護(hù)樹脂采用擬合成的縮宮素肽鏈的梭基末端氨基酸 的梭基，以共價(jià)鍵的結(jié)構(gòu)同一個(gè)不溶性的高分子樹脂相連，然后以此結(jié)合在固相載體上的 氨基酸作為氨基組份，經(jīng)過脫去氨基保護(hù)基并同過量的活化梭基組分反應(yīng)，接長肽鏈，重 復(fù)操作，達(dá)到所要合成的肽鏈長度，得到縮宮素多肽全保護(hù)樹脂。本發(fā)明的樹脂選用適合于 固相多肽合成樹脂即可，優(yōu)選苯氧基樹脂。
[0019] 本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：本發(fā)明多肽原料藥采用全保護(hù)多肽樹脂為原料， 不經(jīng)偶合、接肽等反應(yīng)過程，縮短了多肽原料藥生產(chǎn)步驟，工藝簡單，具有反應(yīng)周期短、收率 高，產(chǎn)品純度高，生產(chǎn)過程中污染物產(chǎn)生量少等特點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于 此：
[0021] 實(shí)施例1 :
[0022] 將縮宮素多肽全保護(hù)樹脂加入裂解切肽釜中，加入三氟乙酸和水進(jìn)行裂解。其中 三氟乙酸的摩爾的量為縮宮素多肽全保護(hù)樹脂的2-5倍。裂解溫度為0-KTC，裂解時(shí)間 2_3h。裂解完成后進(jìn)行過濾，過濾得到的液體進(jìn)入旋蒸釜，旋蒸回收三氟乙酸。旋蒸后得到 的濃縮液進(jìn)入結(jié)晶釜，加入乙酸丁酯冷凍結(jié)晶，結(jié)晶后過濾，過濾得到的濕固體進(jìn)行真空干 燥。干燥完后的固體加水溶解，然后采用HPLC儀純化，用乙腈和水作為流動(dòng)相洗脫純化，然 后去凍干，凍干后混合、包裝的成品，收率為55%，產(chǎn)物純度彡99. 4%。
[0023] 雖然本發(fā)明已由較佳實(shí)施例揭露如上，然而并非用以限定本發(fā)明，任何熟知此技 藝者，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，可作些許的更動(dòng)與潤飾，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍當(dāng) 視權(quán)利要求書所要求保護(hù)的范圍為準(zhǔn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種縮宮素多肽的合成方法，其特征在于，包括以下步驟： 以縮宮素多肽全保護(hù)樹脂為原料，將縮宮素多肽全保護(hù)樹脂加入裂解切肽釜中，加入 三氟乙酸和水進(jìn)行裂解，得到多肽原料藥粗品，再經(jīng)結(jié)晶、HPLC合成、洗脫進(jìn)行精制后即可 得到縮宮素多肽原料藥成品。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成方法，其特征在于，裂解完成后，旋蒸回收三氟乙酸，濃 縮液進(jìn)入結(jié)晶釜，加入乙酸丁酯冷凍結(jié)晶。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的合成方法，其特征在于，結(jié)晶后過濾，過濾得到的濕固體后真 空干燥。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的合成方法，其特征在于，干燥完后的固體加水溶解，然后進(jìn)入 HPLC儀純化，用乙腈和水作為流動(dòng)相洗脫純化。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述縮宮素多肽全保護(hù)樹脂采用擬 合成的縮宮素肽鏈的梭基末端氨基酸的梭基，以共價(jià)鍵的結(jié)構(gòu)同一個(gè)不溶性的高分子樹脂 相連，然后以此結(jié)合在固相載體上的氨基酸作為氨基組份，經(jīng)過脫去氨基保護(hù)基并同過量 的活化梭基組分反應(yīng)，接長肽鏈，重復(fù)操作，達(dá)到所要合成的肽鏈長度，得到縮宮素多肽全 保護(hù)樹脂。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成方法，其特征在于，裂解溫度為O-KTC。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成方法，其特征在于，裂解時(shí)間2-3h。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種縮宮素多肽的合成方法，以縮宮素多肽全保護(hù)樹脂為原料，將縮宮素多肽全保護(hù)樹脂加入裂解切肽釜中，加入三氟乙酸和水進(jìn)行裂解，得到多肽原料藥粗品，再經(jīng)結(jié)晶、HPLC合成、洗脫進(jìn)行精制后即可得到縮宮素多肽原料藥成品。本發(fā)明不經(jīng)偶合、接肽等反應(yīng)過程，縮短了多肽原料藥生產(chǎn)步驟，具有反應(yīng)周期短、收率高，生產(chǎn)過程中污染物產(chǎn)生量少等優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類】C07K1/06, C07K7/16, C07K1/04
【公開號】CN104892731
【申請?zhí)枴緾N201510383403
【發(fā)明人】張勝
【申請人】浙江天順生物科技有限公司
【公開日】2015年9月9日
【申請日】2015年6月30日