一種精細(xì)純化卡泊芬凈的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物純化領(lǐng)域，特別是一種棘白菌素類(lèi)抗真菌藥物卡泊芬凈的純化方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 卡泊芬凈（Caspofungin)來(lái)自棘白菌素家族的大環(huán)脂肽，能抑制許多絲狀真菌和 酵母菌細(xì)胞壁β_(1，3)-D-葡聚糖合成，破壞細(xì)胞壁完整性，而產(chǎn)生殺真菌作用?？ú捶覂?結(jié)構(gòu)式如下：
[0003]
[0004] 卡泊芬凈是肺念菌素 BO (紐莫康定Β0)的半合成衍生物，由Glarea Lozoyensis 發(fā)酵產(chǎn)物合成而來(lái)。所合成的卡泊芬凈，必須經(jīng)過(guò)分離純化后，方可達(dá)到藥用標(biāo)準(zhǔn)的純度。
[0005] 由于藥物中的雜質(zhì)一般沒(méi)有治療作用，有的還具有一定的毒性，是影響藥品安全 性的主要因素。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA)要求過(guò)程雜質(zhì)控制在規(guī)定界限以下。對(duì)于 原料藥，F(xiàn)DA要求盡可能無(wú)雜質(zhì)，使其在臨床應(yīng)用時(shí)盡可能安全，如FDA推薦某些雜質(zhì)的含 量要小于〇. 1。
[0006] CN102219832公開(kāi)了以高分子樹(shù)脂分離純化卡泊芬凈的方法，但該方法需要進(jìn)一 步濃縮、結(jié)晶才能達(dá)到藥用標(biāo)準(zhǔn)。CN104250290公開(kāi)了采用C18反相色譜填料為固定相分 離純化卡泊芬凈的方法，該方法得到的卡泊芬凈的純度在97 %左右，但未涉及卡泊芬凈雜 質(zhì)含量的控制。CN102076707(W02009158034)公開(kāi)了采用反相色譜填料（C8或C18)為分 離介質(zhì)，可控制雜質(zhì)A較低的含量，但需要經(jīng)過(guò)至少2次的反相色譜柱分離純化。美國(guó)專(zhuān)利 US5552521也公開(kāi)了以C18為固定相，采用HPLC法分離純化卡泊芬凈的工藝，但該工藝得到 產(chǎn)品的純度較低。
[0007] 因此，現(xiàn)有技術(shù)中公開(kāi)的純化卡泊芬凈的方法，存在兩方面的不足：一是，卡泊芬 凈的純度達(dá)不到相應(yīng)的高純度要求，即便達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，但工藝過(guò)程比較復(fù)雜；二是，卡泊芬凈 單組份雜質(zhì)的量不能得到很好的分離和控制，如使單組份雜質(zhì)小于0. 1%的要求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的在于提供一種精細(xì)純化卡泊芬凈的方法，該方法可使卡泊芬凈純度 達(dá)到99%以上，單組份雜質(zhì)控制在0. 1 %以下。該方法過(guò)程簡(jiǎn)單，純化效率高，適用于大規(guī) 模工業(yè)化生產(chǎn)。
[0009] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案：用單分散聚合物Uni?30BPC微球作為柱 層析填料，將卡泊芬凈粗品溶液上樣到色譜柱后，以水溶液和有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相洗脫吸 附在填料上的卡泊芬凈，收集富含卡泊芬凈的溶液。
[0010] 優(yōu)選的，所述單分散聚合物微球Uni?30BPC的粒徑為3〇± I. 5 y m。
[0011] 優(yōu)選的，所述卡泊芬凈粗品的濃度為88% -92%。
[0012] 優(yōu)選的，所述水溶液中含有0. 03% -0. 2%的乙酸。
[0013] 優(yōu)選的，所述流動(dòng)相的洗脫量為10-18個(gè)柱體積。
[0014] Uni'?30BPC是苯乙烯和吡咯烷酮聚合形成的粒徑為30± 1. 5 μ m的單分散高分 子微球。由于該微球表面同時(shí)具有親水性和憎水性基團(tuán)，對(duì)各類(lèi)極性、非極性化合物具有較 平衡的吸附作用，因此其吸附能力和樣品容量遠(yuǎn)高于其他填料。
[0015] 本發(fā)明提供的精細(xì)純化的卡泊芬凈的方法，能夠較好的控制各單組份雜質(zhì)的含 量，使其低于〇. 1%。以LJrd?30BPC作為層析填料，一次性純化就可達(dá)到99%以上，使其 符合藥物使用標(biāo)準(zhǔn)。
【附圖說(shuō)明】
[0016] 圖1是實(shí)施例1中純化前的卡泊芬凈粗品的HPLC分析圖譜。
[0017] 圖2是實(shí)施例1中純化后的卡泊芬凈的HPLC分析圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的描述，但本發(fā)明并不限于這 些實(shí)施例。
[0019] 實(shí)施例1
[0020] 以Uni?3GBP(：為層析介質(zhì)精細(xì)純化卡泊芬凈：采用15X310mm玻璃色譜柱， Uni'?30BPC (蘇州納微科技有限公司生產(chǎn)）為層析填料裝填層析柱，裝柱體積55ml。將 〇. 5g卡泊芬凈粗品（純度91 % )溶解在8ml水中，用0. 45 μ m濾膜過(guò)濾后備用。將上述卡 泊芬凈溶液上樣到層析柱中，以7ml/min用21 %的乙腈水溶液（含有0. 03% -0. 2%的乙 酸）沖洗12個(gè)柱體積（BV)，收集被洗脫下來(lái)的卡泊芬凈，經(jīng)高效液相分析，洗脫液中卡泊芬 凈的峰面積為總面積的99. 8%，單組份雜質(zhì)小于0. 1 %，回收率為61. 8%。
[0021] 圖1是卡泊芬凈粗品純化前的HPLC分析圖譜?？梢?jiàn)雜質(zhì)多，含量高。圖2是純化 后的卡泊芬凈HPLC分析圖譜?？梢?jiàn)雜質(zhì)少，且含量非常低。
[0022] 實(shí)施例2
[0023] 以UniSil?30-RPC為層析介質(zhì)精細(xì)純化卡泊芬凈：采用15X310mm玻璃色譜 柱，UniSil?30-RPC (C18反相硅膠填料，蘇州納微科技有限公司生產(chǎn)）為層析填料裝填 層析柱，裝柱體積55ml。將0. 5g卡泊芬凈粗品（純度91 % )溶解在8ml水中，用0. 45 μ m 濾膜過(guò)濾后備用。講上述卡泊芬凈溶液上樣到層析柱中，以7ml/min用21%的乙腈水溶液 沖洗16個(gè)柱體積（BV)，收集被洗脫下來(lái)的卡泊芬凈，經(jīng)高效液相分析，洗脫液中卡泊芬凈 的峰面積為總面積的97. 6%，單組份雜質(zhì)小于0. 15%，回收率為60. 2%。
[0024] 實(shí)施例3
[0025] 以UniSii?40-RPC為層析介質(zhì)精細(xì)純化卡泊芬凈：采用15X310mm玻璃色譜 柱，Un彳Sr40~R.PC (C18反相硅膠填料，蘇州納微科技有限公司生產(chǎn)）為層析填料裝填 層析柱，裝柱體積55ml。將0. 5g卡泊芬凈粗品（純度91 % )溶解在8ml水中，用0. 45 μ m 濾膜過(guò)濾后備用。講上述卡泊芬凈溶液上樣到層析柱中，以7ml/min用21%的乙腈水溶液 沖洗16個(gè)柱體積（BV)，收集被洗脫下來(lái)的卡泊芬凈，經(jīng)高效液相分析，洗脫液中卡泊芬凈 的峰面積為總面積的96. 5%，單組份雜質(zhì)小于0. 15%，回收率為60. 9%。
[0026] 以上所述的僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員 來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明創(chuàng)造構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明 的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種精細(xì)純化卡泊芬凈的方法，其特征在于，所述方法為，用單分散聚合物 Un^SGBPC微球?yàn)橹鶎游鎏盍?，將卡泊芬凈粗品溶液上樣到色譜柱后，以水溶液和有機(jī) 溶劑作為流動(dòng)相洗脫吸附在填料上的卡泊芬凈，收集富含卡泊芬凈的溶液。2. 如權(quán)利要求1所述的精細(xì)純化卡泊芬凈的方法，其特征在于，所述單分散聚合物微 球Uni?30BPC的粒徑為 3〇± 1. 5ym。3. 如權(quán)利要求1所述的精細(xì)純化卡泊芬凈的方法，其特征在于，所述卡泊芬凈粗品的 濃度為88 % -92%。4. 如權(quán)利要求1所述的精細(xì)純化卡泊芬凈的方法，其特征在于，水溶液中含有 0? 03% -0? 2%的乙酸。5. 如權(quán)利要求1所述的精細(xì)純化卡泊芬凈的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相的洗脫量 為10-18個(gè)柱體積。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種精細(xì)純化卡泊芬凈的方法，所述純化方法為，用單分散聚合物30BPC微球?yàn)橹鶎游鎏盍?，將卡泊芬凈粗品溶液上樣到色譜柱后，以水溶液和有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相洗脫吸附在填料上的卡泊芬凈，收集富含卡泊芬凈的溶液。該方法可使卡泊芬凈純度達(dá)到99％以上，單組份雜質(zhì)控制在0.1％以下。該方法過(guò)程簡(jiǎn)單，純化效率高，適用于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
【IPC分類(lèi)】C07K1/16, C07K7/56
【公開(kāi)號(hào)】CN104910258
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510350278
【發(fā)明人】江必旺, 吳俊成, 陳榮姬, 潘毅
【申請(qǐng)人】蘇州納微科技有限公司
【公開(kāi)日】2015年9月16日
【申請(qǐng)日】2015年6月23日