一種水蛭素的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種水蛭素的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 水蛭素是水蛭體內(nèi)的一種蛋白質(zhì)，含65個(gè)氨基酸殘基和3對(duì)二硫鍵，具有高度特 異的抗凝血酶活性，抑制凝血酶結(jié)合底物，故有抗凝血作用。
[0003] 目前在制備水蛭素時(shí)，通常是將水蛭冷卻后進(jìn)行搗碎，而活的水蛭在搗碎時(shí)困難 很大，因?yàn)樗紊眢w是軟的不易搗碎，而且在加工過程中水蛭不斷逃跑，爬得四周都是，十 分惡心；也有的是用開水將水蛭煮一下，使其死后再搗碎，但是在過水時(shí)水蛭素分泌物從水 蛭口腔中流失；通常對(duì)泥漿狀水蛭用電爐或手工煮，這樣既不能工業(yè)化，又不能恒溫加熱； 對(duì)水蛭液采用離心機(jī)離心分離不完全，水蛭素成品收率低，由于現(xiàn)有的水蛭素提取方法存 在上述工藝不合理的缺點(diǎn)，因而水蛭素成品的質(zhì)量穩(wěn)定性差，收率通常只有80%左右。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供一種具有工藝合理、操作方便實(shí)用、水蛭素 成品的質(zhì)量穩(wěn)定性好和收率提高的水蛭素的提取方法。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下： 一種水蛭素的提取方法，包括以下步驟： A、 將洗凈的水蛭用線、繩或者鐵絲穿起，懸掛在陽光下暴曬，得水蛭干燥全體； B、 稱取干燥水蛭，粗粉碎后過篩，精密稱取水蛭粗粉加入乙醇，料液比為1:1~5,在微波 條件下浸泡，后將混懸液超微粉碎，將得到的水蛭混懸液離心后，取上清液； C、 將上述清液進(jìn)行濃縮，即得。
[0006] 所述的乙醇的濃度為30% -80%。
[0007] 所述的微波條件所述的微波條件為微波功率隨溫度自動(dòng)變頻控制，非脈沖微波連 續(xù)加熱，功率自動(dòng)變化范圍為〇~l〇〇〇W ;溫度控制為50-70°C。
[0008] 所述的浸泡時(shí)間為l_2h。
[0009] 所述的超微粉碎時(shí)間為10_15min。
[0010] 所述的步驟C中冷凍干燥的具體做法為：將步驟B中的上清液冷凍至水的冰點(diǎn)以 下，然后移置干燥器，密閉，迅速抽空，并維持在抽空狀態(tài)3-5小時(shí)。
[0011] 本發(fā)明的有益效果為： 1.本發(fā)明使用微波可以強(qiáng)化水蛭素的浸出，經(jīng)微波活化后，水蛭粗粉更加松散，附著現(xiàn) 象全部消失，微波的熱效應(yīng)和非熱效應(yīng)綜合效應(yīng)使得水蛭素的浸出率提高。水蛭粗粉在微 波條件下，反應(yīng)速度加快，浸出反應(yīng)時(shí)對(duì)溫度和浸出劑濃度的依賴性降低。因此，通過微波 活化可在較低反應(yīng)溫度及較低濃度的浸出劑下實(shí)現(xiàn)其有效浸出，達(dá)到節(jié)能作用。
[0012] 2.本發(fā)明的超微粉碎過程中，水蛭素的溶出具有擴(kuò)散阻力小、溶出路徑短、溶出面 積大的優(yōu)勢外，水蛭粗品顆粒還不斷的受到機(jī)械力的剪切、擠壓，直至達(dá)到細(xì)胞級(jí)粉碎，這 些機(jī)械力極大地增加了乙醇溶液的對(duì)流，提高了質(zhì)量傳遞系數(shù)，促使水蛭素迅速地向乙醇 溶液轉(zhuǎn)移。該提取技術(shù)在較短的時(shí)間內(nèi)即可完成藥物提取，且整個(gè)操作過程可控制在低溫 條件下進(jìn)行。
[0013] 3.本發(fā)明使用冷凍干燥法對(duì)水蛭素進(jìn)行濃縮，在冰凍狀態(tài)下直接升華去除水分， 既使蛋白質(zhì)不易變性，又保持水蛭素的固有成分。
[0014] 4.本發(fā)明的水蛭素的提取方法具有工藝合理、操作方便實(shí)用、水蛭素成品的質(zhì)量 穩(wěn)定性好和收率高的特點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 為了使本發(fā)明所述的內(nèi)容更加便于理解，下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明所述的 技術(shù)方案做進(jìn)一步的說明，但是本發(fā)明不僅限于此。
[0016] 實(shí)施例1 本發(fā)明的水蛭素的提取方法，包括以下步驟： A、 將洗凈的水蛭用線、繩或者鐵絲穿起，懸掛在陽光下暴曬，得水蛭干燥全體； B、 稱取干燥水蛭，粗粉碎后過篩，精密稱取水蛭粗粉加入乙醇，料液比為1:1，在微波條 件下浸泡，后將混懸液超微粉碎，將得到的水蛭混懸液離心后，取上清液； C、 將上述清液進(jìn)行濃縮，即得。
[0017] 所述的乙醇的濃度為30%。
[0018] 所述的微波條件所述的微波條件為微波功率隨溫度自動(dòng)變頻控制，非脈沖微波連 續(xù)加熱，功率自動(dòng)變化范圍為〇~l〇〇〇W ;溫度控制為50°C。
[0019] 所述的浸泡時(shí)間為lh。
[0020] 所述的超微粉碎時(shí)間為lOmin。
[0021] 所述的步驟C中冷凍干燥的具體做法為：將步驟B中的上清液冷凍至水的冰點(diǎn)以 下，然后移置干燥器，密閉，迅速抽空，并維持在抽空狀態(tài)3小時(shí)。
[0022] 實(shí)施例2 本發(fā)明的水蛭素的提取方法，包括以下步驟： A、 將洗凈的水蛭用線、繩或者鐵絲穿起，懸掛在陽光下暴曬，得水蛭干燥全體； B、 稱取干燥水蛭，粗粉碎后過篩，精密稱取水蛭粗粉加入乙醇，料液比為1:3,在微波條 件下浸泡，后將混懸液超微粉碎，將得到的水蛭混懸液離心后，取上清液； C、 將上述清液進(jìn)行濃縮，即得。
[0023] 所述的乙醇的濃度為50%。
[0024] 所述的微波條件所述的微波條件為微波功率隨溫度自動(dòng)變頻控制，非脈沖微波連 續(xù)加熱，功率自動(dòng)變化范圍為〇~l〇〇〇W ;溫度控制為60°C。
[0025] 所述的浸泡時(shí)間為I. 5h。
[0026] 所述的超微粉碎時(shí)間為12min。
[0027] 所述的步驟C中冷凍干燥的具體做法為：將步驟B中的上清液冷凍至水的冰點(diǎn)以 下，然后移置干燥器，密閉，迅速抽空，并維持在抽空狀態(tài)4小時(shí)。
[0028] 實(shí)施例3 本發(fā)明的水蛭素的提取方法，包括以下步驟： A、 將洗凈的水蛭用線、繩或者鐵絲穿起，懸掛在陽光下暴曬，得水蛭干燥全體； B、 稱取干燥水蛭，粗粉碎后過篩，精密稱取水蛭粗粉加入乙醇，料液比為1:5,在微波條 件下浸泡，后將混懸液超微粉碎，將得到的水蛭混懸液離心后，取上清液； C、 將上述清液進(jìn)行濃縮，即得。
[0029] 所述的乙醇的濃度為80%。
[0030] 所述的微波條件所述的微波條件為微波功率隨溫度自動(dòng)變頻控制，非脈沖微波連 續(xù)加熱，功率自動(dòng)變化范圍為〇~l〇〇〇W ;溫度控制為70°C。
[0031] 所述的浸泡時(shí)間為2h。
[0032] 所述的超微粉碎時(shí)間為15min。
[0033] 所述的步驟C中冷凍干燥的具體做法為：將步驟B中的上清液冷凍至水的冰點(diǎn)以 下，然后移置干燥器，密閉，迅速抽空，并維持在抽空狀態(tài)5小時(shí)。
[0034] 實(shí)施例4 本發(fā)明各實(shí)施例不同濃度、溫度及提取時(shí)間的水蛭提取效果 1材料與方法 1. 1實(shí)驗(yàn)材料 I. I. 1儀器SIGMA單道移液器；RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮公司）；Sigma4K15 高溫冷凍離心機(jī)；自動(dòng)酸堿滴定儀DL53Mettler Toledo Switzer-land。
[0035] I. I. 2藥物與試劑水蛭購于北京松蘭中藥飲片有限公司，經(jīng)北京松蘭中藥飲片公 司主任中藥師蔡長德鑒定為水輕科動(dòng)物螞蟥干燥全體；纖維蛋白原（Fibrinogen) :SIGMA; 凝血酶（Thrombin) :SIGMA〇
[0036] I. 2實(shí)驗(yàn)方法 1. 2. 1水蛭素的測定方法取纖維蛋白原0.25 g，溶于50 ml的Tris-HCl緩沖液 (pH-8)中，得0.5%的纖維蛋白原溶液。稀釋凝血酶到5 NIH/ml。取0.2 ml纖維蛋白原溶 液，加入20ul水蛭素提取液，并加入凝血酶至凝固，得水蛭素含量=(凝血酶濃度X凝血酶 用量）/水蛭素提取液體積。
[0037] 1. 2. 2分別按照本發(fā)明實(shí)施例1-3的方法進(jìn)行提取，用上述方法檢測提取物的 含量，檢測結(jié)果如表1所示。
[0038] 表1不同濃度乙醇的提取結(jié)果
由表1可知，本發(fā)明的水蛭素的提取方法，提取收率較高。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種水蛭素的提取方法，其特征在于，包括以下步驟： A、 將洗凈的水蛭用線、繩或者鐵絲穿起，懸掛在陽光下暴曬，得水蛭干燥全體； B、 稱取干燥水蛭，粗粉碎后過篩，精密稱取水蛭粗粉加入乙醇，料液比為1:1~5,在微波 條件下浸泡，后將混懸液超微粉碎，將得到的水蛭混懸液離心后，取上清液； C、 將上述清液進(jìn)行濃縮，即得。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水蛭素的提取方法，其特征在于：所述的步驟B中乙醇的濃 度為 30% -80%。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水蛭素的提取方法，其特征在于：所述的步驟B中微波條件 為微波功率隨溫度自動(dòng)變頻控制，非脈沖微波連續(xù)加熱，功率自動(dòng)變化范圍為〇~l〇〇〇W ;溫 度控制為50-70 °C。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水蛭素的提取方法，其特征在于：所述的步驟B中浸泡時(shí)間 為 l_2h。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水蛭素的提取方法，其特征在于：所述的步驟B中超微粉碎 時(shí)間為l〇_15min。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水蛭素的提取方法，其特征在于，所述的步驟C中冷凍干燥的 具體做法為：將步驟B中的上清液冷凍至水的冰點(diǎn)以下，然后移置干燥器，密閉，迅速抽空， 并維持在抽空狀態(tài)3-5小時(shí)。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種水蛭素的提取方法，包括以下步驟：A、將洗凈的水蛭用線、繩或者鐵絲穿起，懸掛在陽光下暴曬，得水蛭干燥全體；B、稱取干燥水蛭，粗粉碎后過篩，精密稱取水蛭粗粉加入乙醇，料液比為1:1~5，在微波條件下浸泡，后將混懸液超微粉碎，將得到的水蛭混懸液離心后，取上清液；C、將上述清液進(jìn)行濃縮，即得。本發(fā)明的水蛭素的提取方法具有工藝合理、操作方便實(shí)用、水蛭素成品的質(zhì)量穩(wěn)定性好和收率高的特點(diǎn)。
【IPC分類】C07K1/14, A61P7/02, A61K38/58, C07K14/815
【公開號(hào)】CN104945504
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510343595
【發(fā)明人】謝海林
【申請(qǐng)人】廣西復(fù)鑫益生物科技有限公司平南分公司
【公開日】2015年9月30日
【申請(qǐng)日】2015年6月19日