從披針葉黃華地上部分提取金雀花堿的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物有效成分分離提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從披針葉黃華地上部分提 取金雀花堿的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 金雀花堿是一種對(duì)α 4 β 2煙堿乙酰膽堿受體具有高親和力的部分激動(dòng)劑，也是一 種價(jià)格相對(duì)較低而效果明顯的戒煙成分。
[0003] 雖然披針葉黃華種子部位是提取分離金雀花堿的傳統(tǒng)原料，但由于本種植物為野 生種，種子的產(chǎn)量受氣候及自身生長生理?xiàng)l件的影響較大，不適宜作為大量工業(yè)生產(chǎn)的原 料，而本種植物為多年生草本，在北方草原為主要的牧場(chǎng)優(yōu)勢(shì)物種，資源豐富，同時(shí)也是危 害畜牧業(yè)的主要有毒植物，在花期包括金雀花堿等的生物堿含量較高，作為提取金雀花堿 的原料既具有較高的經(jīng)濟(jì)效益，也具有明顯的社會(huì)效益。
[0004]目前，金雀花堿的工業(yè)化提取方法主要是披針葉黃華披針葉黃華（T. Ianceolata R. Br.)的種籽為原料，以有機(jī)溶劑為主要分離載體，如吳勇等"高純度金雀花堿的提取 方法研宄"（內(nèi)蒙古師范大學(xué)學(xué)報(bào)自然科學(xué)（漢文）版，2004,33:186-187)和中國專利 ZL200910023485. 5等。根據(jù)本發(fā)明人檢測(cè)，該植物地上部分只是種子中金雀花堿是含量的 1/2左右，并且雜質(zhì)生物堿如N-甲?；鹑富▔A、N-甲基金雀花堿等所占比重更大（藥物 分析雜志，2014, 34 :1737-1740)，難以進(jìn)一步分離和純化金雀花堿。另外，現(xiàn)有工藝需要用 到大量低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑，如二氯甲烷、或三氯甲烷、或乙酸乙酯等，成本高，因此現(xiàn)有金雀花 堿規(guī)?；a(chǎn)工藝具有較大的局限性。
[0005] 其他采用披針葉黃華地上部分或全草作為分離金雀花堿的方法，一般以硅膠等作 為主要分離載體，以氯仿-甲醇等混合有機(jī)溶劑洗脫，金雀花堿損失嚴(yán)重，輔料難以回收利 用，工藝復(fù)雜，導(dǎo)致成本高，難以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種從披針葉黃華地上部分提取金雀花堿的方法，本發(fā)明克 服了現(xiàn)有提取金雀花堿的方法不適用于以披針葉黃華地上部分為原料的問題，具有操作簡(jiǎn) 便，有機(jī)溶劑用量少，成本較低，易于工業(yè)化生產(chǎn)等特點(diǎn)。
[0007] 本發(fā)明方法以來源穩(wěn)定的披針葉黃華地上部分為原料，以經(jīng)濟(jì)性更好的陽離子樹 脂為主要分離載體，調(diào)節(jié)披針葉黃華地上部分提取液的PH值后通過氫型陽離子樹脂，用去 離子水洗脫雜質(zhì)后，再以氨性乙醇洗脫金雀花堿，最后通過濃縮、干燥獲得金雀花堿，操作 簡(jiǎn)便，提取率尚。
[0008] 一種從披針葉黃華地上部分提取金雀花堿的方法，具體操作步驟如下：
[0009] 1、提?。号樔~黃華花期的地上部分干燥后粉碎后，用乙醇或甲醇熱回流提取 2-3次，提取液過濾后濃縮回收有機(jī)溶劑，得到比重為1. 05-1. 10的披針葉黃華提取液； [0010] 2、有機(jī)溶劑除雜：將上述提取液用無機(jī)酸調(diào)節(jié)pH至2左右，用等量乙酸乙酯萃取 2次，萃取過的酸性水溶液回收有機(jī)溶劑后備用；
[0011] 3、上樣液的制備：將上述酸性水溶液用堿性試劑調(diào)節(jié)pH至8-12左右，同時(shí)控制水 溶液中金雀花堿的含量不高于30mg/mL，既得上樣液；
[0012] 4、陽離子分離：將上樣液通過氫型001X7型陽離子交換樹脂，用去離子水充分洗 滌樹脂至無明顯生物堿反應(yīng)（Dragendorff試劑）為止，再用氨性乙醇混合溶液作為洗脫溶 劑洗脫樹脂至無明顯生物堿反應(yīng)（DragendorfT試劑）為止，合并洗脫液，濃縮、干燥，既得 金雀花堿提取物。
[0013] 其中強(qiáng)酸性陽離子樹脂是指以苯乙烯和二乙烯苯聚合物為骨架，以強(qiáng)酸性基團(tuán)磺 酸基（-SO3H)為交換基團(tuán)的樹脂。
[0014] 其中吸附過披針葉黃華提取液后的陽離子樹脂用氨性乙醇洗脫，優(yōu)選1.0 N NH40H/90% EtOH 溶液。
[0015] 本發(fā)明提供的金雀花堿提取物的制備方法中，優(yōu)選無機(jī)酸為鹽酸，堿性試劑為氨 水。
[0016] 本發(fā)明提供的金雀花堿提取物的制備方法中，優(yōu)選上樣液pH為12。
[0017] 本發(fā)明中披針葉黃華提取液上樣的流速為lBV/h，氨性乙醇洗脫流速為2BV/h。
[0018] 本發(fā)明克服了現(xiàn)有工藝的不足，采用陽離子樹脂對(duì)目標(biāo)進(jìn)行分離和純化，可以有 效提高金雀花堿提取物含量、減少低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑如氯仿等的用量，降低生產(chǎn)成本。
[0019] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0020] 1、本發(fā)明的制備方法操作簡(jiǎn)便、提取率高、成本低、易于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0021] 2、本發(fā)明采用氫型001X7型陽離子交換樹脂具有金雀花堿交換量高，原料處理 量大的特點(diǎn)。
[0022] 3、本發(fā)明根據(jù)金雀花堿的物化性質(zhì)選擇上樣液pH為12左右，可以有效去除N-甲 ?；鹑富▔A等雜質(zhì)成分，提高最終產(chǎn)品的純度。
【附圖說明】
[0023] 圖1是金雀花堿和N-甲酰基金雀花堿的HPLC圖譜。
[0024] 圖2是金雀花堿提取物的HPLC圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0025] 下面通過附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明方法作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0026] 實(shí)施例1-3 :不同上樣液體積對(duì)金雀花堿提取效果的比較
[0027] 取干燥的披針葉黃華地上部分材料100公斤，用80 %甲醇熱回流提取3次，合并提 取液，過濾，減壓濃縮，用鹽酸調(diào)節(jié)PH至2左右，用等量乙酸乙酯萃取2次，萃取過的酸性水 溶液減壓濃縮除去乙酸乙酯，即得披針葉黃華提取液。上述提取液用NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH至 12,其中金雀花堿含量為23. 05mg/mL，得到披針葉黃華上樣液，該上樣液再分為原體積的 1/KK3/10和3/5,分別以I. 0、1. 5和2. OBV/h的流速通過處理好的不同的氫型001X7型 陽離子交換樹脂柱，上樣完畢后，以去離子水洗至無生物堿反應(yīng)為止（Dragendorff試劑）， 用IN氨水/90 %乙醇洗脫，至洗脫液不顯生物堿反應(yīng)（Dragendorff試劑）為止，洗脫液減 壓濃縮回收有機(jī)溶劑，干燥，既得金雀花堿提取物。結(jié)果見下表。
[0028]
[0029] 實(shí)施例4 :金雀花堿提取物純度的HPLC分析
[0030] 色譜條件：
[0031] 色譜柱：UltisilTM Wel_C8 (5 μ m，4. 6mmX 250mm);流動(dòng)相：甲醇-〇· 05mol/L 磷酸 二氫鉀水溶液（15 :85);體積流量：1.0ml/min ;檢測(cè)波長：314nm，柱溫：25°C。
[0032] 對(duì)照品洛液的制備：
[0033] 分別精密稱取60°C干燥至恒重的金雀花堿和N-甲?；鹑富▔A適量，置50mL量 瓶中，用流動(dòng)相溶解至刻度，制成每ImL含金雀花堿和N-甲?；鹑富▔A分別為0. 36mg和 0· 22mg的對(duì)照品溶液。
[0034] 線性關(guān)系考查
[0035] 精密吸取0. 10、0. 25、0. 5、1. 25、2. 5mL上述對(duì)照品溶液溶液分別置于IOmL量瓶 中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，混均，精密吸取上述溶液各10 μ L注入高效液相色譜儀，記錄相 關(guān)色譜峰面積。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得金雀花堿標(biāo)準(zhǔn)曲線 方程Y = 2. 941X106X+18946，r = 0. 9995,線性范圍0. 036~3. 6yg ;Ν-甲?；鹑富▔A 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y = 2. 608 X 106Χ+10342,線性范圍0. 022~2. 2 μ g。經(jīng)測(cè)定，金雀花堿提取 液中金雀花堿的含量為23. Omg/mL，N-甲?；鹑富▔A為4. 5mg/mL。
[0036] 金雀花堿對(duì)照品及金雀花堿提取物HPLC圖分別見附圖1和附圖2。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從披針葉黃華地上部分提取金雀花堿的方法，其特征在于所用原料為處于花期 的披針葉黃華地上部分，經(jīng)常規(guī)甲醇熱回流提取后，減壓濃縮至比重為1. 05-1. 10的含金 雀花堿的披針葉黃華提取液；提取液用無機(jī)酸調(diào)節(jié)PH至2后，過濾，用乙酸乙酯萃取除雜， 萃取過的酸性水溶液用堿性試劑調(diào)節(jié)pH至8-12,同時(shí)控制水溶液中金雀花堿的含量不高 于30mg/mL，既得上樣液；上樣液通過強(qiáng)酸性陽離子樹脂吸附金雀花堿，用去離子水充分洗 滌樹脂至無明顯生物堿反應(yīng)為止，再用氨性乙醇洗脫，收集含生物堿的洗脫液，再經(jīng)過濃縮 干燥，既得金雀花堿提取物，其中含金雀花堿可達(dá)到43%以上。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述從披針葉黃華地上部分提取金雀花堿的方法，其特征在于強(qiáng)酸 性陽離子樹脂是指以苯乙烯和二乙烯苯聚合物為骨架，以強(qiáng)酸性基團(tuán)磺酸基（-SO 3H)為交 換基團(tuán)的樹脂。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述從披針葉黃華地上部分提取金雀花堿的方法，其特征在于吸附 過披針葉黃華提取液后的陽離子樹脂用氨性乙醇洗脫，優(yōu)選1.0 N NH40H/90% EtOH溶液。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述從披針葉黃華地上部分提取金雀花堿的方法，其特征在于上樣 液pH為12。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述從披針葉黃華地上部分提取金雀花堿的方法，其特征在于披針 葉黃華提取液上樣的流速為lBV/h，氨性乙醇洗脫流速為2BV/h。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從披針葉黃華地上部分提取金雀花堿的方法，采用特定陽離子樹脂為主要分離載體提取金雀花堿提取物。本發(fā)明所用原料是花期的披針葉黃華地上部分，經(jīng)過常規(guī)甲醇熱回流提取、濃縮得到披針葉黃華地上部分的流浸膏。上述浸膏用無機(jī)酸溶解后，過濾，濾液再用氨水等調(diào)節(jié)pH至8-12左右，經(jīng)陽離子樹脂層析分離，除去部分雜質(zhì)后，再用氨性乙醇洗脫，含金雀花堿的洗脫液經(jīng)濃縮干燥，既得金雀花堿提取物，其中含金雀花堿可達(dá)到43％以上。本發(fā)明克服了現(xiàn)有提取金雀花堿的方法不適用于以披針葉黃華地上部分為原料的問題，具有操作簡(jiǎn)便，有機(jī)溶劑用量少，成本較低，易于工業(yè)化生產(chǎn)等特點(diǎn)。
【IPC分類】C07D471/22
【公開號(hào)】CN104961739
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510435047
【發(fā)明人】周軍輝, 李楊, 余剛, 衛(wèi)偉光, 劉立成
【申請(qǐng)人】陜西省西安植物園
【公開日】2015年10月7日
【申請(qǐng)日】2015年7月22日