作為蛋白酪氨酸激酶抑制劑的偶聯(lián)肽化合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于化學(xué)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及抗癌的化合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 蛋白激酶（PKs)是催化細(xì)胞蛋白質(zhì)中特定的絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸殘基磷酸化 的酶。這些底物蛋白質(zhì)的翻譯后修飾作為調(diào)控細(xì)胞增殖、活化和/或分化的分子開關(guān)。在 許多疾病狀態(tài)包括良性和惡性增殖性病癥中已經(jīng)觀察到了異?；蜻^度的PK活性。在很多 情況下，利用PK抑制劑體外治療疾病例如增殖性疾病已是可行的，并且在很多情況下，利 用PK抑制劑體內(nèi)治療疾病例如增殖性疾病已是可行的。所述激酶主要分成兩組：特異性 磷酸化絲氨酸和蘇氨酸的激酶以及特異性磷酸化酪氨酸的激酶。此外，一些稱作"雙特異 性"激酶的激酶能夠磷酸化酪氨酸以及絲氨酸/蘇氨酸殘基。
[0003] W02006/000420(特別是1-8頁）公開了有關(guān)PKs、它們的作用模式和它們與要治 療的病癥或病患的關(guān)系的詳情。該文獻(xiàn)還公開了用于治療蛋白激酶依賴性疾病的雜芳基 芳基脲類。此外，W003/023004和W002/102972公開了由FGFR3突變產(chǎn)生的病癥。此外， W005/118580從屬類上公開了用作HIV抑制劑的喹啉衍生物。在涉及蛋白激酶的這些文 獻(xiàn)和文中所引的參考文獻(xiàn)中，可以合理地預(yù)期異?；钚缘恼{(diào)節(jié)（尤其是所述激酶活性的抑 制）對于文獻(xiàn)中所提到的疾病是有用的。
[0004] 盡管認(rèn)為上面參考文獻(xiàn)中公開的分子是有活性的，但是它們?nèi)匀痪哂幸恍┤秉c(diǎn)。 因此，對于能阻斷異常的組成性受體蛋白酪氨酸激酶活性特別是FGFR活性、并由此解決與 上述突變相關(guān)的臨床表現(xiàn)且調(diào)節(jié)各種生物功能的改進(jìn)的（例如高度親和的和/或選擇性 的）分子而言，仍然存在未被滿足的需求?？紤]到大量的蛋白激酶抑制劑以及眾多的增殖 性疾病和其他PK相關(guān)的疾病，一直存在提供用作PK抑制劑并由此用于治療所述蛋白酪氨 酸激酶（PTK)相關(guān)疾病的新型化合物的需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種毒性小、抗癌效果好的肽鏈取 代的化合物。
[0006] 本發(fā)明根據(jù)一些與蛋白酪氨酸激酶相互作用的小分子化合物，其在母體骨架上 引入肽（氨基酸）鏈，得到與蛋白酪氨酸激酶相互作用的肽基取代化合物。
[0007] 本發(fā)明的上述技術(shù)目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)上述目的：
一種肽基取代的化合物，結(jié)構(gòu)式如式I所示， 所述的Rl為三肽、四肽。
[0008] 所述的 Rl 的氨基酸序列為 GTH、GAK、GKR、GKD、GRQ、GAS、GLA、GEKL、GMAW、GSEH、 GRKG。其中各個大寫字母代表本領(lǐng)域熟知的氨基酸。
[0009] 更進(jìn)一步提供上述的肽基取代化合物的制備方法，包括以下步驟： (1)將[5_[[(2,4,6_三甲基苯基）氨基]羰基]-4-甲基-2-噻唑基]氨基甲酸，1， 1-二甲基乙基酯（l〇g，26. 63mmol)的三氟乙酸（IOOmL)溶液在室溫下攪拌3小時。將該溶 液減壓濃縮，殘余物用乙酸乙酯（700 mL)稀釋，用5% KHCO3水溶液（400mL，2x)、水和鹽水 洗；干燥（MgSO4),過濾并濃縮。殘余物用乙醚（200mL)和乙腈（IOOmL)洗，得到化合物Sl， 為白色固體；
(2) 將Sl與氯乙酸在堿性環(huán)境中進(jìn)行烴基化反應(yīng)，而后再與氯化亞砜進(jìn)行氯代反應(yīng)， 得到化合物S2或者采用本領(lǐng)域常用的其它的方式實(shí)現(xiàn)Cl的取代；
(3) 將S2與甘氨酸進(jìn)行取代反應(yīng)，得到化合物S3 ;
(4) 將S3的化合物分別與通過Fmoc基團(tuán)保護(hù)的不同的氨基酸連接到Rink Amide AM 樹脂進(jìn)而發(fā)生縮合反應(yīng)獲得目的的化合物(如式I所示)。所述的縮合反應(yīng)是通過多肽固相 合成法進(jìn)行縮合反應(yīng)后，用三氟乙酸脫去樹脂，最終獲得所述的肽基取代化合物。
[0010] 更進(jìn)一步提供上述的肽基取代化合物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
[0011] 所述的抗癌藥物的劑型為片劑、丸劑、膠囊、注射劑、懸浮劑或乳劑。
[0012] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果： 1. 本發(fā)明的新型肽基取代化合物蛋白酪氨酸激酶抑制，顯示對癌細(xì)胞的良好的抑制 活性，從而對多種癌細(xì)胞株具有顯著的抑制作用； 2. 本發(fā)明的新型肽基取代化合物對正常細(xì)胞毒性小，在制備抗癌藥物的應(yīng)用中安全 性尚； 3. 本發(fā)明的新型肽基取代化合物可以可制成各種劑型的抗癌藥物，具有很高的醫(yī)學(xué) 價值和廣闊的市場前景。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 實(shí)施例1肽基取代化合物的制備 (1) 將[5_[[(2,4,6_三甲基苯基）氨基]羰基]-4-甲基-2-噻唑基]氨基甲酸，1， 1-二甲基乙基酯（l〇g，26. 63mmol)的三氟乙酸（IOOmL)溶液在室溫下攪拌3小時。將該溶 液減壓濃縮，殘余物用乙酸乙酯（700 mL)稀釋，用5% KHCO3水溶液（400mL，2x)、水和鹽水 洗；干燥（MgSO4),過濾并濃縮。殘余物用乙醚（200mL)和乙腈（IOOmL)洗，得到化合物Sl， 為白色固體； (2) 將Sl與氯乙酸在堿性環(huán)境中進(jìn)行烴基化反應(yīng)，而后再與氯化亞砜進(jìn)行氯代反應(yīng)， 得到化合物S2或者采用本領(lǐng)域常用的其它的方式實(shí)現(xiàn)Cl的取代； (3) 將S2與甘氨酸進(jìn)行取代反應(yīng)，得到化合物S3 ; (4) 將S3的化合物分別與通過Fmoc基團(tuán)保護(hù)的不同的氨基酸（GTH、GAK、GKR、GKD、GRQ、 GAS、GLA、GEKL、GMAW、GSEH、GRKG)連接到Rink Amide AM樹脂進(jìn)而發(fā)生縮合反應(yīng)獲得目的 的化合物。所述的縮合反應(yīng)是通過多肽固相合成法進(jìn)行縮合反應(yīng)后，用三氟乙酸脫去樹脂， 最終獲得所述的肽基取代化合物。通過串聯(lián)液質(zhì)鑒定，化合物結(jié)構(gòu)正確。
[0014] 實(shí)施例2肽基取代化合物的功能驗(yàn)證 人肺腺癌細(xì)胞株A549,以RPMI1640培養(yǎng)液(含10%滅活小牛血清、100 U/mL青霉素和 100 U/mL鏈霉素）培養(yǎng)，生長于37 °C、5%C02培養(yǎng)箱內(nèi)。
[0015] 消化制備細(xì)胞懸液IX 105/mL，在96孔板中，每孔加100 μ L細(xì)胞懸液，培養(yǎng)24 h 貼壁。換液，加入含不同濃度藥物的培養(yǎng)液，每孔100 μ L，每一濃度設(shè)4個平行孔，化合物 終濃度為2.0 mg/L。繼續(xù)培養(yǎng)72 h。每孔加20 μ L MTT (5 mg/mL)，放回培養(yǎng)箱，繼續(xù)孵 育4 h。棄上清，每孔加入150 μ L DMS0,輕微振蕩15 min，使結(jié)晶充分溶解，空白對照孔調(diào) 零，20 min內(nèi)，選擇490 nm波長，在自動焚光酶標(biāo)儀上測定各孔的吸光度值(A)。實(shí)驗(yàn)重復(fù) 3次，取平均值。計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率：抑制率％=( 1 -實(shí)驗(yàn)組A值/對照組A值)X 100%。 抑制結(jié)果如下：

本專利所述的化合物在濃度為2mg/L時，對癌細(xì)胞有明顯抑制作用。能夠很好的說明 此類化合物的作用特點(diǎn)和構(gòu)效關(guān)系。因此本發(fā)明的肽基取代化合物可用于制備以激酶為靶 點(diǎn)的抗癌藥物。
[0016] 同時采用MCF-7細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)，得到基本一致的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。說明化合物具有廣譜 的抗癌效果。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種化合物，其特征在于，結(jié)構(gòu)式如式I所示，所述Rl為任何適合的基團(tuán)。2. 如權(quán)利要求1所述的化合物，其為偶聯(lián)肽化合物，所述的Rl為GTH、GAK、GKR、GKD、 GRQ、GAS、GLA、GEKL、GMAW、GSEH 或 GRKG。3. 根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的化合物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的化合物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所 述的抗癌藥物的劑型為片劑、丸劑、膠囊、注射劑、懸浮劑或乳劑。5. 根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的化合物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所 述的抗癌藥物為抗肺癌或乳腺癌藥物。
【專利摘要】本發(fā)明涉及作為蛋白酪氨酸激酶抑制劑的式(I)化合物，其為一種偶聯(lián)肽化合物；該化合物能夠用于治療一種或多種蛋白酪氨酸激酶介導(dǎo)的疾病。
【IPC分類】A61K38/06, C07K5/08, A61K38/07, A61P35/00, C07K5/10, C07K1/06
【公開號】CN104974222
【申請?zhí)枴緾N201510322699
【發(fā)明人】楊洋
【申請人】楊洋
【公開日】2015年10月14日
【申請日】2015年6月14日