金霉素菌種選育培養(yǎng)基及菌種選育方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物發(fā)酵領(lǐng)域，具體涉及一種金霉素菌種選育培養(yǎng)基及菌種選育方法。
【背景技術(shù)】
[0002]金霉素是金色鏈霉菌(streptomyces aureofaciens)的次級(jí)代謝產(chǎn)物，為四環(huán)類抗生素，常作為飼料添加劑，對(duì)革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌、螺旋體、衣原體、枝原體、立克次氏體等均具有抗菌作用，是一種廣譜抗菌素，既可抗病，又可增肥，不良反應(yīng)較小。隨著生物制藥領(lǐng)域?qū)λ沫h(huán)類抗生素的研宄日趨深入，目前以鹽酸金霉素和飼料級(jí)金霉素為核心的金霉素產(chǎn)品非常適應(yīng)國(guó)內(nèi)外養(yǎng)殖環(huán)境，越來(lái)越多的飼料廠把金霉素作為抗生素的首選藥品，使其市場(chǎng)容量越來(lái)越大，銷售前景較為樂(lè)觀。因此提高金霉素發(fā)酵水平，提高經(jīng)濟(jì)效益，勢(shì)在必行。
[0003]金色鏈霉菌屬放線菌，一般以孢子的形式保存。由于該菌種選育程序要經(jīng)過(guò)分離、初篩、復(fù)篩、穩(wěn)定性試驗(yàn)，因此選育時(shí)間較長(zhǎng)，一般在3-6個(gè)月之間。另外，進(jìn)行一次菌種選育挑選菌落一般在50-500個(gè)左右，因此搖瓶試驗(yàn)的工作量較大，周期較長(zhǎng)。目前，國(guó)內(nèi)金霉素菌種的選育在初篩階段一般采取二級(jí)發(fā)酵模式，即將分離好的菌落接入斜面，將生長(zhǎng)好的斜面孢子接入種子搖瓶后，培養(yǎng)22-26小時(shí)，取生長(zhǎng)好的種子液接種發(fā)酵瓶，培養(yǎng)5天后放瓶，測(cè)定效價(jià)。由于初篩種子瓶一發(fā)酵瓶是一對(duì)一，挑選的菌落越多，需要的搖瓶也越多，工作量就越大，占用的搖床也就越多。很顯然，上述方法越來(lái)越不經(jīng)濟(jì)，甚至成為金霉素生產(chǎn)發(fā)展的瓶頸，因此，有必要對(duì)現(xiàn)有技術(shù)予以改進(jìn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種金霉素菌種選育培養(yǎng)基及菌種選育方法，通過(guò)本發(fā)明的改進(jìn)，將菌種選育階段的二級(jí)發(fā)酵模式改為一次性發(fā)酵，縮短了菌種選育時(shí)間，提高了菌種選育效率。
[0005]本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下:
[0006]1、金霉素菌種選育培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)，由以下組分組成:玉米淀粉6.0?7.5 %、黃豆餅粉3.5?4.5%、酵母粉0.15?0.25%、碳酸鈣0.55?0.65%、硫酸銨0.3?0.4 %、氯化鈉0.2?0.3 %、硫酸鎂0.02?0.03 %、磷酸二氫鉀0.02?0.03 %，豆油2.86?4.28%，余量為水。
[0007]優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)，由以下組分組成:玉米淀粉6.0%、黃豆餅粉4.0%、酵母粉0.2 %、碳酸鈣0.6%、硫酸銨0.35%、氯化鈉0.25%、硫酸鎂0.02%、磷酸二氫鉀0.03%、豆油4.28%，余量為水。
[0008]優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)，由以下組分組成:玉米淀粉7.0%、黃豆餅粉3.5%、酵母粉0.25%、碳酸鈣0.65%、硫酸銨0.3%、氯化鈉0.2%、硫酸鎂0.025%、磷酸二氫鉀0.025%、豆油2.86%，余量為水。
[0009]2、利用上述金霉素菌種選育培養(yǎng)基選育菌種的方法，培養(yǎng)基配制好后，按照7:50的體積比裝入瓶中進(jìn)行滅菌，滅菌條件為0.090?0.105Mpa、120±l°C滅菌30分鐘；滅菌完畢后，按試管斜面菌種量的1/20接種，并在220?260轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，30±1.5°C恒溫培養(yǎng)6天。
[0010]本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明通過(guò)改進(jìn)金霉素菌種選育過(guò)程中的培養(yǎng)基配方，將現(xiàn)有技術(shù)中的種子培養(yǎng)、種子發(fā)酵培養(yǎng)二級(jí)發(fā)酵模式變?yōu)橐淮涡园l(fā)酵模式，不僅大大縮短了菌種選育時(shí)間，提高了菌種選育效率，還減少了搖瓶和搖床的使用量，降低了成本，降低了菌種被污染的幾率，因此，本發(fā)明適合大批量菌種篩選。
【具體實(shí)施方式】
[0011]下面對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。
[0012]實(shí)施例1
[0013]改進(jìn)后的金霉素菌種選育培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)，由以下組分組成:
[0014]玉米淀粉6.0%、黃豆餅粉4.0%、酵母粉0.2%、碳酸鈣0.6%、硫酸銨0.35%、氯化鈉0.25%、硫酸鎂0.02%、磷酸二氫鉀0.03%、豆油4.28%，余量為水。
[0015]按35mL/250mL三角瓶的量裝入培養(yǎng)基，4g棉塞，二層紗布將瓶口封好，于0.090?0.105Mpa、120±l°C 滅菌 30 分鐘。
[0016]滅菌完畢后，接種方法:挖塊法約Icm2 (試管斜面的1/20)，在220?260轉(zhuǎn)/分旋轉(zhuǎn)搖瓶機(jī)30±1.5°C恒溫培養(yǎng)6天。培養(yǎng)完畢的發(fā)酵液呈深棕褐色，稠，pH5.6-7.6，效價(jià)不低于16000U/ml，可直接進(jìn)入下一選育程序。
[0017]實(shí)施例2
[0018]改進(jìn)后的金霉素菌種選育培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)，由以下組分組成:
[0019]玉米淀粉7.0%、黃豆餅粉3.5%、酵母粉0.25%、碳酸鈣0.65%、硫酸銨0.3 %、氯化鈉0.2%、硫酸鎂0.025%、磷酸二氫鉀0.025%、豆油2.86%，余量為水。
[0020]按35mL/250mL三角瓶的量裝入培養(yǎng)基，4g棉塞，二層紗布將瓶口封好，于0.090?0.105Mpa、120±l°C 滅菌 30 分鐘。
[0021]滅菌完畢后，接種方法:挖塊法約Icm2 (試管斜面的1/20)，在220?260轉(zhuǎn)/分旋轉(zhuǎn)搖瓶機(jī)30±1.5°C恒溫培養(yǎng)6天。培養(yǎng)完畢的發(fā)酵液呈深棕褐色，稠，pH5.6-7.6，效價(jià)不低于16000U/ml，可直接進(jìn)入下一選育程序。
[0022]對(duì)比實(shí)施例
[0023]菌種選育方法如下:
[0024]將分離培養(yǎng)好的單菌落接到30 X 200mm試管斜面中，34± 1.5°C培養(yǎng)3_5天，然后將斜面孢子按挖塊法約Icm2 (試管斜面的1/20)接入種子瓶，在220?260轉(zhuǎn)/分旋轉(zhuǎn)搖瓶機(jī)中于34±1.5°C培養(yǎng)20?26h，培養(yǎng)好的種子液呈淡黃色，稠，鏡檢菌絲粗壯，無(wú)雜菌，呈網(wǎng)狀分枝；將培養(yǎng)好的種子液按10%接種量轉(zhuǎn)入發(fā)酵瓶，220?260轉(zhuǎn)/分旋轉(zhuǎn)搖瓶機(jī)中于30±1.5°C培養(yǎng)5天，培養(yǎng)完畢的發(fā)酵液呈深棕褐色，稠，pH5.6-7.6，效價(jià)不低于16000U/ml，可進(jìn)入下一選育程序。
[0025]種子瓶培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)，由以下組分組成:玉米淀粉2.5%、黃豆餅粉2.5%、酵母粉0.4%、碳酸鈣0.3%、硫酸銨0.4%、氯化鈉0.1 %、硫酸鎂0.0l %、磷酸二氫鉀0.03%，余量為水。
[0026]滅菌方法為:按30mL/250mL的量裝入三角瓶，4g棉塞，二層紗布將瓶口封好，于0.090 ?0.105Mpa、120±l°C 滅菌 30 分鐘。
[0027]發(fā)酵搖瓶培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)，由以下組分組成:玉米淀粉8.0%、黃豆餅粉4.0%,花生餅粉4.0 %、酵母粉0.4%、玉米漿0.8%、碳酸鈣0.6%、硫酸銨0.3%、氯化鈉0.4%、硫酸鎂0.03%、磷酸二氫鉀0.03%，豆油0.5-1.5mL/瓶，裝量30-40mL/250mL三角瓶，八層紗布將瓶口封好，于0.090?0.105Mpa、120±l°C滅菌30分鐘。
[0028]最后說(shuō)明的是，以上優(yōu)選實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通過(guò)上述優(yōu)選實(shí)施例已經(jīng)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的描述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以在形式上和細(xì)節(jié)上對(duì)其作出各種各樣的改變，而不偏離本發(fā)明權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.金霉素菌種選育培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)，由以下組分組成:玉米淀粉6.0?7.5%、黃豆餅粉3.5?4.5%、酵母粉0.15?0.25%、碳酸鈣0.55?0.65%、硫酸銨0.3?0.4%、氯化鈉0.2?0.3%、硫酸鎂0.02?0.03%、磷酸二氫鉀0.02?0.03%，豆油2.86?4.28%，余量為水。2.如權(quán)利要求1所述的金霉素菌種選育培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)，由以下組分組成:玉米淀粉6.0 %、黃豆餅粉4.0%、酵母粉0.2%、碳酸鈣0.6%、硫酸銨0.35%、氯化鈉0.25%、硫酸鎂0.02%、磷酸二氫鉀0.03%、豆油4.28%，余量為水。3.如權(quán)利要求1所述的金霉素菌種選育培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)，由以下組分組成:玉米淀粉7.0 %、黃豆餅粉3.5%、酵母粉0.25%、碳酸鈣0.65%、硫酸銨0.3%、氯化鈉0.2%、硫酸鎂0.025%、磷酸二氫鉀0.025%、豆油2.86%，余量為水。4.利用權(quán)利要求1?3任一項(xiàng)所述金霉素菌種選育培養(yǎng)基選育菌種的方法，其特征在于，培養(yǎng)基配制好后，按照7:50的體積比裝入瓶中進(jìn)行滅菌，滅菌條件為0.090?.0.105Mpa、120±l°C滅菌30分鐘；滅菌完畢后，按試管斜面菌種量的1/20接種，并在220?.260轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，30 ± 1.5°C恒溫培養(yǎng)6天。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種金霉素菌種選育培養(yǎng)基及菌種選育方法，培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計(jì)組成為：玉米淀粉6.0～7.5％、黃豆餅粉3.5～4.5％、酵母粉0.15～0.25％、碳酸鈣0.55～0.65％、硫酸銨0.3～0.4％、氯化鈉0.2～0.3％、硫酸鎂0.02～0.03％、磷酸二氫鉀0.02～0.03％，豆油2.86～4.28％，余量為水。本發(fā)明通過(guò)改進(jìn)金霉素菌種選育的培養(yǎng)基配方，將現(xiàn)有技術(shù)中的種子培養(yǎng)、種子發(fā)酵培養(yǎng)二級(jí)發(fā)酵模式變?yōu)橐淮涡园l(fā)酵模式，不僅大大縮短了菌種選育時(shí)間，提高了菌種選育效率，還減少了搖瓶和搖床的使用量，降低了成本，降低了菌種被污染的幾率，因此，本發(fā)明適合大批量菌種篩選。
【IPC分類】C12N1/20, C12R1/485
【公開(kāi)號(hào)】CN104988103
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510485721
【發(fā)明人】謝昌賢, 李蘭枝, 劉運(yùn)添, 王鵬飛
【申請(qǐng)人】金河生物科技股份有限公司
【公開(kāi)日】2015年10月21日
【申請(qǐng)日】2015年8月7日