一種大鯢黏液蛋白肽的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于大銳深加工領域，設及一種大銳黏液蛋白膚的制備方法
【背景技術】
[0002] 大銳（An化iasdavidianus)屬兩棲綱、有尾目、隱觸銳科，是我國特有的珍稀特 產(chǎn)，屬國家二類保護動物，主要分布于長江中上游、珠江中上游及漢水上游的溪流中。上世 紀90年代W來，湖南、湖北、陜西及廣西都建立了大量的大銳馴養(yǎng)繁殖企業(yè)。僅湖南省就有 大銳馴養(yǎng)繁殖企業(yè)35家左右，年繁殖能力已達4-5萬尾。隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴大，大銳資源 的精深加工利用成為一個關系大銳產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展的緊迫課題。至今還沒有一種經(jīng)濟效益顯 著的大銳精深加工利用技術，該嚴重制約了大銳養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。
[0003] 大銳體表無鱗，多皮膚腺，在生長過程中不斷分泌黏液。大銳作為有3億5千萬年 的物種，除了具有壽命長、能自我修復的特點，還具有包括體表黏液在內的獨特的非特異性 免疫系統(tǒng)。大銳在長期進化過程中體表黏液具備了抵御環(huán)境變化的能力和豐富的生物學活 性。因此，大銳黏液具有更大的利用價值和利用的可能性。如果能夠對大銳體表黏液進行 開發(fā)利用，可W起到既利用大銳資源，又不危害大銳生長繁殖的效果，是實現(xiàn)大銳資源可持 續(xù)利用的最理想狀態(tài)。
[0004] 經(jīng)檢測黏液中主要成分為水巧3-86% )、蛋白質（12% )，含有少量的多糖 (0.48%)，具有抗菌、抗氧化和抗腫瘤等功效。針對大銳黏液中蛋白質進行提取開發(fā)的報道 比較少見。如何將大銳黏液中蛋白質提取出來是本領域探索的課題。

【發(fā)明內容】

[0005] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種大銳黏液蛋白膚的制備方法。
[0006] 為達到上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：
[0007] 一種大銳黏液蛋白膚的制備方法，步驟如下：
[000引 1)電擊刺激法采集大銳黏液，凍干脫水后研磨粉碎，得黏液凍干粉；
[0009] 2)將所得黏液凍干粉加入50~120倍質量的蒸饋水中，再加入黏液凍干粉質量 10% -30%的堿性蛋白酶，調節(jié)抑至9~9.5,在40~60°C溫度條件下酶解1~化，再將 混合液煮沸1~2min，冷卻至19~25°C;
[0010] 3)將步驟2)處理完成的混合液在3000-4500r/min條件下，離屯、10~20min，取清 液，調節(jié)清液抑值為4~5，在40~45°C溫度條件下，加入清液質量的1 %~2 %活性碳，攬 拌45~60min進行脫色脫腥，然后在3000-4500;r/min條件下，離屯、l〇-15min，過0. 45ym 濾膜得濾液；
[0011] 4)將步驟3)處理完成的濾液在30--60°C溫度條件下旋轉蒸發(fā)濃縮至原樣體積 的1/7~1/8,將濃縮液用塑料袋密封，在溫度19~25°C，壓力150-250MPa條件下，殺菌 l-5min，在潔凈環(huán)境下，真空冷凍干燥、粉碎得到黏液蛋白膚粉。
[0012] 優(yōu)選的，所述步驟2)進行如下：將所得黏液凍干粉加入100倍質量的蒸饋水中，再 加入黏液凍干粉質量20%的堿性蛋白酶，調節(jié)抑至9,在40°C溫度條件下酶解化，再將混 合液煮沸Imin，冷卻至19~25°C。
[0013] 優(yōu)選的，所述步驟3)進行如下；將步驟2)處理完成的混合液在4500r/min條件 下，離屯、lOmin，取清液，調節(jié)清液抑值為4,在45°C溫度條件下，加入清液質量1 %的活性 碳，攬拌45min進行脫色脫腥，然后在4500r/min條件下，離屯、15min，過0. 45ym濾膜得濾 液。
[0014] 本發(fā)明的有益效果在于；本發(fā)明操作方法更簡單快捷，成本低，產(chǎn)率高，制得的產(chǎn) 品色澤良好、無異味，蛋白膚含量高，易溶于冷水，整個操作過程溫度低，保留了蛋白膚的生 物活性，更多的保留了大銳黏液有效成分，是一種很好的營養(yǎng)保健品原料。
【具體實施方式】
[0015] 下面對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行詳細的描述。
[0016] 實施例1
[0017] 1)電擊刺激法采集2kg大銳黏液，凍干脫水后研磨粉碎，得黏液凍干粉；
[0018] 2)將所得黏液凍干粉加入100倍質量的蒸饋水中，再加入黏液凍干粉質量20%的 堿性蛋白酶，調節(jié)抑至9,在400°C溫度條件下酶解化，再將混合液煮沸Imin，冷卻至19~ 25°C；
[0019] 如將步驟。處理完成的混合液在300化/min條件下，離屯、20min，取清液，調節(jié)清 液抑值為4,在45°C溫度條件下，加入清液重量1 %的活性碳，攬拌45min進行脫色脫腥，然 后在4500r/min條件下，離屯、lOmin，過0. 45ym濾膜得濾液；
[0020] 4)將步驟3)處理完成的在30°C溫度條件下旋轉蒸發(fā)濃縮至原樣體積的1/7,將濃 縮液用塑料袋密封，在溫度19~25°C，壓力250M化條件下，殺菌5min，在潔凈環(huán)境下，真空 冷凍干燥、粉碎得到黏液蛋白膚粉。
[0021] 實施例2
[0022] 1)電擊刺激法采集2kg大銳黏液，凍干脫水后研磨粉碎，得黏液凍干粉；
[0023] 2)將所得黏液凍干粉加入120倍質量的蒸饋水中，再加入黏液凍干粉質量10%的 堿性蛋白酶，調節(jié)抑至9. 5,在60°C溫度條件下酶解比，再將混合液煮沸2min，冷卻至19~ 25°C；
[0024] 3)將步驟2)處理完成的混合液在4500r/min條件下，離屯、lOmin，取清液，調節(jié)清 液抑值為4,在40°C溫度條件下，加入清液質量2%的活性碳，攬拌45min進行脫色脫腥，然 后在3000r/min條件下，離屯、15min，過0. 45ym濾膜得濾液；
[0025] 4)將步驟3)處理完成的濾液在60°C溫度條件下旋轉蒸發(fā)濃縮至原樣體積的1/8， 將濃縮液用塑料袋密封，在溫度19~25°C，壓力200M化條件下，殺菌3min，在潔凈環(huán)境下， 真空冷凍干燥、粉碎得到黏液蛋白膚粉。
[0026] 實施例3
[0027] 1)電擊刺激法采集大銳黏液，凍干脫水后研磨粉碎，得黏液凍干粉；
[002引 2)將所得黏液凍干粉加入50倍質量的蒸饋水中，再加入黏液凍干粉質量10%的 堿性蛋白酶，調節(jié)抑至9,在50°C溫度條件下酶解化，再將混合液煮沸Imin，冷卻至19~ 25°C；
[0029] 3)將步驟2)處理完成的混合液在4000r/min條件下，離屯、150min，取清液，調節(jié) 清液PH值為4. 5,在43°C溫度條件下，加入清液質量1. 5%的活性碳，攬拌50min進行脫色 脫腥，然后在4000r/min條件下，離屯、lOmin，過0. 45ym濾膜得濾液；
[0030] 4)將步驟3)處理完成的濾液在40°C溫度條件下旋轉蒸發(fā)濃縮至原樣體積的1/7， 將濃縮液用塑料袋密封，在溫度19~25°C，壓力200MPa條件下，殺菌5min，在潔凈環(huán)境下， 真空冷凍干燥、粉碎得到黏液蛋白膚粉。
[0031] 試驗例1、多膚分子量的測定
[0032] 檢測方法；通過凝膠層析法測定分子量，試驗過程中選用0.Imol/L的Tris-肥1 洗脫液平衡處理SPhedexG-25凝膠柱后，在220nm的波長下，檢測濃度為2mg/ml的標準物 質：還原性谷脫甘膚（307化)、縮宮素（1007Da)、膜高血糖素（348抓a)、和膜島素巧808Da)， 根據(jù)標準物質分子量對數(shù)和洗脫體積，擬合得回歸方程為；y= -40. 238X+194. 57(R2 = 0. 9909);其中，y為洗脫體積，X為相應分子量的對數(shù)值。
[0033] 將各實施例所得多膚分別配制為濃度為4mg/ml，在上述條件下分別進樣洗脫，將 出峰體積帶入標準曲線，即可得樣品分子量及其分布范圍，通過峰面積歸一法，確定不同分 子量蛋白膚的相對百分含量，所得結果如表1所示。
[0034] 表1 ;多膚分子量分布及表觀色澤
[0035]
[0036] 從表1可知，通過本發(fā)明制備的大銳膠原蛋白膚其分子量主要集中在小于IkD范 圍內，并且色澤良好，在正常的乳白與乳黃之間。
[0037] 試驗例2、透皮吸收試驗
[003引取體重150g的Wistar大鼠，麻醉，剔凈絨毛，小屯、剝皮，分離皮下脂肪組織及黏液 組織，用生理鹽水反復沖洗數(shù)遍；擴散裝置及介質選用改進型化anz擴散池；擴散介質選用 生理鹽水，提供與人體內相似的環(huán)境。將各實施例所得膠原蛋白膚溶于水中，配制成濃度為 1.0%的多膚溶液，等體積均勻涂抹在實驗材料上。按照常規(guī)的透皮吸收操作，檢測215nm 波長下多膚溶液的紫外吸光度值，通過公式求出透過率。根據(jù)實驗結果可知；實施例1~3 所得膠原蛋白膚的透過率分別為80. 9%、82. 3%和85. 6% ;從試驗例2可知本發(fā)明所得黏 液蛋膚的透皮吸收性好。
[0039] 最后說明的是，W上優(yōu)選實施例僅用W說明本發(fā)明的技術方案而非限制，盡管通 過上述優(yōu)選實施例已經(jīng)對本發(fā)明進行了詳細的描述，但本領域技術人員應當理解，可W在 形式上和細節(jié)上對其作出各種各樣的改變，而不偏離本發(fā)明權利要求書所限定的范圍。
【主權項】
1. 一種大鯢黏液蛋白肽的制備方法，其特征在于，步驟如下： 1) 電擊刺激法采集大鯢黏液，凍干脫水后研磨粉碎，得黏液凍干粉； 2) 將所得黏液凍干粉加入50~120倍質量的蒸餾水中，再加入黏液凍干粉質量 10% -30%的堿性蛋白酶，調節(jié)pH至9~9.5,在40~60 °C溫度條件下酶解1~3h，再將 混合液煮沸1~2min，冷卻至19~25°C ; 3) 將步驟2)處理完成的混合液在3000-4500r/min條件下，離心10~20min，取清液， 調節(jié)清液pH值為4~5,在40~45°C溫度條件下，加入清液質量1 %~2%的活性碳，攪拌 45~60min進行脫色脫腥，然后在3000-4500r/min條件下，離心10_15min，過0. 45 y m濾 膜得濾液； 4) 將步驟3)處理完成的濾液在30°C-60°C溫度條件下旋轉蒸發(fā)濃縮至原樣體積 的1/7~1/8,將濃縮液用塑料袋密封，在溫度19~25°C，壓力150-250MPa條件下，殺菌 l-5min，在潔凈環(huán)境下，真空冷凍干燥、粉碎得到黏液蛋白肽粉。2. 根據(jù)權利要求1所述大鯢黏液蛋白肽的制備方法，其特征在于，所述步驟2)進行如 下：將所得黏液凍干粉加入1〇〇倍質量的蒸餾水中，再加入黏液凍干粉質量20%的堿性蛋 白酶，調節(jié)pH至9,在40°C溫度條件下酶解3h，再將混合液煮沸l(wèi)min，冷卻至19~25°C。3. 根據(jù)權利要求1所述大鯢黏液蛋白肽的制備方法，其特征在于，所述步驟3)進行 如下：將步驟2)處理完成的混合液在4500r/min條件下，離心10min，取清液，調節(jié)清液pH 值為4,在45°C溫度條件下，加入清液質量1 %的活性碳，攪拌45min進行脫色脫腥，然后在 4500r/min條件下，離心15min，過0. 45 y m濾膜得濾液。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種大鯢黏液蛋白肽的制備方法，1)電擊刺激法采集大鯢粘液，凍干得粘液凍干粉；2)將所得粘液凍干粉加入50～120倍質量的蒸餾水中，再加入黏液凍干粉質量10％-30％的堿性蛋白酶，調節(jié)pH至9～9.5，在40～60℃溫度條件下酶解1～3h，再將混合液煮沸1～2min，冷卻至19～25℃；3)將步驟2)處理完成的混合液在3000-4500r/min條件下，離心10～20min，取清液，調節(jié)清液pH值為4～5，在40～45℃溫度條件下，加入1％～2％活性碳，攪拌45～60min進行脫色脫腥，然后在3000-4500r/min條件下，離心10-15min，過0.45μm濾膜得濾液；4)將步驟3)處理完成的濾液在30℃-60℃溫度條件下旋轉蒸發(fā)濃縮至原樣1/7～1/8，將濃縮液用塑料袋密封，在溫度19～25℃，壓力150-250MPa條件下，殺菌1-5min，在潔凈環(huán)境下，真空冷凍干燥、粉碎得到粘液蛋白肽粉。
【IPC分類】C07K1/34, C12P21/06
【公開號】CN104988199
【申請?zhí)枴緾N201510479094
【發(fā)明人】王瑩, 陳兵, 魏泓, 劉良忠, 商海濤, 茍強, 周明輝, 金偉
【申請人】重慶馗豐食品有限公司
【公開日】2015年10月21日
【申請日】2015年8月6日