棕色粉末。產(chǎn)率：43% (311mg)。HPLC:93%。MS:315(M+1)。
[0647] 5-(3-氨基-4-甲基-芐氨基）-lH_吡咯并「2, 3-bl吡啶-2-羧酸甲醅
[0648] 黃色粉末。產(chǎn)率：90% (240mg)。HPLC:85%。MS:311(M+1)。
[0649] 5-(3-氨基-芐氨基）-lH_吡咯并「2, 3-bl吡啶-2-羧酸甲醅
[0650]灰白色粉末。產(chǎn)率：87% (351mg)。HPLC:99%。MS:297(M+1)。
[0651]步驟3:制備5-|5-「4-(4_甲基-哌嗪-1-基甲基）-3_三氟甲基-苯甲酰胺 基1-芐氨基丨-1H-吡咯并「2, 3-bl吡啶-2-羧酸甲醅的一般橾作方案
[0652] 將4_(4_甲基-哌嗪-1-基甲基）_3_三氟甲基-苯甲酸溶解于含有DIEA(5當(dāng) 量）和HATU(2當(dāng)量）的無水DMF(0.06mol/L)中。15分鐘后，緩慢加入胺衍生物，并于室溫 攪拌混合物12小時(shí)。蒸發(fā)DMF，并加入NaHC03(7Xg?ift)。用EtOAc萃取產(chǎn)物，干燥，過濾并蒸 發(fā)，以獲得深色混合物。通過用MeOH或EtOAc洗滌或者通過硅膠柱純化后，獲得呈淡黃色 或橙色橙色粉末的預(yù)期產(chǎn)物。
[0653] 表5顯示根據(jù)以上所述的合成方案21合成的化合物。
[0654] 表5 _通過實(shí)施例D獲得的化合物
[0655]
[0656]
[0657]
[0658] 實(shí)施例E:從由OriBasePharma公司購得的試劑開始，3階段合成5- {2-甲 基-5-[3-酰胺基]-苯甲酰胺基}-lH-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸甲酯
[0659] 方案22表不合成5_ {2-甲基_5_[3_酰胺基]-苯甲酰胺基}-1H-吡略并[2, 3_b] 吡啶-2-羧酸甲酯的一般方法。
[0660]
[0661] 方案22 _實(shí)施例E的一般合成方案
[0662] 步驟1 :制備5_(2_甲基-5-硝基-苯甲酰胺基）-lH_吡咯并「2,3-bl吡啶-2-羧 酸甲醅的一般橾作方案。
[0663] 將5-氨基-1H-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸甲酯（5. 74g，30mmol)、2_甲 基-5-硝芐基酸（5. 44g，30mmol)、HATU(11. 42g，30mmol)、DIEA(26mL，150mmol)溶解于無水 DMF(300L)中，于室溫?cái)嚢?8小時(shí)。蒸發(fā)DMF，加入NaHC03(7Xg?ift)，產(chǎn)生沉淀并過濾，用水和石 油醚/Et20洗滌。獲得預(yù)期的產(chǎn)物（9. 94g，28mmol)。產(chǎn)率=93%。4NMR(300MHz,DMS0-d6) 8 8. 53 (s, 2H), 8. 37 (d,J= 2. 5, 1H), 8. 26 (dd,J= 2. 5, 8. 4, 1H), 7. 63 (d,J= 8. 5, 1H), 7. 1 6(s, 1H), 3. 86(s, 3H), 3. 17(s, 1H), 2. 54(s, 3H)oESI-MS:m/z355([M+H]+)oHPLC純度：95%。
[0664] 步驟2 :制備5-(5_氨基-2-甲基-苯甲酰胺基）-lH_吡咯并「2,3-bl吡啶-2-羧 酸甲醅的一般橾作方案。
[0665] 將5-(2-甲基-5-硝基-芐氨基）-lH_吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸甲酯（9. 8g， 27. 7mmol)、甲醇（300mL)以及10%鈀碳（0. 95g，10%w/w)置于填充30bar氫氣的高壓反 應(yīng)器中，并攪拌24小時(shí)。在硅藻土上過濾混合物，并用甲醇洗滌。蒸發(fā)溶劑，以獲得棕色固 體（7.35g，22.7mmol)。產(chǎn)率=81%。4NMR(300MHz，DMS0-d6)Sl〇.29(s，lH)，8.55(s，2H ),7. 15 (s, 1H), 6. 94 (d,J= 8. 2, 1H), 6. 71 (d,J= 2. 3, 1H), 6. 60 (m, 1H), 5. 08 (s, 2H), 3. 86 ( s，3H),2.21(s，3H)。ESI-MS:m/z325([M+H]+)。HPLC純度：95%。
[0666] 步驟3 :制備5-12-甲基-5_「3-酰胺基1-苯甲酰胺基丨-1H-吡咯并「2, 3-bl吡 啶-2-羧酸甲醅的一般橾作方案
[0667] 將酸衍生物溶解于含有DIEA(5當(dāng)量）和HATU(2當(dāng)量）的無水DMF(0. 06mol/L) 中。15分鐘后，緩慢加入5-{2-甲基-5-[3-氨基]-苯甲酰胺基}-lH-吡咯并[2,3-b]吡 啶-2-羧酸甲酯，并于室溫?cái)嚢杌旌衔?2小時(shí)。蒸發(fā)DMF，加入NaHC03(7Xg?ift)。用EtOAc萃 取產(chǎn)物，干燥，過濾并蒸發(fā)，以獲得暗色混合物。通過用MeOH或EtOAc洗滌或者通過硅膠柱 純化后，獲得呈淡黃色或橙色粉末狀的預(yù)期產(chǎn)物。
[0668] 表6顯示根據(jù)以上所述合成方案20合成的化合物。
[0669] 表6 _通過實(shí)施例E獲得的化合物
[0670]
[0671]
[0672]實(shí)施例F:合成5-12-甲基-5_「5-硫代苯甲酰胺基1-芐氨基丨-1H-吡咯并 「2, 3-bl吡啶-2-羧酸甲酉3
[0673] 合成5_{2_甲基-5-[5_硫代苯甲酰胺基]-芐氨基}-lH_吡咯并[2,3_b]吡 啶-2-羧酸甲酯的一般方法示于方案23中。
[0674]
[0675] 方案23 -實(shí)施例F的一般合成方案
[0676] 從酰胺衍牛物合成硫酰胺的一般稈序:
[0677] 于130°C，加熱5_{2_甲基-5-[5_苯甲酰胺基]-芐氨基}-lH_吡咯并[2,3_b]吡 啶-2-羧酸甲酯（100mg)和勞氏試劑（方案23中的"LR"）（1. 8當(dāng)量）在5mL氯苯中的混 懸液2小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，通過硅膠色譜法（水+1%TFA/乙腈+1%TFA)純化殘留物。蒸發(fā) 溶劑后，將殘留物溶于水中，用NaHC03堿化至pH7-8,并用AcOEt萃取。然后經(jīng)Na2S04干燥 有機(jī)層，并除去溶劑，以得到黃色固體。
[0678] 表7 _通過實(shí)施例F獲得的化合物
[0679]
[0680]
[0681] 實(shí)施例G:合成5-{2_甲基-5-[4_(4-甲基-哌嗪-1-基甲基）-3_三氟甲基-苯 甲酰胺基]-芐氨基}_1H-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸丙酯
[0682]合成5-{2_甲基-5-[4_(4-甲基-哌嗪-1-基甲基）-3_三氟甲基-苯甲酰胺 基]-芐氨基}-1H-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸丙或乙酯的一般方法示于方案24的2個(gè) 步驟中。
[06831
[0684] 方案24 _實(shí)施例G的一般合成方案
[0685]步驟1:合成5-!2-甲基-5-「4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基）-3-三氟甲基-苯甲 酰胺基1-芐氨基丨-1H-吡咯并「2, 3-bl吡啶-2-羧酸（0R0623)
[0686]于65°C，加熱5- {2-甲基-5- [4- (4-甲基-哌嗪-1-基甲基）-3-三氟甲基-苯甲 酰胺基]-芐氨基}_1H-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸甲酯（580mg)和氫氧化鉀（5當(dāng)量） 在水（3mL)和甲醇（3mL)中的混懸液18小時(shí)。蒸發(fā)甲醇，并利用HC1 6N將pH中和至pH 7。蒸發(fā)溶劑后，用硅膠色譜法（水/乙腈）純化粗產(chǎn)物殘留物，得到棕色固體。
[0687]產(chǎn)率：54% (305mg)
[0688] 4NMR(300MHz，DMSO)S11. 24 (s，1H)，10. 39 (s，1H)，8. 22-8. 15 (m，2H)，7. 94 (d，J =2. 5, 1H), 7. 87 (d,J= 8. 0, 1H), 7. 71-7. 64 (m, 2H), 7. 18 (d,J= 8. 8, 1H), 6. 95 (d,J= 2. 3, 1H), 6. 54 (s, 1H), 5. 94 - 5. 73 (m, 1H), 4. 21 (s, 2H), 3. 65 (s, 2H), 2. 46-2. 24 (m, 11H), 2. 16(s, 3H) 〇
[0689]HPLC：100%；MS：581(M+1)
[0690]步驟2(詵煩1):合成5-!2-甲基-5-「4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基）-3-三氟甲 基-苯甲酰胺基1-芐氨基丨-1H-吡咯并「2, 3-bl吡啶-2-羧酸丙醅（0R0697)
[0691] 向5- {2-甲基-5- [4- (4-甲基-哌嗪-1-基甲基）-3-三氟甲基-苯甲酰胺基]-芐 氨基}-lH-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸（80mg)在3. 5mL丙醇中的懸浮液中，加入亞硫酰 氯（3當(dāng)量）。于KKTC加熱混合物過夜。蒸發(fā)溶劑，通過硅膠色譜法（乙腈+1%TFA)純 化粗產(chǎn)物殘留物。蒸發(fā)溶劑后，將殘留物溶解于水中，用NaHCCy?化直至pH9,并用AcOEt 萃取。然后經(jīng)Na2S04干燥有機(jī)層，除去溶劑，得到棕色固體。
[0692]產(chǎn)率：44% (32mg)
[0693]:HNMR(400MHz,DMSO)8(ppm) 11. 98 (s, 1H),10. 33 (s, 1H),8. 20 (s, 1H),8. 2 0(s, 1H), 8. 15(d,J= 8. 1, 1H), 8. 10(d,J= 2. 5, 1H), 7. 88 (d,J= 8.1,1H),7..71-7. 63(m, 2H), 7. 01 (d,J= 2. 5, 1H), 6. 90 (d,J= 2. 1, 1H), 6. 03 (t,J= 5. 4, 1H), 4. 26-4. 18 (m, 4H), 3. 66 (s, 2H), 2. 48 - 2. 38 (m, 8H), 2. 34 (s, 3H), 2. 18 (s, 3H), 0. 97 (t, 3H)
[0694]HPLC：96% ；MS:623. 3 (M+l)
[0695]步驟2(詵煩2):合成5-!2-甲基-5-「4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基）-3-三氟甲 基-苯甲酰胺基1-芐氨基丨-1H-吡咯并「2, 3-bl吡啶-2-羧酸乙醅（0R1082)
[0696] 向5- {2-甲基-5- [4- (4-甲基-哌嗪-1-基甲基）-3-三氟甲基-苯甲酰胺基]-芐 氨基}-lH-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸（90mg)在4mL乙醇中的混懸液中，加入硫酸95% (0. 5當(dāng)量）。在回流下加熱混合物6小時(shí)。蒸發(fā)溶劑后，通過硅膠色譜法（乙腈+1%TFA) 純化粗產(chǎn)物殘留物。蒸發(fā)溶劑后，將殘留物溶解于水中，用NaHC03堿化至pH9,并用AcOEt 萃取。然后通過Na2S04干燥有機(jī)層，除去溶劑，得到黃色固體。
[0697]產(chǎn)率：37%(35mg)
[0698] 4M!R(400MHz,DMSO)S(ppm) 1H匪R(400MHz,DMSO)S11. 99(s, 1H), 10. 34 (s, 1H), 8. 20-8. 14(m, 2H), 8. 09(d,J= 2. 6, 1H),7. 87 (d,J= 8. 1, 1H),7. 66 (d,J= 9. 5, 2H),7. 19 (d,J= 8. 1, 1H),6. 99 (d,J= 2. 5, 1H),6. 88 (d,J= 2. 0, 1H),6. 05 (t,J= 5. 4, 1H),4. 29 (q,J= 7. 1, 2H),4. 23 (d,J= 5. 4, 2H),3. 65 (s, 2H),2. 46 - 2. 33 (m, 3H),2. 30 (s, 3H), 2. 15 (s, 3H), 1. 30 (t,J= 7. 1, 3H).
[0699]HPLC：96%；MS：609(M+1)
[0700]實(shí)施例H:合成5-「3_(苯甲酰胺基-甲基）_芐氨基1-1H-吡咯并「2, 3-bl吡 啶-2-羧酸甲醅和5-「3-(硫代苯甲酰胺基-甲基）-芐氨基1-1H-吡咯并「2, 3-bl吡 啶-2-羧酸甲醅
[0701] 用于合成5-「3-(苯甲酰胺基-甲基）-芐氨基1-1H-吡咯并「2,3-bl吡啶-2-羧 酸甲醅和5-「3-(硫代苯甲酰胺基-甲基）-芐氨基1-1H-吡咯并「2,3-bl吡啶-2-羧酸甲 廬的一般方法示于方案25的3或4個(gè)步驟中。
[0咖1
[0703] 方案25 -實(shí)施例H的一般合成方案
[0704]步驟1:制備3_(苯甲酰胺基-甲基）_苯甲酸甲醅的一般橾作方案
[0705] 將3-氨甲基-苯甲酸甲酯鹽酸鹽（1當(dāng)量）、H0Bt(1.2當(dāng)量）、DIEA(1.2當(dāng)量）和 EDCI.HC1 (1. 2當(dāng)量）溶解于干燥DMF(0. 17M)中，并于室溫氬氣下攪拌30分鐘。加入胺衍 生物（1當(dāng)量），于室溫?cái)嚢杌旌衔镞^夜。蒸發(fā)DMF，并加入飽和NaHC03溶液。用EtOAc萃 取產(chǎn)物，經(jīng)Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)。在硅膠色譜法上純化粗產(chǎn)物，蒸發(fā)溶劑后得到預(yù)期的 產(chǎn)物。
[0706]3-「（3_三氟甲基-苯甲酰胺基）_甲基1-苯甲酸甲醅
[0707]白色粉末。產(chǎn)率：45% (528mg)。HPLC:93%。MS:338(M+1)。
[0708]3-!T4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基）_3_三氟甲基-苯甲酰胺基1-甲基丨-苯甲酸 甲醅
[0709]黑色粉末。產(chǎn)率：定量（1. 55g)。HPLC:91%。MS:450(M+1)。
[0710]步驟2:合成3-「（3_三氟甲基-硫代苯甲酰胺基）_甲基1-苯甲酸甲醅
[0711]于110°C，加熱3-[ (3-三氟甲基-苯甲酰胺基）-甲基]-苯甲酸甲酯（528mg)和 勞氏試劑（方案23中的"LR"）（1. 8當(dāng)量）在26mL甲苯中的混懸液3小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，向 粗產(chǎn)物中加入飽和NaHC03溶液。用EtOAc萃取產(chǎn)物，經(jīng)Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)。在硅膠 色譜法上純化粗產(chǎn)物油狀物，蒸發(fā)溶劑后，得到預(yù)期的產(chǎn)物。
[0712]黃色油狀物。產(chǎn)率：94% (518mg)。HPLC:>99%。MS:354(M+1)。
[0713]步驟3:皂化甲醅的一般橾作方案
[0714] 將甲酯（1當(dāng)量）懸浮于溶劑（THF/水或MeOH/水_1/1)的混合物中。加入堿性 基（LiOH或K0H，3當(dāng)量），并在回流下加熱混合物直至反應(yīng)完全（TLC控制）。蒸發(fā)有機(jī)溶 劑，中和混合物，并用有機(jī)溶劑萃取產(chǎn)物。
[0715]3-「（3_三氟甲基-硫代苯甲酰胺基）_甲基1-苯甲酸
[0716]黃色粉末。產(chǎn)率：88% (438mg)。HPLC:98%。MS:340(M+1)。
[0717]3-!T4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基）_3_三氟甲基-苯甲酰胺基1-甲基丨-苯甲酸
[0718]產(chǎn)率：54% (792mg)。HPLC:93%。MS:436(M+1)。
[0719]步驟4:似肽偶聯(lián)反應(yīng)的一般橾作方案
[0720] 將酸衍生物和HATU(2當(dāng)量）溶解于無水DMF(0? 1-0. 2mol/L)中。30分鐘后，加入 5-氨基-1H-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸甲酯（1當(dāng)量）和DIEA(3-4當(dāng)量），于室溫?cái)嚢?混合物過夜。蒸發(fā)DMF，并加入飽和NaHC03溶液。用EtOAc萃取產(chǎn)物，經(jīng)Na2S04干燥，過濾 并蒸發(fā)。在反相（H20l%TFA/MeCN1%TFA100/0,0/100)上純化粗產(chǎn)物。蒸發(fā)MeCN。將 產(chǎn)物懸浮于H20中，并用飽和NaHC03溶液堿化直至pH= 8-9。用AcOEt萃取水層三次。蒸 發(fā)有機(jī)層，得到最終化合物。
[0721] 表8-通過實(shí)施例H獲得的產(chǎn)物
[0722]
[0723]
[0724]實(shí)施例I:從3-氰基-苯甲酸開始，3階段合成5-!3-(苯氨甲?；芐氨 基丨-1H-吡咯并「2, 3-bl吡啶-2-羧酸甲醅。
[0725] 方案26表示合成5-!3-(苯氨甲酰基）_芐氨基丨-1H-吡咯并「2,3-bl吡啶-2-羧 酸甲酯的一般方法
[0726]
[0727] 方案26 _實(shí)施例I的一般合成方案
[0728]步驟1:制備3-氰基-苯甲酰胺化合物的一般橾作方案
[0729] 在氬氣下，將3-氰基-苯甲酸（1. 2當(dāng)量）、胺衍生物（1當(dāng)量）、H0Bt(1. 2當(dāng)量）、 DIEA(1. 2當(dāng)量）和EDCI.HC1 (1. 2當(dāng)量）溶解于干燥DMF(0? 15M)中。于室溫?cái)嚢柙摶旌?物過夜。蒸發(fā)DMF，并加入飽和NaHC03溶液。用EtOAc萃取產(chǎn)物，經(jīng)Na2S04干燥，過濾并蒸 發(fā)。在反相（H20l%TFA/MeCN1%TFA100/0,0/100)上純化粗產(chǎn)物。蒸發(fā)MeCN。將產(chǎn)物 懸浮于H20中，并用飽和NaHC03溶液堿化直至pH= 8-9。用AcOEt萃取水層三次。蒸發(fā)有 機(jī)層，得到最終化合物。
[0730]3-氰基-N-(3-三氟甲基-芐基芐基）-苯甲酰胺
[0731]白色粉末。產(chǎn)率：76% (334mg)。HPLC:>99%。MS:305(M+1)。
[0732]3-氰基-N-吡啶-3-基-苯甲酰胺
[0733]棕色粉末。產(chǎn)率：47% (563mg)。HPLC:>99%。MS:224(M+1)。
[0734]3-氰基-N-「4_(4-甲基-哌嗪-1-基甲基）-3_三氟甲基-苯基1-苯甲酰胺
[0735]黃色油狀物。產(chǎn)率：22% (52mg)。HPLC:92%。MS:403(M+1)。
[0736]步驟2:制備3-甲?；?苯甲酰胺化合物的一般橾作方案
[0737]在氬氣下，將3-氰基-苯甲酰胺中間體（1當(dāng)量）溶解于吡啶/水/乙酸（2/1/1; 0. 01M)的混合物中。加入水中的雷尼鎳（~0. 03vol)，并在大氣壓力、氫氣氛下，于室溫?cái)?拌混合物過夜。然后，經(jīng)硅藻土床過濾混合物，并用甲醇洗滌。蒸發(fā)溶劑。加入飽和NaHC03 溶液。用EtOAc萃取產(chǎn)物，經(jīng)Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)，得到最終化合物。
[0738] 3-甲?；?N-(3-三氟甲基-芐基）_苯甲酰胺
[0739]黃色油狀物。產(chǎn)率：79% (40mg)。HPLC:89%。MS:308(M+1)。
[0740]3-甲?；?N-吡啶-3-基-苯甲酰胺
[0741]黃色油狀物。產(chǎn)率：66% (166mg)。HPLC:>99%。MS :227(M+1)。
[0742]3-甲?；?N-「4_(4-甲基-哌嗪-1-基甲基）_3_三氟甲基-苯基1-苯甲酰胺
[0743]黃色油狀物。產(chǎn)率：57% (30mg)。HPLC:75%。MS:406(M+1)。
[0744]步驟3:制備5-!3-(苯氨甲酰基）_芐氨基丨-1H-吡咯并「2, 3-bl吡啶-2-羧酸 甲醅的一般橾作方案
[0745] 將5-氨基-1H-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸甲酯（1當(dāng)量）和3-甲?；?苯 甲酰胺化合物（1. 1當(dāng)量）在Me0H/Ac0H(10/l;0. 06M)的混合物中攪拌2小時(shí)。然后，緩 慢加入NaBH3CN(l. 2當(dāng)量），在氬氣下，于室溫?cái)嚢杌旌衔镞^夜。通過加入飽和NaHC03溶液 直至中和淬滅反應(yīng)。蒸發(fā)MeOH和乙酸。過濾粗產(chǎn)物并用水和Et20洗滌，然后在反相（H20 l%TFA/MeCN1%TFA100/0,0/100)上純化。蒸發(fā)MeCN。使產(chǎn)物懸浮于H20中，并用飽和 NaHC03溶液堿化直至pH= 8-9。用AcOEt萃取水層三次。經(jīng)Na2S04干燥有機(jī)層，過濾并濃 縮，得到預(yù)期的產(chǎn)物。
[0746] 表9-通過實(shí)施例I獲得的化合物
[0747]
[0748]
[0749] CN 105008355 A IXm -f} 63/74 頁
[0750] 生物試驗(yàn)
[0751] 材料和方法：
[0752] 1)體外激酶分析（表B1至B13)
[0753] 通過Invitrogen使用Z/-LYTE1'技術(shù)評估化合物對包括BRAF、EGFR(ErbBl)、 EGFR(ErbBl)I790ML858R、FGFR2、KDR(VEGFR2)、PDGFRA(PDGFRa)、SRC以及其它的數(shù)種激 酶的抑制活性。簡言之，f-L