一種吲哚生物堿及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種新化合物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 腫瘤是人體器官組織的細(xì)胞在外來和內(nèi)在有害因素的長期作用下所產(chǎn)生的一種 以細(xì)胞過度增殖為主要特點(diǎn)的新生物，在醫(yī)學(xué)上可分為良性腫瘤和惡性腫瘤兩大類。良性 腫瘤對人體健康影響較小，而惡性腫瘤（又稱癌癥）則嚴(yán)重威脅著人類的健康。根據(jù)世界 衛(wèi)生組織和美國癌癥協(xié)會的最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，癌癥已成為人類死亡的首要病因，2008年全世 界約有1270萬新診斷癌癥病例和760萬癌癥死亡病例（約占所有死亡人數(shù)的13% )，且大 約有70%的癌癥死亡病例發(fā)生在中低收入國家。預(yù)計(jì)到2030年，癌癥年診斷和死亡病例將 分別高達(dá)2140萬和1320萬。
[0003] 根據(jù)中國癌癥基金會數(shù)據(jù)，我國惡性腫瘤死亡率屬于世界較高水平，而且呈持續(xù) 增長趨勢。2006年第三次全國死因調(diào)查顯示，我國惡性腫瘤死亡率比70年代中期增加了 83. 1%，比90年代初期增加了 22. 5%。腦血管疾病和惡性腫瘤是我國前兩位死亡原因，分 別占死亡總數(shù)的22. 4%和22. 3%。惡性腫瘤不僅嚴(yán)重影響我國人口健康，而且成為醫(yī)療費(fèi) 用上漲的重要因素。此外，由于中晚期惡性腫瘤患者治療效果尚不滿意，其不良預(yù)后往往波 及親友和家庭，影響社會穩(wěn)定。
[0004] 雖然世界衛(wèi)生組織、各國政府和科研機(jī)構(gòu)在腫瘤預(yù)防與治療上投入了大量的人 力、物力，開展了深入的研究工作，在腫瘤的診斷、手術(shù)、放射及化學(xué)療法方面取得了很大的 進(jìn)展，但到目前為止，很多惡性腫瘤仍缺乏有效的治療手段。利用各種手段尋找切實(shí)有效的 抗腫瘤藥物，已經(jīng)成為世界范圍內(nèi)生命科學(xué)研究的熱點(diǎn)課題。目前臨床上用于腫瘤治療的 化學(xué)合成藥物，大多數(shù)作用機(jī)理都涉及腫瘤細(xì)胞的核酸代謝，以DNA為作用靶點(diǎn)，雖然對于 腫瘤治療起十分重要的作用，但在抑制腫瘤細(xì)胞增殖的同時(shí)，也給病人正常組織器官帶來 了極大的損傷，嚴(yán)重影響了腫瘤患者的生存質(zhì)量，致使許多腫瘤病人不是死于慢性消耗衰 竭，而是死于放、化療的毒性和副作用。因此，繼續(xù)尋找和研制新型抗腫瘤藥物仍是當(dāng)前藥 物研究的主要方向之一。
[0005] 中藥及天然藥物在保障人類健康、防治疾病方面具有悠久的歷史，世界醫(yī)藥產(chǎn)業(yè) 的發(fā)展實(shí)踐證明，中藥、天然藥物歷來是創(chuàng)新藥物研究的重要源泉。許多天然藥物具有毒 副作用相對較小、作用原理獨(dú)特等優(yōu)點(diǎn)，已成為抗腫瘤新藥研究與開發(fā)的重要對象，從天然 藥物中尋找高效低毒的抗腫瘤先導(dǎo)化合物已成為天然藥物化學(xué)的重點(diǎn)研究方向之一。紫 杉醇、喜樹堿、長春花堿、斑蝥素等廣泛應(yīng)用于惡性腫瘤的治療就是其中一些成功的例子。 今天，從傳統(tǒng)中藥及天然藥物中尋找抗腫瘤先導(dǎo)化合物依然是創(chuàng)新藥物研究的一條重要捷 徑。
[0006] 胳盤蓬（Peganum harmala)為漠藜科（Zygophyllaceae)胳盤蓬屬（Peganum)植 物，是一種耐旱、耐寒、耐堿、耐瘠薄的草本植物，維吾爾語叫"阿地?zé)崴姑?，主要分布于新 疆、甘肅、寧夏、青海和內(nèi)蒙古的荒漠或半荒漠地區(qū)。駱駝蓬是維吾爾族、蒙古族民間沿用已 久的藥材，藥用部位為成熟種子。駱駝蓬性平，味苦、辛，有毒，具有堅(jiān)固筋脈、助陽暖陰、消 除黏稠體液、消散寒濕之氣等功能，主治筋脈軟弱、骨關(guān)節(jié)痛、咳嗽痰多、偏癱健忘、神昏頭 痛等。駱駝蓬在現(xiàn)代臨床上主要用于治療胃癌、肝癌、結(jié)腸癌、乳腺癌等惡性腫瘤。臨床上， 駱駝蓬總堿制劑對食道癌、胃癌、噴門癌、結(jié)腸癌等惡性腫瘤的有效率達(dá)到85. 7%，且已作 為院內(nèi)制劑在中國醫(yī)科大學(xué)多家附屬醫(yī)院及新疆多家醫(yī)院應(yīng)用。
[0007] 駱駝蓬種子中主要活性成分為生物堿類，現(xiàn)代藥理研究表明，駱駝蓬生物堿具有 顯著的抗腫瘤活性。然而駱駝蓬生物堿的成分復(fù)雜，人們無法確定具體是何種成分具有抗 腫瘤活性或者是多種成分共同作用的結(jié)果，這導(dǎo)致其應(yīng)用具有一定的盲目性，易出現(xiàn)不必 要的副作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的在于提供一種新型的吲哚生物堿及其應(yīng)用。
[0009] 發(fā)明人通過長期研究，從駱駝蓬種子中分離鑒定了 1個(gè)新的吲哚類化合物
該化合物對胃癌具有很好的抗腫瘤作 用，同時(shí)對肝癌和乳腺癌具有一定的作用，該化合物具有高效、低毒的優(yōu)點(diǎn)，將成為市場上 新的抗胃癌藥物。
【附圖說明】
[0010] 圖1為本發(fā)明化合物的1H-NMR圖譜； 圖2為本發(fā)明化合物的13C-NMR圖譜； 圖3為本發(fā)明化合物的HSQC圖譜； 圖4為本發(fā)明化合物的HMBC圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0011]
的提取及鑒定： 取IOKg的駱駝蓬種子，粉碎后用70%甲醇加熱回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取 液，用紗布過濾后減壓回收溶劑，得到總浸膏，將總浸膏用4L水混懸，加入鹽酸將pH調(diào)至 1. 〇,用等體積氯仿萃取兩次，除去脂溶性雜質(zhì)，水層用氨水將PH調(diào)至7. 0,依次用等體積的 氯仿，正丁醇萃取三次，取有機(jī)層，分別減壓濃縮回收溶劑，得到氯仿層浸膏220g。
[0012] 取正丁醇萃取物200克，通過采用硅膠柱色譜及羥丙基葡聚糖凝膠（S印hadex LH-20)柱色譜等分離方法，分離得到本發(fā)明化合物。
[0013] 結(jié)構(gòu)鑒定： 使用13C-NMR和1H-NMR對提純得到的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，13C-NMR和 1H-NMR譜分別如 圖1和2所示，圖3為化合物的HSQC圖譜；圖4為化合物的HMBC圖譜。。
[0014] 在 1H-NMR (500Hz, DMSO-(I6)中,δ Hl〇. 24 (1Η, s) , 7. 73 (1H, t, J = 5. 3Hz)5. 86(1H，s)是3個(gè)活潑氫信號，其中δ Hl〇. 24(1H，s)是吲哚類化合物1位的NH，芳 香區(qū)有 3 個(gè)氫，δ Η7· 16 (1H, d, J = 8. 2Hz)，6. 52 (1H, dd, J = 8. 2, 2. 3Hz)及 6. 37 (1H, d, J = 2. 3Hz)構(gòu)成一個(gè)典型的ABX自旋耦合系統(tǒng)，高場區(qū)有I個(gè)甲氧基氫信號δ H3. 73 (3H，s)，2 個(gè)亞甲基的氫信號δ H2. 88 (2H，m)，1.86(2? m)和一個(gè)甲基的氫信號δ η 1.71(3? s)。
[0015] 在13C-NMR(125Hz，DMS0-d6)和HSQC譜中可以看出，該化合物有13個(gè)碳信號，包括 1個(gè)季碳3。74.1(03)，1個(gè)甲氧基碳原子5￡55.3,2個(gè)亞甲基碳原子5。37.3,33.8，1個(gè) 甲基碳原子S c22. 6和8個(gè)Sp2雜化碳原子，其中δ c179. 5和168. 9是兩個(gè)羰基碳，其余的 6個(gè)則為苯環(huán)的碳信號。
[0016] 在13C-NMR中，δ c96. 6和160. 2以及1H-NMR譜中的ABX系統(tǒng)可知該化合物中存在 一個(gè)片段A。在 HMBC 譜中，5。74.1和 δε179·5 都與 5"1〇.24(1!1，8)，5.86(1!1，8)兩個(gè)活 潑氫遠(yuǎn)程相關(guān)，因此可以得到片段^而δΗ1〇.24(ΝΗ)同時(shí)還與苯環(huán)上的123.6,142.9 兩個(gè)碳遠(yuǎn)程相關(guān)，S c74. 1則與苯環(huán)上的δ Η7. 16 (1Η，d，J = 8. 2Hz)遠(yuǎn)程相關(guān)，因此可以確定 片段A和片段B連接形成片段C。在HMBC譜中，Sh1.71(3H，s)處的甲基氫與δε168.9羰 基碳遠(yuǎn)程相關(guān)，而Sc168. 9又與δ Η7. 73 (1Η，t，J = 5. 3Hz)處的活潑氫遠(yuǎn)程相關(guān)，說明該化 合物中存在一個(gè)乙酰胺基團(tuán)。δ H7. 73 (lH，t，J = 5.3Hz)處的活潑氫與亞甲基δ c 33. 8遠(yuǎn) 程相關(guān)，據(jù)此可以得到片段D，片段D中的亞甲基氫δ Hl. 86(2H，m)與δ c74. 1，123. 6, 179. 5 三個(gè)碳信號遠(yuǎn)程相關(guān)，季碳Se74. I與兩個(gè)亞甲基氫都有遠(yuǎn)程相關(guān)，綜合上述ID和2D數(shù)據(jù)， 片段C和片段D是通過、74.1和δε37. 3兩個(gè)碳相連接。綜合以上信息，確定化合物的結(jié) 構(gòu)為
，系統(tǒng)命名為3-Hydr〇xy-3-(N-a cetyl-2-aminoethyl)-6-methoxyindol-2_one〇
[0017] 表1 :化合物的氫和碳信號歸屬（DMS0-d6)
[0018] 在獲知其結(jié)構(gòu)式后，也可以根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)合成得到本發(fā)明所請求保護(hù)的化合 物，或在提取得到的化合物的基礎(chǔ)上，進(jìn)行相應(yīng)修飾得到本發(fā)明的化合物，如通式為的
化合物，式中，R1、R2獨(dú)立為Cl~C4的 烷烴基。
[0019] 抑瘤試驗(yàn)：
對人體6個(gè)瘤株的體外 抑瘤活性實(shí)驗(yàn)，這5個(gè)瘤株包括人胃癌細(xì)胞SGC7901、BGC-803，人肝癌細(xì)胞H印G2、H印-3B， 人乳腺癌細(xì)胞MCF-7,人結(jié)腸癌細(xì)胞Caco-2。
[0020] (1)抑制腫瘤細(xì)胞增殖（MTT法） 將腫瘤細(xì)胞接種于96孔板中，培養(yǎng)24h后加入待測試樣品，再培養(yǎng)48h后用MTT法測 定樣品對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制率。細(xì)胞增殖抑制率按下述公式計(jì)算，并用CalcuSyn軟件計(jì) 算被測試樣品的半數(shù)抑制濃度（IC5。)，IC5(]〈20 μ g/mL的成分將被視為活性樣品；
[0021] (2)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡 將腫瘤細(xì)胞以2X IO5個(gè)/mL密度接種于6孔板中，每孔3mL。培養(yǎng)24h后加入樣品，再 培養(yǎng)24h，收集細(xì)胞，用PBS洗1次，1000 X g離心5min，以ImL 3. 7%多聚甲醛重懸細(xì)胞，室 溫固定lh，1000 X g離心5min，棄去上清，用PBS洗1次，將細(xì)胞重懸于100 μ L PBS中，取細(xì) 胞懸液IOyL，加入2 yL lmmol/L Hoechst 33258, 37°C染色15min，焚光顯微鏡下觀察凋 亡小體。
[0022] (3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：見表2和表3 表2本發(fā)明化合物對不同腫瘤細(xì)胞的抑制作用
注：顯著誘導(dǎo)凋亡（++)，一般誘導(dǎo)凋亡（+)，未發(fā)現(xiàn)凋亡（一）。
[0023] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：本發(fā)明新化合物具有顯著的抗腫瘤作用，特別是對癌癥，包括但不 限于胃癌、肝癌、乳腺癌及結(jié)腸癌具有很好的治療作用，且能顯著誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡作 用，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明化合物對人胃癌細(xì)胞株SGC7901和BGC-803的體外增殖抑制作用 強(qiáng)于陽性藥物順鉑。
[0024]
(式中，R0R2獨(dú)立為 Cl~C4的烷烴基）的化合物在體內(nèi)可以解離或代謝產(chǎn)生相同活性的分子，同樣具有顯著的 抗腫瘤作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種吲哚生物堿，其結(jié)構(gòu)通式為，式中， &、R2獨(dú)立為C1~C4的烷烴基。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的吲哚生物堿，其特征在于：RpR2獨(dú)立為甲基或乙基。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的吲哚生物堿，其特征在于：Rp私為甲基。4. 吲哚生物堿在制備治療腫瘤中藥物中的應(yīng)用，其中，吲哚生物堿的結(jié)構(gòu)式如權(quán)利要 求1~3任意一項(xiàng)所述。5. 吲哚生物堿在制備有益于腫瘤患者功能性食品中的應(yīng)用，其中，吲哚生物堿的結(jié)構(gòu) 式如權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述。6. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的應(yīng)用，其特征在于：腫瘤選自胃癌、肝癌、乳腺癌。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種吲哚生物堿及其應(yīng)用，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。吲哚生物堿的結(jié)構(gòu)通式為？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明其對胃癌具有很好的抗腫瘤作用，同時(shí)對肝癌和乳腺癌具有一定的作用，該化合物具有高效、低毒的優(yōu)點(diǎn)，將成為市場上新的抗胃癌藥物。
【IPC分類】A61P35/00, A61K31/404, A23L1/30, C07D209/38
【公開號】CN105017129
【申請?zhí)枴緾N201510386719
【發(fā)明人】何祥久, 王春華, 王宜海
【申請人】廣東藥學(xué)院
【公開日】2015年11月4日
【申請日】2015年7月2日