一種絲膠蛋白多肽2及其制備和應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術多肽制備領域，具體涉及絲膠蛋白多肽制備領域。
[0002]
技術背景
[0003]絲膠蛋白是一種絲膠狀蛋白質，為球蛋白。約占蠶絲量的20%?30%，絲膠蛋白由外到內由I，II，III，IV種蛋白質組成?？傮w分子構象主要為無規(guī)卷曲，分子空間結構松散、無序含有β結構存在，但無α螺旋結構。絲膠蛋白鏈上有許多側鏈較長的氨基酸，如精氨酸賴氨酸、谷氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、酪氨酸等，以及許多極性親水基團(如一0Η、一C00H、一ΝΗ2、> NH等)處于多肽鏈表面，這些親水性基團可使體內水分傳遞至皮膚角質層而結合，使皮膚保持一定水分，從而使皮膚柔軟而光滑。它與人體皮膚角質層中含有一定數(shù)量的天然調濕因子作用相似。
[0004]然而，絲膠蛋白是具有20個氨基酸的蛋白質，分子量較大。現(xiàn)在一般認為分子量較小的水溶性絲膠具有優(yōu)異的調濕和保濕作用，能使皮膚中水分含量保持適當使皮膚光滑、柔軟且富有彈性。但是，絲膠蛋白如果進一步進行酶解，可分別得到不同分子量的絲肽和絲氨酸等產(chǎn)品。它們不含生理活性成分，且對人體可能產(chǎn)生危害的重金屬和其他有機物通常附著在絲膠中。因此，如何才能讓分解后的絲膠蛋白分子量較小，且具有原蛋白質的功效，一直是一個難以協(xié)調的問題。

【發(fā)明內容】

[0005]發(fā)明目的
針對現(xiàn)有絲膠蛋白化妝品的現(xiàn)狀，發(fā)明一種絲膠蛋白多肽及制備和應用，制備的絲膠蛋白多肽，該多肽應用于化妝品，其分子量較小，且具有原絲膠蛋白的功效。
[0006]技術方案
本發(fā)明為一種絲膠蛋白多肽，其序列為A⑶STTVNFIPSRATTEEQ。制備步驟包括(I)取絲膠粉500g，按照質量/體積=1:1-3加入去離子水中溶解；(2)將絲膠溶液速冷至4-10°C ;
(3)在4-10°C離心，10000-15000rpm, 30-60分鐘，取上清；(4)采用旋轉蒸發(fā)儀，將上清溶液濃縮；(5)待溶液冷卻后，加入水解酶，在20-40°C反應30-60分鐘；(6)離心2000-3000rpm，5-10分鐘，取上清；(7)將上清液加入ρΗ5.7-6.3的緩沖液中，攪拌，離心10000-15000rpm，30-60分鐘，得到沉淀物；(8)將沉淀物復溶于pH6.4-7.2緩沖液中，采用透析法，分離出分子量為1600-3400Da的多肽，即得。所述的水解酶，可以是凝血酶、溶菌酶等。所述的絲膠蛋白多肽，在制備化妝品中的應用。
[0007]本發(fā)明涉及多肽委托上海生工合成。
[0008]有益效果
本發(fā)明的制備得到的絲膠蛋白多肽，經(jīng)蛋白質序列測定，序列為A⑶STTVNFIPSRATTEEQ，純度大于70%。實驗表明，該多肽能保濕的作用，作用與原絲膠蛋白相當。
[0009]
【具體實施方式】
[0010]實施例1
取絲膠粉500g，加入500ml去離子水中溶解；將絲膠溶液速冷至4°C ；在4°C離心，1000rpm,60分鐘，取上清；采用旋轉蒸發(fā)儀，將上清溶液濃縮；待溶液冷卻后，加入溶菌酶，在37°C反應30分鐘；離心3000rpm，5分鐘，取上清；將上清液加入pH5.7-6.3的緩沖液中，攪拌，離心10000rpm，60分鐘，得到沉淀物；將沉淀物復溶于pH6.4-7.2緩沖液中，采用透析法，分離出分子量為1600-3400Da的多肽，即得。采用固相蛋白質自動測序儀測定該多肽的序列為 ACDSTTVNFIPSRATTEEQ，純度為 84.1%。
[0011]實施例2
取絲膠粉500g，加入100ml去離子水中溶解；將絲膠溶液速冷至10°C ；在10°C離心，15000rpm, 30分鐘，取上清；采用旋轉蒸發(fā)儀，將上清溶液濃縮；待溶液冷卻后，加入凝血酶，在37°C反應30分鐘；離心2000rpm，10分鐘，取上清；將上清液加入pH5.7-6.3的緩沖液中，攪拌，離心15000rpm，30分鐘，得到沉淀物；將沉淀物復溶于pH6.4-7.2緩沖液中，采用透析法，分離出分子量為1600-3400Da的多肽，即得。采用固相蛋白質自動測序儀測定該多肽的序列為ACDSTTVNFIPSRATTEEQ，純度為73.0%。
[0012]實施例3
將實施例1制備的多肽添加入乳膏基質中。分別取不同濃度的絲膠蛋白2.0mg/ml、絲膠蛋白多肽溶液(0.5，1.0，2.0mg/ml)以1.25 μ L / cm2涂敷密度短期I次涂敷，輕輕拍打至吸收，測定12小時后角質層水分含量。數(shù)據(jù)計算:皮膚水合度變化率(％)=[皮膚水合度(測試時)_皮膚水合度(對照時)]/皮膚水合度(對照時)X 100 %。將實驗重復三次，2.0mg/ml絲膠蛋白、0.5，1.0,2.0,mg/ml絲膠蛋白多肽溶液的皮膚水合度率分別提高了為42.12、29.61、42.61、53.02%o
[0013]同時，分別取不同濃度的絲膠蛋白2.0mg/ml、絲膠蛋白多肽溶液(0.5，1.0，2.0mg/ml)以1.25 μ L / cm2涂敷密度短期I次涂敷，輕輕拍打至吸收，測定12小時后使用前后表皮的水分經(jīng)皮膚散失，將實驗重復三次。初始對照的透皮失水值分別為21.0 g /(m2.h) N20.1g/ (m2.h)、20.Ig / (m2.h )和 20.7 g / (m2.h )使用 2.0mg/ml 絲膠蛋白、0.5，1.0，2.0，mg/ml絲膠蛋白多肽溶液至12 h時，透皮失水分別達到15.1 g /(m2.1ι)、14.3g / (m2.h)、13.5 g / (m2.1ι)和 11.3 g / (m2.1ι)，均有不同程度的降低。
[0014]可見，絲膠蛋白多肽溶液能顯著性提高皮膚水合度率，有效地降低皮膚的透皮水分蒸發(fā)，具有保濕的作用，且與原型絲膠蛋白相比，其保濕作用不變。
【主權項】
1.一種絲膠蛋白多肽，其特征在于，序列為A⑶STTVNFIPSRATTEEQ。2.根據(jù)權利要求1所述絲膠蛋白多肽的制備方法，其特征在于，步驟包括(I)取絲膠粉500g，按照質量/體積=1:1-3加入去離子水中溶解；(2)將絲膠溶液速冷至4-10°C; (3)在4-10°C離心，10000-15000rpm, 30-60分鐘，取上清；(4)采用旋轉蒸發(fā)儀，將上清溶液濃縮；(5)待溶液冷卻后，加入水解酶，在20-40°C反應30-60分鐘；(6)離心2000-3000rpm，5_10分鐘，取上清；(7)將上清液加入ρΗ5.7-6.3的緩沖液中，攪拌，離心10000-15000rpm，30-60分鐘，得到沉淀物；(8)將沉淀物復溶于pH6.4-7.2緩沖液中，采用透析法，分離出分子量為1600-3400Da的多肽，即得。3.根據(jù)權利要求書2所述絲膠蛋白多肽的制備方法，其特征在于，所述的水解酶是凝血酶、溶菌酶。4.根據(jù)權利要求書I所述的絲膠蛋白多肽在制備化妝品中的應用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種絲膠蛋白多肽，涉及生物技術多肽制備領域。其序列為ACDSTTVNFIPSRATTEEQ。制備步驟包括（1）取絲膠粉500g，按照質量/體積=1:1-3加入去離子水中溶解；（2）將絲膠溶液速冷至4-10℃；（3）在4-10℃離心，10000-15000rpm，30-60分鐘，取上清；（4）采用旋轉蒸發(fā)儀，將上清溶液濃縮；（5）待溶液冷卻后，加入水解酶，在20-40℃反應30-60分鐘；（6）離心2000-3000rpm，5-10分鐘，取上清；（7）將上清液加入pH5.7-6.3的緩沖液中，攪拌，離心10000-15000rpm，30-60分鐘，得到沉淀物；（8）將沉淀物復溶于pH6.4-7.2緩沖液中，采用透析法，分離出分子量為1600-3400Da的多肽，即得。所述的絲膠蛋白多肽，在制備化妝品中的應用。本發(fā)明制備的絲膠蛋白多肽純度大于70%。實驗表明，該多肽能保濕的作用，作用與原絲膠蛋白相當。
【IPC分類】A61Q19/00, A61K8/64, C12P21/06, C07K7/08
【公開號】CN105017386
【申請?zhí)枴緾N201510449826
【發(fā)明人】羅瑞雪
【申請人】蘇州普羅達生物科技有限公司
【公開日】2015年11月4日
【申請日】2015年7月28日