細(xì)胞灌流分離裝置的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生物實(shí)驗(yàn)設(shè)備，具體是一種細(xì)胞灌流分離裝置。
【背景技術(shù)】
[0002]心肌細(xì)胞已成為研究心肌結(jié)構(gòu)、代謝、功能、病理生理、發(fā)病其機(jī)制及心肌疾病治療的重要工具。應(yīng)用成熟心肌細(xì)胞進(jìn)行心臟疾病發(fā)病機(jī)制和治療研究成為心血管病領(lǐng)域的重要課題。但是成年大鼠心肌細(xì)胞的分離和培養(yǎng)較為困難，傳統(tǒng)的Langendorff細(xì)胞灌流分離裝置包含數(shù)個(gè)蛇形管、玻璃容器和連接管道，主要依靠重力進(jìn)行灌流，其高度通常在I米左右，因此僅適合于電生理研究所需的單個(gè)細(xì)胞的急性分離。由于成年大鼠心肌細(xì)胞分離過程復(fù)雜、環(huán)節(jié)較多，傳統(tǒng)的LangendorfT裝置不方便消毒滅菌、容易造成分離細(xì)胞的污染，分離細(xì)胞環(huán)境溫度不易控制，分離細(xì)胞效率低、活性低，容易污染。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種安全高效的細(xì)胞灌流分離裝置，它主要用于成年大鼠心肌細(xì)胞的分離。
[0004]本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):一種細(xì)胞灌流分離裝置，包括支架和固定在支架上的蛇形管與玻璃容器；所述蛇形管上端連接有輸送液體軟管、蛇形管下端連接有懸掛心臟并輸送液體的套管，所述玻璃容器位于套管下方；所述玻璃容器底部開口，玻璃容器下方放置有燒杯；
所述支架外罩有透明外殼，所述蛇形管、玻璃容器和燒杯位于透明外殼內(nèi)；所述透明外殼內(nèi)壁上固定有紫外線殺菌燈和溫度計(jì)；透明外殼側(cè)壁上開有多個(gè)推拉窗。
[0005]其進(jìn)一步是:所述蛇形管壁是中空的且上下端開有進(jìn)、出水口，所述玻璃容器壁是中空的且上下端開有進(jìn)、出水口 ；所述細(xì)胞灌流分離裝置還包括放置在透明外殼外的恒溫水浴鍋；所述恒溫水浴鍋連接有循環(huán)水管，循環(huán)水管連接至蛇形管上端的進(jìn)水口，蛇形管下端的出水口連接至玻璃容器上端的進(jìn)水口，玻璃容器下端的出水口通過另一個(gè)循環(huán)水管連回恒溫水浴鍋。
[0006]所述細(xì)胞灌流分離裝置還包括放置在透明外殼外的恒流循環(huán)蠕動(dòng)栗，所述輸送液體軟管連接在恒流循環(huán)蠕動(dòng)栗上，輸送液體軟管連接至配制的液體源。
[0007]所述配制的液體源放置在燒杯中。
[0008]所述透明外殼側(cè)壁下端開有供循環(huán)水管和輸酶軟管穿過的孔。
[0009]所述透明外殼包括上下開口的箱體和活動(dòng)連接在箱體上的箱蓋；所述箱蓋上固定有對(duì)稱的立式提手。
[0010]所述箱體前側(cè)設(shè)置有兩對(duì)對(duì)稱布置的推拉窗，箱體兩側(cè)各設(shè)有一個(gè)推拉窗。
[0011]與現(xiàn)有技術(shù)相比，采用本發(fā)明可以達(dá)到以下技術(shù)效果:
1、透明外殼用于觀察內(nèi)部情況；
2、密閉空間，防塵、便于維持內(nèi)部溫度恒定37°C左右，解決了因冬季溫度低、操作空間溫度難以達(dá)標(biāo)的問題，而夏季可以減少操作人員長時(shí)間在37°C外環(huán)境工作導(dǎo)致中暑的現(xiàn)象；
3、立式提手用于打開箱蓋，更換內(nèi)部大物件方便，操作簡單；
4、推拉窗用于操作者伸手到內(nèi)部操作，減少細(xì)胞污染；
5、紫外線殺菌燈用于內(nèi)部消毒滅菌，減少細(xì)胞污染；
6、溫度計(jì)用于觀察內(nèi)部溫度，便于維持內(nèi)環(huán)境37°C，提高了分離細(xì)胞效率與活性。
【附圖說明】
[0012]圖1是本發(fā)明立體結(jié)構(gòu)示意圖，其中透明外殼是半剖狀態(tài)；
圖2是透明外殼立體結(jié)構(gòu)示意圖；
圖3是透明外殼立體結(jié)構(gòu)剖視圖。
[0013]圖中:1、支架；2、蛇形管；3、玻璃容器；4、輸送液體軟管；5、燒杯；6、透明外殼；
6-1、箱體；6-2、箱蓋；6-3、立式提手；7、紫外線殺菌燈；8、溫度計(jì)；9、推拉窗；10、恒溫水浴鍋；11、循環(huán)水管；12、恒流循環(huán)蠕動(dòng)栗。
【具體實(shí)施方式】
[0014]以下是本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施例，現(xiàn)結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0015]如圖1所示，一種細(xì)胞灌流分離裝置，支架I上固定有蛇形管2與玻璃容器3，蛇形管2上端連接有輸酶軟管4，蛇形管2下端連接有懸掛心臟并輸送液體的套管；玻璃容器3位于套管下方，玻璃容器3底部開口，玻璃容器3下方放置有燒杯5。蛇形管2壁是中空的且上下端開有進(jìn)、出水口，玻璃容器3壁是中空的且上下端開有進(jìn)、出水口 ；恒溫水浴鍋10連接有循環(huán)水管11，循環(huán)水管11連接至蛇形管2上端的進(jìn)水口，蛇形管2下端的出水口連接至玻璃容器3上端的進(jìn)水口，玻璃容器3下端的出水口通過另一個(gè)循環(huán)水管11連回恒溫水浴鍋10。輸送液體軟管4連接在恒流循環(huán)蠕動(dòng)栗12上，輸輸送液體軟管4連接至液體源，液體源放置在燒杯5中。
[0016]結(jié)合圖2和圖3所示，透明外殼6包括上下開口的箱體6-1和活動(dòng)連接在箱體6_1上的箱蓋6-2 ;透明外殼6罩在支架1、蛇形管2、玻璃容器3和燒杯5外，透明外殼6側(cè)壁下端開有供循環(huán)水管11和輸送液體軟管4穿過的孔；透明外殼6內(nèi)壁上固定有紫外線殺菌燈7和溫度計(jì)8 ;箱體6-1前側(cè)設(shè)置有兩對(duì)稱布置的推拉窗9，箱體6-1兩側(cè)各設(shè)有一個(gè)推拉窗9，箱蓋6-2上固定有對(duì)稱的立式提手6-3。
[0017]具體使用步驟
實(shí)驗(yàn)前I小時(shí)打開恒溫水浴鍋10，預(yù)熱蛇形管2、玻璃容器3和循環(huán)水管11，水循環(huán)方向?yàn)楹銣厮″?0 —循環(huán)水管11 —蛇形管2 —玻璃容器3 —另一個(gè)循環(huán)水管11 —恒溫水浴鍋10。同時(shí)通過蛇形管2、玻璃容器3和循環(huán)水管11的散熱功能加熱透明外殼6內(nèi)的環(huán)境溫度。觀察透明外殼6內(nèi)溫度計(jì)8維持內(nèi)部溫度恒定37°C左右；實(shí)驗(yàn)前半小時(shí)開透明外殼6內(nèi)紫外線殺菌燈7，進(jìn)行空氣消毒；所用的塑料燒杯、玻璃量筒及燒杯等進(jìn)行紫外照射；取成年SD大鼠，麻醉、消毒后開胸取心臟，通過推拉窗9懸掛心臟在套管上，線結(jié)扎固定。將無鈣液放置燒杯內(nèi)，同時(shí)打開恒流循環(huán)蠕動(dòng)栗12，通過輸送液體軟管4灌流無鈣液至蛇形管2，通過套管到達(dá)心臟，而后再回到另一個(gè)用于接污物燒杯內(nèi)。待心臟殘留血液栗干凈后，停恒流循環(huán)蠕動(dòng)栗12，將放置無鈣液的燒杯替換為放置有酶液的燒杯5，并將盛有酶液的燒杯5放于玻璃容器下；打開在透明外殼6外的恒流循環(huán)蠕動(dòng)栗12，通過輸送液體軟管4灌流酶液至蛇形管2，通過套管到達(dá)心臟，而后再回到燒杯5內(nèi)，循環(huán)灌流約15-20分鐘，流速6ml/min。整個(gè)灌流過程中，注意觀察透明外殼6內(nèi)溫度計(jì)8維持內(nèi)部溫度恒定37°C左右。消化結(jié)束后，將心臟取下，剪成碎塊，用吸管吹打，尼龍網(wǎng)過濾，濾液于室溫靜置20分鐘，讓細(xì)胞自然沉降，去上清，反復(fù)3次，細(xì)胞在室溫靜置I小時(shí)待用。
[0018]本發(fā)明僅使用一個(gè)蛇形管和玻璃容器，輸送液體軟管的數(shù)量和長度也經(jīng)過精簡，極大降低了整個(gè)系統(tǒng)的高度。由于離體心臟對(duì)外環(huán)境溫度要求嚴(yán)格，整個(gè)灌流過程中，心臟周圍的溫度及灌流液的溫度均要保持在37°C左右。傳統(tǒng)的細(xì)胞灌流分離裝置直接暴露在實(shí)驗(yàn)室大環(huán)境下，冬季室溫很難達(dá)到37°C左右，而夏季操作人員長時(shí)間暴露在37°C左右外環(huán)境工作極易導(dǎo)致中暑。而本發(fā)明配置有保溫用的透明外殼，縮小了實(shí)驗(yàn)空間，不僅利于維持內(nèi)部溫度恒定在37°C左右，還能起到日常防塵作用。傳統(tǒng)的LangendorfT細(xì)胞灌流分離裝置不方便消毒滅菌，容易造成分離細(xì)胞的污染。我們經(jīng)過改良，在透明外殼內(nèi)增加了滅菌裝置，心肌細(xì)胞分離的所有操作均可在該裝置中完成，大大降低了微生物污染的可能性。
[0019]此外，本發(fā)明所有的灌流液體均從下部的燒杯內(nèi)進(jìn)入，通過恒流栗直接栗至蛇形管內(nèi)，而不是按照常規(guī)方法從位于上部的容器內(nèi)加液體，再通過恒流栗雙向調(diào)節(jié)以維持流入和流出液體的平衡。本發(fā)明不僅便于排空氣泡，而且流出的酶液可再次通過恒流循環(huán)蠕動(dòng)栗循環(huán)流入心臟，在不影響分離效果的前提下大大節(jié)約了昂貴的膠原酶的用量。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種細(xì)胞灌流分離裝置，包括支架(I)和固定在支架(I)上的蛇形管(2)與玻璃容器(3 );所述蛇形管(2 )上端連接有輸送液體軟管(4 )、蛇形管(2 )下端連接有懸掛心臟并輸送液體的套管，所述玻璃容器(3 )位于套管下方；所述玻璃容器(3 )底部開口，玻璃容器(3 )下方放置有燒杯(5)； 其特征在于: 所述支架(I)外罩有透明外殼(6 )，所述蛇形管(2 )、玻璃容器(3 )和燒杯(5 )位于透明外殼(6)內(nèi)；所述透明外殼(6)內(nèi)壁上固定有紫外線殺菌燈(7)和溫度計(jì)(8);透明外殼(6)側(cè)壁上開有多個(gè)推拉窗(9)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞灌流分離裝置，其特征在于:所述蛇形管(2)壁是中空的且上下端開有進(jìn)、出水口，所述玻璃容器(3)壁是中空的且上下端開有進(jìn)、出水口 ；所述細(xì)胞灌流分離裝置還包括放置在透明外殼(6)外的恒溫水浴鍋(10);所述恒溫水浴鍋(10)連接有循環(huán)水管(11)，循環(huán)水管(11)連接至蛇形管(2)上端的進(jìn)水口，蛇形管(2)下端的出水口連接至玻璃容器(3 )上端的進(jìn)水口，玻璃容器(3 )下端的出水口通過另一個(gè)循環(huán)水管(11)連回恒溫水浴鍋(10)。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的細(xì)胞灌流分離裝置，其特征在于:所述細(xì)胞灌流分離裝置還包括放置在透明外殼(6)外的恒流循環(huán)蠕動(dòng)栗(12)，所述輸送液體軟管(4)連接在恒流循環(huán)蠕動(dòng)栗(12)上，輸送液體軟管(4)連接至配制的液體源。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的細(xì)胞灌流分離裝置，其特征在于:所述配制的液體源放置在燒杯(5)中。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的細(xì)胞灌流分離裝置，其特征在于:所述透明外殼(6)側(cè)壁下端開有供循環(huán)水管(11)和輸送液體軟管(4)穿過的孔。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞灌流分離裝置，其特征在于:所述透明外殼(6)包括上下開口的箱體(6-1)和活動(dòng)連接在箱體(6-1)上的箱蓋(6-2 );所述箱蓋(6-2 )上固定有對(duì)稱的立式提手(6-3)。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的細(xì)胞灌流分離裝置，其特征在于:所述箱體(6-1)前側(cè)設(shè)置有兩對(duì)稱布置的推拉窗(9)，箱體(6-1)兩側(cè)各設(shè)有一個(gè)推拉窗(9)。
【專利摘要】本發(fā)明公布一種細(xì)胞灌流分離裝置，屬于生物實(shí)驗(yàn)設(shè)備技術(shù)領(lǐng)域。包括支架和固定在支架上的蛇形管與玻璃容器；玻璃容器下方放置有燒杯；支架外罩有透明外殼，蛇形管、玻璃容器和燒杯位于透明外殼內(nèi)。透明外殼內(nèi)壁上固定有紫外線殺菌燈和溫度計(jì)；透明外殼側(cè)壁上開有多個(gè)推拉窗。本發(fā)明解決了傳統(tǒng)的Langendorff裝置不方便消毒滅菌、容易造成分離細(xì)胞的污染，環(huán)境溫度不易控制，分離細(xì)胞效率低、活性低，容易污染等問題。本發(fā)明溫度控制簡單、準(zhǔn)確，提高了分離細(xì)胞效率與活性；方便消毒滅菌，減少了細(xì)胞污染，操作簡單。
【IPC分類】C12M1/00
【公開號(hào)】CN105018332
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510421168
【發(fā)明人】張琳, 張慶濤, 陳泓宇, 陳勇, 王人貴, 孫申, 唐曉霞
【申請(qǐng)人】徐州醫(yī)學(xué)院
【公開日】2015年11月4日
【申請(qǐng)日】2015年7月17日