一種用于提取植物rna批量粉碎樣品的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種用于提取植物RNA批量粉碎樣品的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]提取RNA是分子實(shí)驗(yàn)室的最常見的實(shí)驗(yàn)操作之一，RNA質(zhì)量的好壞直接制約著下一步的實(shí)驗(yàn)操作，如cDNA合成，RT-qPCR熒光定量，Northern分子雜交等。RNA提取的難度在于RNA很容易被RNA酶降解，而RNA酶在植物體內(nèi)和外界都廣泛存在，且不易清除。因此RNA提取粉碎樣品時(shí)需要在液氮的低溫保護(hù)下進(jìn)行。傳統(tǒng)的RNA提取樣品粉碎是用研缽磨樣，在液氮保護(hù)下快速研磨。這種方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，而且容易造成樣品交叉污染。目前已有發(fā)明了一種低溫研磨盒，但這種研磨盒仍然需要研磨棒對樣品逐一研磨。即便使用手動(dòng)攪拌機(jī)在離心管中研磨可省時(shí)省力，但手動(dòng)攪拌機(jī)價(jià)格也比較高。市場上也出現(xiàn)了研磨機(jī)，通過鋼珠或磁珠的震蕩，批量使樣品研磨。但是研磨機(jī)一般都不能使植物處于液氮低溫保護(hù)狀態(tài)，容易造成RNA的降解，且研磨機(jī)的價(jià)格更高。
[0003]本發(fā)明設(shè)計(jì)了一種用于提取植物RNA批量粉碎樣品的方法，該方法中采用了簡易的低溫保護(hù)泡沫震蕩盒，可以使植物樣品始終處于液氮的低溫保護(hù)狀態(tài)，通過固定的2mL離心管和其內(nèi)的鋼珠快速晃動(dòng)，批量使樣品粉碎。該方法涉及的泡沫盒制作簡單，操作也十分簡便，且成本很低，具有較廣的適用性及較高的實(shí)用性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明目的在于，提供一種用于提取植物RNA批量粉碎樣品的方法，該方法涉及裝置是由泡沫盒、離心管架、離心管、泡沫塊和固定片組成，將泡沫盒內(nèi)放置一個(gè)2mL離心管架，其周圍用泡沫塊固定，然后再將泡沫盒預(yù)先用液氮冷卻，將裝有樣品和鋼珠的離心管置于液氮中，然后用鑷子將其放入到泡沫盒中的離心管架上，使植物樣品處于液氮的低溫保護(hù)狀態(tài)，通過快速晃動(dòng)，使其批量粉碎，達(dá)到提取RNA粉碎樣品的要求。本發(fā)明所述方法可同時(shí)粉碎多個(gè)植物樣品，大大縮短了提取RNA過程中樣品粉碎所花時(shí)間，節(jié)約樣品，樣品無交叉污染，并且樣品始終處于低溫保護(hù)狀態(tài)，避免了 RNA的降解。
[0005]本發(fā)明所述的一種用于提取植物RNA批量粉碎樣品的方法，該方法涉及裝置是由泡沫盒、離心管架、離心管、泡沫塊和固定片組成，在泡沫盒(4)內(nèi)一端放置離心管架(5)，泡沫盒(4)內(nèi)的另一端放置用于固定離心管架(5)的泡沫塊(3)，在離心管架(5)內(nèi)放置離心管(6)，將泡沫盒(4)的一端與蓋子(I)的一端采用膠帶粘連，在蓋子(I)的內(nèi)側(cè)與離心管
[6]的對應(yīng)處固定一塊固定片(7)，具體操作按下列步驟進(jìn)行:
a、植物樣品取樣:取50-100mg植物鹽角草或擬南芥地上部分樣品放置于2mL離心管
(6)中，加入一顆6mmde鋼珠，蓋上蓋后放入液氮速凍，用于直接提取樣品RNA或保存于溫度-80°C冰箱備用；
b、將泡沫盒(4)內(nèi)放置一個(gè)2mL離心管架(5)，離心管架(5 )的周圍用泡沫塊(3 )固定，然后再將泡沫盒(4)預(yù)先用液氮冷卻； C、將裝有鹽角草或擬南芥地上部分樣品和鋼珠的離心管(6)置于液氮中，然后用鑷子將其放入到泡沫盒(4)中的離心管架(5 )上，蓋上蓋子(I)，固定在蓋子(I)上的固定片(7 )正好使離心管(5)固定住，翻轉(zhuǎn)泡沫盒(4)使液氮從泡沫盒(4)縫隙流出；
d、抓緊泡沫盒(4)，上下快速搖晃30 S，顛倒泡沫盒(4)再快速上下?lián)u晃30 S，搖晃，當(dāng)鹽角草或擬南芥地上部分樣品成為粉末狀后，打開離心管(6)蓋子并迅速添加用于下一步提取RNA的常規(guī)的試劑即可。
[0006]本發(fā)明所述的一種用于提取植物RNA批量粉碎樣品的方法，該方法中添加的試劑為QIAGEN或OMEGA試劑盒中試劑，用于后續(xù)RNA提取操作。
[0007]本發(fā)明所述的一種用于提取植物RNA批量粉碎樣品的方法，該方法適用于鹽角草、擬南芥等大多數(shù)易粉碎的植物地上部樣品，對于幼嫩根部樣品也同樣適用。
【附圖說明】
[0008]圖1為本發(fā)明泡沫盒結(jié)構(gòu)示意圖；
圖2為本發(fā)明離心管內(nèi)鹽角草及擬南芥樣品粉碎圖；
圖3為本發(fā)明RNA提取結(jié)果電泳圖。
【具體實(shí)施方式】
[0009]實(shí)施例1
本發(fā)明所述方法涉及裝置是由泡沫盒、離心管架、離心管、泡沫塊和固定片組成，在泡沫盒4內(nèi)一端放置離心管架5，泡沫盒4內(nèi)的另一端放置用于固定離心管架5的泡沫塊3，在離心管架5內(nèi)放置離心管6，將泡沫盒4的一端與蓋子I的一端采用膠帶粘連，在蓋子I的內(nèi)側(cè)與離心管6的對應(yīng)處固定一塊固定片7，具體操作按下列步驟進(jìn)行:
a、植物樣品取樣:取50mg植物鹽角草地上部分樣品放置于2mL離心管6中，加入一顆6mm的鋼珠，蓋上蓋后放入液氮速凍，用于直接提取樣品RNA或保存于_80°C冰箱備用；
b、將泡沫盒4內(nèi)放置一個(gè)2mL離心管架5，離心管架5的周圍用泡沫塊3固定，然后再將泡沫盒4預(yù)先用液氮冷卻；
c、將步驟a中裝有鹽角草樣品和鋼珠的的離心管6置于液氮中，然后用鑷子將其放入到泡沫盒4中的離心管架5上，蓋上泡沫盒4的蓋子1，固定在蓋子I上的固定片7正好使離心管6固定住，翻轉(zhuǎn)泡沫盒4使液氮從泡沫盒4縫隙流出；
d、抓緊泡沫盒4，上下快速搖晃30s，顛倒泡沫盒4再快速上下?lián)u晃30S，但注意不要震蕩太劇烈使離心管6破裂，當(dāng)鹽角草樣品成為粉末狀后，打開離心管6蓋子并添加用于下一步提取RNA的常規(guī)的QIAGEN或OMEGA試劑盒中試劑即可。
[0010]實(shí)施例2
本發(fā)明所述方法涉及裝置是由泡沫盒、離心管架、離心管、泡沫塊和固定片組成，在泡沫盒4內(nèi)一端放置離心管架5，泡沫盒4內(nèi)的另一端放置用于固定離心管架5的泡沫塊3，在離心管架5內(nèi)放置離心管6，將泡沫盒4的一端與蓋子I的一端采用膠帶粘連，在蓋子I的內(nèi)側(cè)與離心管6的對應(yīng)處固定一塊固定片7，具體操作按下列步驟進(jìn)行:
a、植物樣品取樣:取10mg植物擬南芥地上部分樣品放置于2mL離心管6中，加入一顆6mm的鋼珠，蓋上蓋后放入液氮速凍，用于直接提取樣品RNA或保存于溫度_80°C冰箱備用；
b、將泡沫盒4內(nèi)放置一個(gè)2mL離心管架5，離心管架5的周圍用泡沫塊3固定，然后再將泡沫盒4預(yù)先用液氮冷卻；
c、將裝有擬南芥樣品和鋼珠的離心管6置于液氮中，然后用鑷子將其放入到泡沫盒4中的離心管架5上，蓋上泡沫盒4的蓋子1，固定在蓋子I上的固定片7正好使離心管6固定住，翻轉(zhuǎn)泡沫盒4使液氮從泡沫盒4縫隙流出；
d、抓緊泡沫盒4，上下快速搖晃20S，顛倒泡沫盒4再快速上下?lián)u晃20 S，當(dāng)擬南芥樣品成為粉末狀后，打開離心管6蓋子并迅速添加用于下一步提取RNA的常規(guī)的QIAGEN或OMEGA試劑盒中試劑即可。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種用于提取植物RNA批量粉碎樣品的方法，其特征在于該方法涉及裝置是由泡沫盒、離心管架、離心管、泡沫塊和固定片組成，在泡沫盒(4)內(nèi)一端放置離心管架(5)，泡沫盒(4)內(nèi)的另一端放置用于固定離心管架(5)的泡沫塊(3)，在離心管架(5)內(nèi)放置離心管(6 )，泡沫盒(4 )的一端與蓋子(I)的一端采用膠帶粘連，在蓋子(I)的內(nèi)側(cè)與離心管(6 )的對應(yīng)處固定一塊固定片(7)，具體操作按下列步驟進(jìn)行: a、植物樣品取樣:取50-100mg植物鹽角草或擬南芥地上部分樣品放置于2mL離心管(6)中，加入一顆6_的鋼珠，蓋上蓋后放入液氮速凍，用于直接提取樣品RNA或保存于溫度_80°C冰箱備用； b、將泡沫盒(4)內(nèi)放置一個(gè)2mL離心管架(5)，離心管架(5 )的周圍用泡沫塊(3 )固定，然后再將泡沫盒(4)預(yù)先用液氮冷卻； c、將裝有鹽角草或擬南芥地上部分樣品和鋼珠的離心管(6)置于液氮中，然后用鑷子將其放入到泡沫盒(4)中的離心管架(5 )上，蓋上蓋子(I)，固定在蓋子(I)上的固定片(7 )正好使離心管(5)固定住，翻轉(zhuǎn)泡沫盒(4)使液氮從泡沫盒(4)縫隙流出； d、抓緊泡沫盒(4)，上下快速搖晃20-30s，顛倒泡沫盒(4)再快速上下?lián)u晃20-30S，搖晃，當(dāng)鹽角草或擬南芥地上部分樣品成為粉末狀后，打開離心管(6)蓋子并迅速添加用于下一步提取RNA的常規(guī)試劑即可。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于提取植物RNA批量粉碎樣品的方法，該方法涉及裝置是由泡沫盒、離心管架、離心管、泡沫塊和固定片組成，將泡沫盒內(nèi)放置一個(gè)2mL離心管架，其周圍用泡沫塊固定，然后再將泡沫盒預(yù)先用液氮冷卻，將裝有樣品和鋼珠的離心管置于液氮中，然后用鑷子將其放入到泡沫盒中的離心管架上，使植物樣品處于液氮的低溫保護(hù)狀態(tài)，通過快速晃動(dòng)，使其批量粉碎，達(dá)到提取RNA粉碎樣品的要求。本發(fā)明所述方法可同時(shí)粉碎多個(gè)植物樣品，大大縮短了提取RNA過程中樣品粉碎所花時(shí)間，節(jié)約樣品，樣品無交叉污染，并且樣品始終處于低溫保護(hù)狀態(tài)，避免了RNA的降解。
【IPC分類】C12N15/10
【公開號】CN105018473
【申請?zhí)枴緾N201510553824
【發(fā)明人】肖薪龍, 姚銀安
【申請人】中國科學(xué)院新疆生態(tài)與地理研究所
【公開日】2015年11月4日
【申請日】2015年9月2日