一種甘薯褐斑病抗性鑒定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種農(nóng)作物病害抗性鑒定方法，具體的說就是一種鐮刀菌引起的甘薯 褐斑病抗性鑒定方法，屬于農(nóng)業(yè)植物保護(hù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 甘薯褐斑病（sweet potato brown spot)，由鐮刀菌（Fusarium spp)侵染引起的， 為甘薯生長期和貯藏期的主要病害之一，是最近幾年出現(xiàn)的一種新病害，2012-2015年甘 薯病害普查發(fā)現(xiàn)，該病害廣泛分布在全國各甘薯生產(chǎn)區(qū)。該病害在甘薯薯塊上主要表現(xiàn)為 圓形、深褐色至黑色病斑，稍凹陷，具有輕微苦味，病狀類似甘薯黑斑病，田間和儲藏期均發(fā) 生，且發(fā)病后薯塊不宜食用，儲藏期常與其他病害共同發(fā)生，使全窖薯塊腐爛，造成嚴(yán)重的 經(jīng)擠損失。
[0003] 甘薯褐斑病病原鐮刀菌在土壤中普遍存在，因此化學(xué)防治效果不明顯，而抗病品 種的選育和推廣是控制該病害發(fā)生發(fā)展的主要手段，因此準(zhǔn)確、有效的評價品種的抗病性 顯得尤其重要。目前，對甘薯黑斑病、線蟲病及軟腐病等病害的抗性研究較多，但由于甘薯 褐斑病是最近幾年甘薯新發(fā)生的病害，不同甘薯品種對褐斑病的抗性鑒定研究相當(dāng)匱乏， 目前，尚未見標(biāo)準(zhǔn)的甘薯褐斑病抗性鑒定方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種甘薯褐斑病抗性鑒定方法。該方法具有操作過程簡便， 易學(xué)，省時省力等優(yōu)點(diǎn)，能快速、準(zhǔn)確的確定薯塊對甘薯褐斑病的抗感性程度，為甘薯抗病 育種篩選大批材料提供技術(shù)支持。
[0005] 本發(fā)明是以如下技術(shù)方案實現(xiàn)的：一種甘薯褐斑病抗性鑒定方法，75%酒精消毒 薯塊，米用0. 5cm長接種針頭，蘸取甘薯褐斑病菌孢子，接種薯塊，26 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，滅菌 濕紗布保濕，培養(yǎng)10天，測量病斑直徑，計算抗病表現(xiàn)百分率，評價甘薯薯塊抗褐斑病的抗 性，具體按如下步驟進(jìn)行：
[0006] 1.病原菌分離和準(zhǔn)備：從田間采集發(fā)病薯塊，利用組織分離和單孢分離法分離病 原菌，26°C下在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA)平板上培養(yǎng)7天，備用；
[0007] 2.參試薯塊準(zhǔn)備：在收獲時，每個甘薯品種田間選取3塊中等大小、表面光滑、無 傷爛的薯塊，仔細(xì)洗凈，晾干，編號，75 %的酒精消毒后待用；
[0008] 3.接種液的配制：將在PDA平板上長出的分生孢子用無菌水沖洗下來，用無菌水 配制成濃度為IX IO6個/ml的孢子懸浮液備用；
[0009] 4.接種鑒定：將配制好的孢子懸浮液分裝在容量為100mL的無菌燒杯中，然后取8 號醫(yī)用針頭，用鉗子截取到〇. 5cm，蘸取配好的孢子懸浮液，針刺法縱向接種到甘薯薯塊上， 每薯塊接種三排，每排5個點(diǎn)，每針刺一次，針頭需蘸取菌液。將接種后的薯塊用滅菌紗布 覆蓋保濕，每天換洗紗布，26°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[0010] (5)調(diào)查評價：接種10天后，取出薯塊，病斑為圓形，測量病斑直徑，以中抗品種勝 利百號為對照品種，按以下公式計算抗病表現(xiàn)百分率，再根據(jù)抗病表現(xiàn)百分率進(jìn)行品種的 抗感特性評價；
[0011] 抗病表現(xiàn)百分率= 供試(?種病斑；平均胃徑 Xl傭 H 照品種病斑平均直徑2
[0012] 所述的甘薯褐斑病抗感特性評價分為五級，各級的評價標(biāo)準(zhǔn)為：
[0013] 高抗：抗病表現(xiàn)百分率彡40 ;
[0014] 抗病：40〈抗病表現(xiàn)百分率彡80 ;
[0015] 中抗：80 <抗病表現(xiàn)百分率彡120 ;
[0016] 感?。?20 <抗病表現(xiàn)百分率彡160 ;
[0017] 高感：160 <抗病表現(xiàn)百分率。
[0018] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是，該方法以薯塊為材料，室內(nèi)接種甘薯褐斑病菌鑒定抗感性，接近 于田間甘薯薯塊感染甘薯褐斑病的實際情況。該鑒定方法科學(xué)、省時省力，操作簡單、易學(xué)， 對實驗設(shè)備要求不高，各育種單位均能開展鑒定工作。該鑒定方法能為甘薯抗病育種前期 鑒定提供技術(shù)支持，剔除部分感病品種，為后期品種篩選減輕人力、物力。同時，室內(nèi)滅菌接 種，易于試驗條件控制，也增強(qiáng)了結(jié)果的準(zhǔn)確性。該方法的推廣使用，對于篩選抗病品種和 指導(dǎo)甘薯抗病育種具有重要意義和現(xiàn)實作用。
【具體實施方式】
[0019] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明：
[0020] 實施例
[0021] -種甘薯褐斑病抗性鑒定方法，我們對收獲期采集的16個甘薯品種的薯塊進(jìn)行 褐斑病抗性鑒定試驗，按如下步驟進(jìn)行：
[0022] 1.病原菌分離和準(zhǔn)備：從中國農(nóng)科院徐州甘薯研究中心試驗田采集發(fā)病薯塊，利 用組織分離和單孢分離法分離病原菌，并經(jīng)柯赫氏法則驗證確定。26°C下在馬鈴薯葡萄糖 瓊脂培養(yǎng)基（PDA)平板上培養(yǎng)7天，備用；
[0023] 2.參試薯塊準(zhǔn)備：在收獲時，選16個甘薯品種，每個甘薯品種選取3塊中等大小、 表面光滑、無傷爛的薯塊，仔細(xì)洗凈，晾干，編號，75%的酒精消毒后待用；
[0024] 3.接種液的配制：將在PDA平板上長出的分生孢子用無菌水沖洗下來，用無菌水 配制成濃度為IX IO6個/ml的孢子懸浮液備用；
[0025] 4.接種鑒定：將配制好的孢子懸浮液分裝在容量為100mL的無菌燒杯中，然后采 用取8號醫(yī)用針頭，用鉗子截取到0. 5cm，蘸取配好的孢子懸浮液，針刺法縱向接種到甘薯 薯塊上，每薯塊接種三排，每排5個點(diǎn)，每針刺一次，針頭需蘸取菌液。將接種后的薯塊滅菌 紗布保濕，每天換洗紗布，26°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[0026] 5. (5)調(diào)查評價：接種10天后，取出薯塊，病斑為圓形，測量病斑直徑，以中抗品種 勝利百號為對照品種，按以下公式計算抗病表現(xiàn)百分率，再根據(jù)抗病表現(xiàn)百分率進(jìn)行品種 的抗感特性評價；
[0027] immune ?臟鮮賊徑2 X100 饑w衣從日刀i 只寸照品種病斑平馳徑= u
[0028] 所述的甘薯褐斑病抗感特性評價分為五級，各級的評價標(biāo)準(zhǔn)為：
[0029] 高抗：抗病表現(xiàn)百分率< 40 ;
[0030] 抗?。?0 <抗病表現(xiàn)百分率< 80 ;
[0031] 中抗：80 <抗病表現(xiàn)百分率彡120 ;
[0032] 感?。?20 <抗病表現(xiàn)百分率< 160 ;
[0033] 高感：160 <抗病表現(xiàn)百分率。
[0034] 表1 :甘薯薯塊對甘薯褐斑病抗性鑒定結(jié)果
[0037] *HR:高抗，high resistance ;R:抗，resistance ;MR :中抗，middle resistance ;HS:高感，high susceptibility ;S:感，susceptibility ;MS :中感，middle susceptibility
[0038] 結(jié)論：
[0039] 從表1可以看出：接種褐斑病菌的薯塊置于26°C生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10天后調(diào)查 病斑發(fā)病直徑，并計算抗病表現(xiàn)百分率進(jìn)行評價，其中：吉徐1號和徐薯25對甘薯褐斑病的 抗性級別為"抗病";徐薯29、商薯19、勝利百號等品種對甘薯褐斑病的抗性級別為"中抗"； 煙薯25和廣薯87對甘薯褐斑病的抗性級別為"感病";徐薯26、巖薯5號、徐渝薯34、徐渝 薯35、徐薯33、徐薯28、龍薯9號、濟(jì)薯25及栗子香等品種抗性級別為"高感"，屬于高感品 種。
【主權(quán)項】
1. 一種甘薯褐斑病抗性鑒定方法，其特征是：用75%酒精消毒薯塊，采用0. 5cm長接種 針頭，蘸取甘薯褐斑病菌孢子，接種薯塊，26°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，滅菌濕紗布保濕，培養(yǎng)10天， 測量病斑直徑，計算抗病表現(xiàn)百分率，評價甘薯薯塊抗褐斑病的抗性，具體按如下步驟進(jìn) 行： (1) 病原菌分離和準(zhǔn)備：田間采集發(fā)病薯塊，利用組織分離和單孢分離法分離病原菌， 26°C下在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基PDA平板上培養(yǎng)7天，備用； (2) 參試薯塊準(zhǔn)備：在收獲時，每個甘薯品種田間選取3塊中等大小、表面光滑、無傷爛 的薯塊，仔細(xì)洗凈，晾干，編號，75 %的酒精消毒后待用； (3) 接種液的配制：將在PDA平板上長出的分生孢子用無菌水沖洗下來，用無菌水配制 成濃度為1X106個/ml的孢子懸浮液備用； (4) 接種鑒定：將配制好的孢子懸浮液分裝在容量為100ml的無菌燒杯中，然后采用8 號醫(yī)用針頭，用鉗子截取到0. 5cm，蘸取配好的孢子懸浮液，針刺法縱向接種到甘薯薯塊上， 每薯塊接種三排，每排5個點(diǎn)，每針刺一次，針頭需蘸取菌液；將接種后的薯塊滅菌紗布保 濕，每天換洗紗布，26°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； (5) 調(diào)查評價：接種10天后，取出薯塊，病斑為圓形，測量病斑直徑，以中抗品種勝利百 號為對照品種，按以下公式計算抗病表現(xiàn)百分率，再根據(jù)抗病表現(xiàn)百分率進(jìn)行品種的抗感 特性評價?所述的甘薯褐斑病抗感特性評價分為五級，各級的評價標(biāo)準(zhǔn)為： 高抗：抗病表現(xiàn)百分率< 40 ; 抗?。?0 <抗病表現(xiàn)百分率< 80 ; 中抗：80 <抗病表現(xiàn)百分率彡120 ; 感?。?20 <抗病表現(xiàn)百分率彡160 ; 高感：160 <抗病表現(xiàn)百分率。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種甘薯新病害甘薯褐斑病抗性鑒定方法，屬于農(nóng)作物病蟲害抗性鑒定方法。該方法科學(xué)，操作過程簡單，試驗條件要求不高，選取待鑒定的3塊中等大小、表面光滑、無傷爛的薯塊，仔細(xì)洗凈，晾干，編號，75％的酒精消毒，接種預(yù)先用無菌水配制好的濃度為1×106個/mL的褐斑病孢子懸浮液中，滅菌濕紗布保濕，26℃室溫下培養(yǎng)10天，調(diào)查各試驗薯塊的為害直徑，計算抗病表現(xiàn)百分率，通過抗病表現(xiàn)百分率的大小即可判斷各供試品種薯塊對甘薯褐斑病的抗感情況。
【IPC分類】C12Q1/04
【公開號】CN105018566
【申請?zhí)枴緾N201510450340
【發(fā)明人】張成玲, 謝逸萍, 趙永強(qiáng), 孫厚俊, 徐振, 楊冬靜
【申請人】江蘇徐州甘薯研究中心
【公開日】2015年11月4日
【申請日】2015年7月28日