連翹葉中連翹酯苷a的提取純化工藝方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及連翹葉中連翹酯苷A的提取純化工藝方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，對(duì)連翹酯苷A的提取及純化方法都有報(bào)道?，F(xiàn)有技術(shù)中，通過用有機(jī)溶劑提取，再上硅膠柱或柱層析法純化得到連翹酯苷A，例如公開號(hào)為CN101215302A的發(fā)明專利就公開了一種連翹酯苷A制備方法，就是利用有機(jī)溶劑提取，再用柱層析純化(精制)得到連翹酯苷A ;這種方法雖然達(dá)到了提取、純化(精制)連翹酯苷A的目的，但是用有機(jī)溶劑提取后，直接把提取液進(jìn)行柱層析，提取液中還含有脂溶性色素、水溶性雜質(zhì)，不但加大了后續(xù)柱層析的難度和時(shí)間，最終獲得的連翹酯苷A中的雜質(zhì)多，并且連翹酯苷A的色度不好。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明提出連翹葉中連翹酯苷A的提取純化工藝方法，通過具體工藝步驟，在純化前盡可能去除連翹酯苷A提取物中的脂溶性色素和水溶性雜質(zhì)，減輕后續(xù)純化連翹酯苷A的難度，最終產(chǎn)品連翹酯苷A的色度好、純度達(dá)到95-99%、提取率達(dá)到3.5-5.5%。
[0004]為達(dá)到目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:連翹葉中連翹酯苷A的提取純化工藝方法，具體步驟如下:
(O提取:取干燥連翹葉，粉碎至50-70目，得連翹粉，以連翹粉的質(zhì)量為依據(jù)加入
11-20倍的50?80%乙醇，每次提取60-120分鐘，加熱回流提取三次，將三次所得提取液合并、過濾，濾液600C下濃縮至無醇味；
(2)萃取:將步驟(I)得到的濃縮物加水溶解，得提取液；然后，調(diào)pH值至6，加入石油醚萃取除去脂溶性色素；然后，用水飽和正丁醇萃取除去大部分水溶性雜質(zhì)；其中，按體積比水飽和正丁醇的用量為提取液的0.5-2倍；萃取次數(shù)為2-4次，回收正丁醇，得連翹酯苷A萃取物；
(3)色譜柱精制:連翹酯苷A萃取物干法上200-300目硅膠柱，用乙酸乙酯與甲醇的混合液洗脫，其中乙酸乙酯與甲醇的體積比7: 1，收集洗脫液，濃縮至干，得粗結(jié)晶物；
(4)重結(jié)晶:將得到的粗結(jié)晶物用無水乙醇溶解，稍微加熱，待全部溶解后冷卻，然后放置冰箱中在1-6°C溫度下重結(jié)晶，12小時(shí)后，減壓抽濾，得到連翹酯苷A晶體；然后，重復(fù)上述重結(jié)晶步驟2_3次；最后干燥，得成品。
[0005]有益效果:本發(fā)明在色譜柱精制純化前，增加了去脂溶性色素及水溶性雜質(zhì)的萃取步驟，減輕了后續(xù)精制純化連翹酯苷A的難度，連翹酯苷A的純化是通過色譜柱精制、重結(jié)晶的步驟達(dá)到的，從而提高提出率、提高連翹酯苷A的純度，提取純化后的連翹酯苷A純度達(dá)到95-99%、提取率達(dá)到3.5-5.5%。
【具體實(shí)施方式】
[0006]實(shí)施例1:取50g干燥連翹葉，加入0.8Kg的80%乙醇水溶液，加熱回流提取三次，每次90分鐘，將三次所得提取液合并、過濾，濾液在60°C下濃縮至無醇味；將濃縮物加一定量水溶解，得提取液；然后，調(diào)PH值至6，用石油醚萃取除去脂溶性色素，再用飽和正丁醇萃取除去大部分水溶性雜質(zhì)，按體積比萃取溶劑的用量為提取液的I倍，萃取3次，回收正丁醇，得連翹酯苷A萃取物；將連翹酯苷A萃取物干法上200-300目硅膠柱，用乙酸乙酯與甲醇的混合液洗脫，其中乙酸乙酯與甲醇的體積比7: 1，收集洗脫液；薄層層析檢測(按體積比，展開劑為二氯甲烷:甲醇:甲酸=10:2:0.02),濃縮至干，得粗結(jié)晶物(連翹酯苷A粗品);將得到的粗結(jié)晶物用無水乙醇溶解(稍微加熱，加熱溫度30-45°C )，待全部溶解后，放置冰箱中在1-6°C溫度下重結(jié)晶，12小時(shí)后，減壓抽濾(重復(fù)2次)，得到連翹酯苷A晶體2.35g。利用HPLC (蛋白質(zhì)檢測與分析)測定連翹酯苷A的含量，連翹酯苷A的純度為96.5%，提取率(收率)為3.8%。
[0007]以上，實(shí)施例1只是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明，本發(fā)明專利申請不受到實(shí)施例1的限制，只要在本說明書
【發(fā)明內(nèi)容】
部分限定的技術(shù)方案，都應(yīng)落入本發(fā)明專利申請的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.連翹葉中連翹酯苷A的提取純化工藝方法，具體步驟如下: (O提取:取干燥連翹葉，粉碎至50-70目，得連翹粉，以連翹粉的質(zhì)量為依據(jù)加入11-20倍的50?80%乙醇，每次提取60-120分鐘，加熱回流提取三次，將三次所得提取液合并、過濾，濾液600C下濃縮至無醇味； (2)萃取:將步驟(I)得到的濃縮物加水溶解，得提取液；然后，調(diào)pH值至6，用石油醚萃取除去脂溶性色素；然后，用水飽和正丁醇萃取除去大部分水溶性雜質(zhì)，水飽和正丁醇的用量為提取液的0.5-2倍；萃取次數(shù)為2-4次，回收正丁醇，得連翹酯苷A萃取物； (3)色譜柱精制:連翹酯苷A萃取物干法上200-300目硅膠柱，用乙酸乙酯與甲醇的混合液洗脫，其中乙酸乙酯與甲醇的體積比7: 1，收集洗脫液，濃縮至干，得粗結(jié)晶物； (4)重結(jié)晶:將得到的粗結(jié)晶物用無水乙醇溶解，稍微加熱，待全部溶解后冷卻，然后放置冰箱中在1-6°C溫度下重結(jié)晶，12小時(shí)后，減壓抽濾，得到連翹酯苷A晶體；然后，重復(fù)上述重結(jié)晶步驟2_3次；最后干燥，得成品D
【專利摘要】本發(fā)明提出了連翹葉中連翹酯苷A的提取純化工藝方法，在純化前盡可能去除連翹酯苷A提取物中的脂溶性色素和水溶性雜質(zhì)，減輕后續(xù)純化連翹酯苷A的難度，最終產(chǎn)品連翹酯苷A的色度好、純度達(dá)到95-99%、提取率達(dá)到3.5-5.5%。其技術(shù)方案為：（1）提?。唬?）萃?。簩⒉襟E（1）得到的濃縮物加水溶解，得提取液；然后，調(diào)pH值至6，加入石油醚萃取除去脂溶性色素；然后，用水飽和正丁醇萃取除去大部分水溶性雜質(zhì)；其中，按體積比水飽和正丁醇的用量為提取液的0.5-2倍；萃取次數(shù)為2-4次，回收正丁醇，得連翹酯苷A萃取物；（3）色譜柱精制（上200-300目硅膠柱），得粗結(jié)晶物；（4）重結(jié)晶，得成品。本發(fā)明的主要?jiǎng)?chuàng)新在于步驟（2）萃取。
【IPC分類】C07H15/18, C07H1/08
【公開號(hào)】CN105085587
【申請?zhí)枴緾N201510473247
【發(fā)明人】曹克紅, 楊光義
【申請人】湖北濟(jì)世藥業(yè)有限責(zé)任公司, 十堰市太和醫(yī)院
【公開日】2015年11月25日
【申請日】2015年8月5日