腫瘤壞死因子抑制多肽及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及用于預(yù)防和治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的腫瘤壞 死因子抑制多肽。
【背景技術(shù)】：
[0002] 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoidarthritis，RA)是臨床最常見的炎性關(guān)節(jié)病和主要致 殘因素之一。在全世界約為0.5%-1.0%，RA的發(fā)病在我國約為0.4%。RA可發(fā)生于任何 年齡，隨著年齡的增長，發(fā)病率也隨之增高。女性高發(fā)年齡為45-55歲，性別與RA發(fā)病關(guān)系 密切，男女之比約1: 3。RA是一種病因尚未明了的慢性全身性炎癥性疾病，以慢性、對稱性、 多滑膜關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)，屬于自身免疫炎性疾病。患者常以手部或腕 部疼痛及腫脹（特別是腕背部的腫脹）為首發(fā)癥狀，癥狀持續(xù)不緩解，普通的對癥治療雖可 以緩解癥狀，但常常由于用藥不規(guī)則或不足量而導(dǎo)致癥狀反復(fù)。病情進(jìn)展時可以出現(xiàn)明顯 的晨僵，通常可達(dá)1小時以上，并不斷加重；同時出現(xiàn)一定的關(guān)節(jié)功能障礙。
[0003]TNF是一種在炎癥和免疫應(yīng)答中自然出現(xiàn)的細(xì)胞因子。研究發(fā)現(xiàn)在RA患者的滑膜 液中，TNF水平升高，并在病理性炎癥和關(guān)節(jié)破壞方面起重要作用。目前治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 的生物藥物有阿達(dá)木單抗，是TNF-a的單克隆抗體。臨床研究表明阿達(dá)木單抗與甲氨蝶呤 合用，用于治療：對改善病情抗風(fēng)濕藥（DMARDs)，包括甲氨蝶呤療效不佳的成年中重度活 動性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者。阿達(dá)木單抗與甲氨蝶呤聯(lián)合用藥，可以減緩患者關(guān)節(jié)損傷的進(jìn)展 (X線顯示），并且可以改善身體機(jī)能。與傳統(tǒng)的藥物相比，這類藥物的療效強(qiáng)且持久，能有 效緩解疾病癥狀、影像學(xué)進(jìn)展及功能水平，且安全性良好，適用于各種類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者。 但是有阿達(dá)木單抗是大分子蛋白質(zhì)。長期注射治療，一方面會引起過敏反應(yīng)；另一方面，患 者體內(nèi)會產(chǎn)生大量抗體，會中和阿達(dá)木單抗的作用，導(dǎo)致治療無效。
[0004] 小分子蛋白質(zhì)或多肽就不容易誘發(fā)免疫變態(tài)反應(yīng)，以及中和反應(yīng)。因此，小分子TNF抑制多肽就能解決這一問題。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0005] 本發(fā)明目的是針對現(xiàn)有TNF拮抗劑的特點，設(shè)計一種分子量小的TNF多肽拮抗劑， 可以避免產(chǎn)生抗原反應(yīng)，更加適用于臨床的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明技術(shù)方案是提供一種腫瘤壞死因子抑制多肽，其序列為 RINDISHTQSVSSKQKVTG，及在治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用?？赏ㄟ^多種給藥方 式治療和預(yù)防類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥 如藥丸、膠囊等，鼻噴劑等。
[0007] 有益結(jié)果：
[0008] 本發(fā)明中的腫瘤壞死因子抑制多肽序列RINDISHTQSVSSKQKVTG，可以靶向抑制TNF，抑制腫瘤壞死因子受體產(chǎn)生的生理或病理的效應(yīng)，達(dá)到預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的 效果。
[0009] 發(fā)明人經(jīng)過大量實驗獲知腫瘤壞死因子抑制多肽能夠抑制佐劑型大鼠類風(fēng)濕關(guān) 節(jié)炎和DBA/1小鼠膠原型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)展，體內(nèi)實驗證明具有顯著的治療類風(fēng)濕型 關(guān)節(jié)炎的效果。說明本發(fā)明設(shè)計的腫瘤壞死因子抑制多肽科學(xué)、合理、可行、有效，能作為治 療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物。
【具體實施方式】
[0010] 實施例1
[0011] 腫瘤壞死因子抑制多肽在膠原誘導(dǎo)小鼠關(guān)節(jié)炎動物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用
[0012] 構(gòu)建膠原型小鼠關(guān)節(jié)炎動物模型，研究腫瘤壞死因子抑制多肽對小鼠膠原誘導(dǎo)性 關(guān)節(jié)炎（collageninducedarthritis，CIA)的治療作用。采用小鼠作為受試動物，SPF 級DBA/1小鼠60只（由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司（Sino-BritishSIPPRLab. AnimalLtd)提供，動物生產(chǎn)許可證號碼：SCXK(滬）2008-0016)，雄性，7-8周齡，體重為 18-22g，隨機(jī)分成6組，分別是正常對照組，模型對照組，多肽低中高3個劑量組（0. 4,0. 8， 1.6mg/kg)和陽性藥對照組（甲氨蝶呤2mg/kg)。除正常組外，第0天各實驗組建立小鼠 CIA模型，方法是雞軟骨II型膠原（cII)用0.lmol/1醋酸溶解成4mg/ml的溶液，于4°C冰 箱過夜。實驗當(dāng)天用II型膠原與含4mg/mlMyeobaeteriumtuberculosisstrainH37Rv的 完全弗氏佐劑（CFA)等體積充分乳化，待DBA/1小鼠麻醉后，于其尾部皮內(nèi)每只注射乳化劑 50y1進(jìn)行致敏，21d后用4mg/ml的II型膠原（cII)與不完全弗氏佐劑（IFA)等體積充分 乳化后以相同劑量的乳化劑于尾部進(jìn)行再次免疫。造模第30d起皮下注射給藥：多肽的3 個劑量組（〇. 4,0. 8,1. 6mg/kg):每日兩次，連續(xù)10天；陽性藥對照組（甲氨蝶呤2mg/kg): 每五天一次，連續(xù)3次；正常對照組和模型對照組（生理鹽水）：連續(xù)10天。分別于造模后 第40天關(guān)節(jié)評分、分別檢測左右后足足踝直徑來觀察藥物對小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎的影響。
[0013] 腫瘤壞死因子抑制多肽在膠原誘導(dǎo)小鼠關(guān)節(jié)炎動物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用具體 結(jié)果如下：腫瘤壞死因子抑制多肽對小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腫脹度率的影響，陽性對照組、 腫瘤壞死因子抑制多肽高、中、低劑量組關(guān)節(jié)腫脹度率與模型組比較，均有極顯著性差異 (P〈0. 01)實驗結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。腫瘤壞死因子抑制多肽對小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎足爪腫脹 度率的影響，陽性對照組、腫瘤壞死因子抑制多肽高、中、低劑量組足爪腫脹度率與模型組 比較，均有極顯著性差異（P〈〇. 01)，實驗結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。多肽對膠原型關(guān)節(jié)炎小鼠關(guān) 節(jié)評分的影響，多肽低、中、高劑量組四肢評分顯著低于模型對照組（P< 0.01)，與模型對 照組比較極顯著性差異，實驗結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0014] 表1腫瘤壞死因子抑制多肽對膠原型關(guān)節(jié)炎的影響（means土SD)
[0015] ? *P〈0. 05 ;#P〈0. 01 (和模型組比較）
[0016]
[0017] 結(jié)論：腫瘤壞死因子抑制多肽對小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎具有治療作用。
[0018] 實施例2
[0019] 腫瘤壞死因子抑制多肽對佐劑型大鼠關(guān)節(jié)炎動物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用
[0020] 構(gòu)建佐劑型大鼠關(guān)節(jié)炎動物模型，研究多肽對佐劑性關(guān)節(jié)炎（Adjuvant arthritis，AA)大鼠的治療作用。采用大鼠作為受試動物，SPF級SD大鼠60只（由上海西 普爾-必凱實驗動物有限公司（Sino-BritishSIPPRLab.AnimalLtd)提供，動物生產(chǎn)許 可證號碼：SCXK(滬）2008-0016)，雄性，體重為140g-160g，隨機(jī)分成6組，分別是正常對照 組，模型對照組，腫瘤壞死因子抑制多肽低中高3個劑量組（0. 2,0. 4,0. 8mg/kg)和陽性藥 對照組（甲氨蝶呤lmg/kg)。除正常組外，第0天各實驗組建立大鼠AA模型，方法是在大鼠 的左側(cè)后足足跎注射含滅活的結(jié)核分枝桿菌（H37RA，10mg/ml)完全弗氏佐劑0.lml造成大 鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型。造模第10天起皮下注射給藥：多肽的3個劑量組（0. 2,0. 4,0. 8mg/ kg):每日兩次，連續(xù)10天；陽性藥對照組（甲氨蝶呤lmg/kg):每五天一次，連續(xù)3次；正常 對照組和模型對照組（生理鹽水）：連續(xù)10天。分別于造模后第21天關(guān)節(jié)評分、分別檢測 左右后足足踝直徑來觀察藥物對大鼠佐劑型關(guān)節(jié)炎的影響。
[0021] 多肽在佐劑性大鼠關(guān)節(jié)炎動物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用，具體結(jié)果如下：腫瘤壞死 因子抑制多肽對大鼠原發(fā)性關(guān)節(jié)炎左后足踝直徑的影響，大鼠陽性對照組、腫瘤壞死因子 抑制多肽的低、中、高劑量組左后足踝直徑與模型組比較，有極顯著性差異（P〈〇. 01);腫瘤 壞死因子抑制多肽對大鼠繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎右后足踝直徑的影響，大鼠陽性對照組、腫瘤壞死 因子抑制多肽低、中、高劑量組右后足踝直徑與模型組比較，有顯著性差異（P〈〇. 05)。腫瘤 壞死因子抑制多肽對佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)評分的影響，多肽低、中、高劑量組四肢評分顯 著低于模型對照組（P< 〇. 05)，與模型對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0022] 表2腫瘤壞死因子抑制多肽對佐劑型關(guān)節(jié)炎的影響（means土SD)
[0023]
[0025] ? *P〈0. 〇5 ;林P〈0. 01 (和模型組比較）
[0026] 結(jié)論：腫瘤壞死因子抑制多肽對AA大鼠關(guān)節(jié)炎具有治療作用。
【主權(quán)項】
1. 腫瘤壞死因子抑制多肽，其特征在于其序列為RINDISHTQSVSSKQKVTG。2. 權(quán)利要求1的抑制多肽在治療和預(yù)防類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病中的應(yīng)用。3. 根據(jù)權(quán)利要求1-2任一所述抑制多肽的用途，其特征在于：可通過多種給藥方式治 療和預(yù)防類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥 丸、膠囊等，鼻噴劑等。
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有抑制腫瘤壞死因子，能預(yù)防和治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的多肽。其序列為RINDISHTQSVSSKQKVTG是全新的序列，本發(fā)明的有益效益是可用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，具有潛在的新藥開發(fā)價值。
【IPC分類】A61K38/10, C07K7/08, A61P29/00, A61P19/02
【公開號】CN105111284
【申請?zhí)枴緾N201510563846
【發(fā)明人】羅瑞雪
【申請人】蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2015年9月8日