h,J.)高等有機化學（Advanced化ganic化emistry)，第四 版，威利國際科學出版社（Wil巧-Interscience)，美國1992,第895頁中所描述。
[0086] 該亞硫酸氨鹽加合物的一種水溶液可W通過使對應的膚醒與亞硫酸氨鋼（sodium bisulfite/sodiumhy化ogensulfite,NaHS〇3)、亞硫酸氨鐘（KHSO3)的水溶液通過已知方 法進行反應來制備，例如在W0 98/47523;US6, 500, 802;US5, 436, 229;美國化學學會雜 志（J.Am.Chem.Soc.) (1978) 100,1228;有機合成文集（Org.Synth.，Coll.)第 7 卷：361 中 所描述。
[0087] 上述膚醒（或亞硫酸氨鹽加合物）與該蛋白酶的摩爾比可W是至少1:1或1.5:1， 并且它可W小于1000:1，更優(yōu)選小于500:1，甚至更優(yōu)選從100:1至2:1或從20:1至2:1， 或最優(yōu)選，摩爾比是從10:1至2:1。
[0088] 甲酸鹽（例如，甲酸鋼）和甲酸也示出了作為蛋白酶活性抑制劑的良好作用。甲 酸鹽可W與上述蛋白酶抑制劑協(xié)同使用，如在W0 2013/004635中所示。甲酸鹽與上述蛋白 酶抑制劑的組合（如在W0 2013/004635中所披露）通過引用而結合作為一種"蛋白酶抑 制劑"用于在本發(fā)明中使用。甲酸鹽W至少0. 1 %w/w或0. 5%w/w，例如至少1. 0%、至少 1. 2%或至少1. 5%的量存在于該膜中。該鹽的量值典型地低于5%w/w、低于4%或低于 3%。
[0089] 在本發(fā)明的一個實施例中，該蛋白酶為一種金屬蛋白酶而該抑制劑為一種金屬蛋 白酶抑制劑，例如，一種基于蛋白質水解物的抑制劑（例如，如在W0 2008/134343中所描述 的）。
[0090] 水溶性膜
[0091] 水溶性膜、用于其中的任選成分W及制備它們的方法在本領域是眾所周知的。在 一類實施例中，該水溶性膜包括PV0H。PV0H是一種通常通過醇解（通常被稱為水解或皂 化）聚乙酸乙締醋而制備的合成樹脂。完全水解的PVOH，其中幾乎所有乙酸基已被轉化為 醇基，是一種僅在熱水（高于約140°F(60°C))中溶解的強氨鍵鍵合的高度結晶聚合物。 如果在聚乙酸乙締醋水解之后允許剩余足夠數(shù)目的乙酸基，那么該PV0H聚合物被稱作部 分水解的，它的氨鍵鍵合更弱并且結晶度更低并且在冷水（低于約50°F(i(rc))中是可 溶的。一種中間冷/熱水溶性膜可W包括例如中間部分水解的PV0H(例如，具有約94%至 約98%的水解度），并且僅在溫水（例如，在約40°C及W上的溫度下快速溶解）中易溶。完 全和部分水解的PV0H類型都通常被稱為PV0H均聚物，盡管部分水解的類型在技術上是一 種乙締醇-乙酸乙締醋共聚物。
[009引包含于本披露的水溶性膜中的PV0H的水解度可W是約75%至約99%。當水解度 降低時，由樹脂制成的膜將具有降低的機械強度但是在約20°CW下的溫度下更快的溶解。 當水解度增加時，由樹脂制成的膜將傾向于機械強度更高并且熱成型性將傾向于降低?？?W對PV0H的水解度進行選擇W使得該樹脂的水溶性是溫度依賴性的，并且因此由樹脂、相 容性試劑W及另外的成分制成的膜的溶解度也受到影響。在一類實施例中，該膜是冷水溶 性的。一種冷水溶性膜（在低于l0°C的溫度下可溶于水中）可W包括水解度在約75%至 約90%范圍內、或在約80%至約90%范圍內、或在約85%至約90%范圍內的PV0H。在另一 類實施例中，該膜是熱水溶性的。一種熱水溶性膜（在至少約6(TC的溫度下可溶于水中） 可W包括水解度為至少約98%的PV0H。
[0093] 除了PV0H之外或在PV0H的替代方案中，其他所使用的成膜樹脂可包括但不限 于改性的聚乙締醇、聚丙締酸醋、水溶性丙締酸脂共聚物、聚丙締酸醋、聚丙締酷胺、聚乙 締化咯燒酬、普魯蘭，水溶性天然聚合物包括但不限于瓜爾膠、黃原膠、角叉菜膠、W及淀 粉，水溶性聚合物衍生物包括但不限于乙氧基化的淀粉和徑丙基化的淀粉、聚（丙締酷胺 基-2-甲基丙烷橫酸鋼）、聚馬來酸單甲醋、其共聚物W及上述任何項的組合。在一類實施 例中，該成膜樹脂是一種由乙締醇、乙酸乙締醋W及丙締酷胺基-2-甲基丙烷橫酸鋼組成 的=元共聚物。出人意料地，基于乙締醇、乙酸乙締醋W及丙締酷胺基-2-甲基丙烷橫酸鋼 的=元共聚物的水溶性膜已經展示出高百分比的酶回收。
[0094] 水溶性樹脂可W按任何合適的量被包括在該水溶性膜中，例如，在約35wt%至約 90wt%范圍內的量。該水溶性樹脂的量與所有酶、酶穩(wěn)定劑和輔助添加劑的組合量相比的 優(yōu)選重量比可W是任何適合的比率，例如在約0. 5至約5、或約1至約3、或約1至約2范圍 內的比率。
[0095] 用于在于此描述的膜中使用的水溶性樹脂（包括，但不限于PV0H樹脂）可W由對 于所希望的膜特性而言適合的任何粘度來表征，任選地在約5. 0至約30.OcP、或約10.OcP 至約25cP范圍內的粘度。PV0H樹脂的粘度通過使用具有化適配器的布氏度rookfield) LV型粘度計來測量新制備的溶液而確定，如在英國標準ENISO15023-2:2006附錄E布氏 測試法中所描述的。在20°C下闡述4%聚乙締醇水溶液的粘度是國際慣例。在此WcP指定 的所有PV0H粘度應被理解為指的是在20°C下4%聚乙締醇水溶液的粘度，除非另外說明。
[0096] 本領域中眾所周知的是，PV0H樹脂的粘度與同一PV0H樹脂的重量平均分子量 (1擊11')相關，并且該粘度通常被用作^而1，的代理。因此，該水溶性樹脂的重量平均分子量任選 地可W在約35, 000至約190, 000、或約80, 000至約160, 000的范圍內。該樹脂的分子量只 需要足w使得它被適宜技術模制形成塑料薄膜即可。
[0097] 根據(jù)本披露的水溶性膜可W例如W適合于其預期目的的量包括其他任選添加劑 成分，包括但不限于，增塑劑、表面活性劑、消泡劑、成膜劑、防粘連劑、內脫模劑、抗黃變劑 W及其他功能性成分。
[0098]水被認為是對于PV0H和其他聚合物而言一種非常有效的增塑劑，然而，水的揮發(fā) 性使得它的效用受限，因為聚合物膜需要對多種環(huán)境條件（包括低的和高的相對濕度）具 有至少一些耐受性（穩(wěn)健性）。甘油的揮發(fā)性比水小得多，并且已經被很好地確立為對于 PV0H和其他聚合物而言一種有效的增塑劑。如果在膜配制品中所使用的水平太高，甘油或 其他運種液態(tài)增塑劑它們自身可W引起表面"出汗（sweating)"和油膩。運在膜中可W導 致W下問題，例如給消費者的手W不可接受的觸感，并且如果沒有W-定的方式（例如，表 面撒粉）減輕出汗，甚至會將膜阻斷在漉上或成堆薄片中。運可W表征為過塑化。然而，如 果添加至膜的增塑劑太少，該膜對很多最終用途可能缺乏足夠的延展性和柔性，例如被轉 化成最終使用類型，例如袋。
[0099]用于在本披露的水溶性膜中使用的增塑劑包括但不限于山梨糖醇、甘油、雙甘油、 丙二醇、乙二醇、二甘醇、S甘醇、四甘醇、聚乙二醇（高達400MW)、2-甲基-1，3-丙二醇、乳 酸、甘油一乙酸醋、=乙酸甘油醋、巧樣酸=乙醋、1,3-下二醇、=徑甲基丙烷（TMP)、聚酸 =醇及其組合。如上所述，多元醇通?？捎米髟鏊軇?。增塑劑使用越少，膜可能變得越脆， 而增塑劑使用越多，膜可能失去拉伸強度。增塑劑可W按例如在約25p虹至約50地r，或從 約30p虹至約45地r，或從約3化虹至約4化虹范圍內的量被包括在該水溶性膜中。
[0100] 用于在水溶性膜中使用的表面活性劑在本領域是眾所周知的。任選地，包括表面 活性劑W在誘鑄時輔助樹脂溶液的分散。用于本披露的水溶性膜的適合的表面活性劑包 括但不限于二烷基橫基班巧酸醋、甘油和丙二醇的乳酸化脂肪酸醋、脂肪酸乳酷醋、烷基硫 酸鋼、聚山梨醋20、聚山梨醋60、聚山梨醋65、聚山梨醋80、烷基聚氧乙締酸、卵憐脂、甘油 和丙二醇的乙酷化脂肪酸醋、月桂基硫酸鋼、脂肪酸乙酷化醋、肉豆違基二甲基氧化胺、= 甲基牛脂烷基氯化錠、季錠化合物、其鹽W及上述任何項的組合。表面活性劑太少有時可能 導致膜具有孔，而表面活性劑太多可能導致該膜由于存在于膜表面上過量的表面活性劑而 具有油膩或油滑感。因此，表面活性劑可W按例如小于約化虹，例如小于約Iphr、或小于約 0. 5p虹的量被包括在該水溶性膜中。
[0101] 考慮使用的一種類型的輔助成分是消泡劑。消泡劑可W有助于聚結泡沫氣泡。用 于在根據(jù)本披露的水溶性膜中使用的適合的消泡劑包括但不限于疏水性二氧化娃，例如細 粒度的二氧化娃或鍛制二氧化娃，包括化amBias愧)消泡劑（可獲得自愛墨瑞得高性能材 料公司（血eraldPerformanceMaterials))，包括化日111 Blast坂 327、化日111 Blast飯UVD、 化日111及 1泌據(jù)j IGSJoamBlast⑥SGgjoamBlas愧）SSSJoamBlast⑧SgOJoamB-laS備 332、化amBlast?349、化amBlast?550W及化am銳泌㈱339,它們是專有非礦物油消泡 劑。在實施例中，可W按0. 5p虹或更少的量使用消泡劑，例如0. 05地r、0. 04地r、0. 03地r、 0. 0化虹或0. 01地r。優(yōu)選地，為了避免應力致白，將避免顯著量的二氧化娃。
[0102] 用于制備水溶性物品（包括膜）的方法包括誘鑄、吹塑、擠出或吹制擠出，如本領 域中已知的。一類考慮的實施例由在此描述的水溶性膜通過誘鑄形成表征，例如通過將在 此描述的成分與水混合w產生水性混合物（例如具有任選分散的固體的溶液），向表面施 用該混合物，并且干燥除去水W產生膜。類似地，可通過干燥該混合物，同時將其局限為所 希望的形狀W形成其他組合物。
[0103] 在一類考慮的實施例中，通過誘鑄水溶性混合物形成該水溶性膜，其中該水溶性 混合物根據(jù)W下步驟制備：
[0104] (a)提供水溶性樹脂、水W及任何任選添加劑（排除增塑劑）的一種混合物；
[0105] 化）煮沸混合物30分鐘；
[0106] (C)將混合物在烘箱中在至少40°C的溫度下脫氣；任選地在40°C至70°C的范圍 內，例如約65°C;
[0107] (d)在65°C或更低的溫度下向混合物中添加一種或多種酶、增塑劑W及另外的 水；并且
[010引 （e)在無滿旋的情況下攬拌混合物，直到混合物的顏色和稠度看起來大體上一致； 任選地持續(xù)在30分鐘至90分鐘的范圍內的一段時間，任選地至少1小時；或在盡可能靠近 誘鑄膜時添加一些或全部酶，例如，恰在誘鑄膜之前通過使用在線混合器/靜態(tài)混合器將 一種或多種酶溶液添加至膜溶液，由此盡可能多地降低酶在溶液中的儲存期；并且 [010引 訊在攬拌的時間段之后迅速誘鑄混合物（例如，在4小時、或2小時、或1小時、 或甚至幾分鐘內）。
[0110] 如果過早地將酶添加至混合物（例如，與輔助添加劑或樹脂一起），酶活性可能降 低。不旨在受任何具體理論的束縛，據(jù)信將具有酶的混合物煮沸導致酶變性并且在溶液中 儲存延長的時間段同樣導致酶活性降低。
[0111] 在一類實施例中，在中度至溫和條件下通過迅速干燥膜使得根據(jù)本披露的水溶性 膜保持高的酶活性。如在此所用的，迅速干燥是指小于24小時的干燥時間，任選地小于12 小時、任選地小于8小時、任選地小于2小時、任選地小于1小時、任選地小于45分鐘、任選 地小于30分鐘、任選地小于20分鐘、任選地小于10分鐘，例如在約6分鐘至約10分鐘或 8分鐘的范圍內。如在此所用的，中度至溫和條件是指低于170°F(77°C)的干燥溫度，任 選地在約150°F至約170°F(約66°C至約77°C)的范圍內，例如，165。F(74°C)。隨著 干燥溫度增加，酶傾向于越快變性，而隨著干燥溫度降低，干燥時間增加，由此使酶在延長 的時間段內暴露在溶液中。
[0112] 該膜有用于產生一種包W包含一種組合物，例如，衣物洗涂或餐具洗涂組合物，由 此形成一種袋。在此描述的膜還可用于制備一種具有兩個或更多個隔室的包，其由相同的 膜或者結合其他聚合材料的膜制成。另外的膜可W是例如通過誘鑄、吹塑、擠出或吹制擠出 相同或者不同的聚合材料而獲得的，如本領域中已知的。在一個類型的實施例中，適于用作 另外的膜的聚合物、共聚物或其衍生物選自聚乙締醇、聚乙締化咯燒酬、聚環(huán)氧燒、聚丙締 酸、纖維素、纖維素酸、纖維素醋、纖維素酷胺、聚乙酸乙締醋、聚簇酸和鹽、聚氨基酸或膚、 聚酷胺、聚丙締酷胺、馬來酸/丙締酸的共聚物、多糖（包括淀粉和明膠）、天然膠（例如黃 原膠和角叉菜膠）。例如，聚合物可W選自聚丙締酸醋和水溶性丙締酸醋共聚物、甲基纖維 素、簇甲基纖維素鋼、糊精、乙基纖維素、徑乙基纖維素、徑丙基甲基纖維素、麥芽糊精、聚甲 基丙締酸醋及其組合，或選自聚乙締醇、聚乙締醇共聚物和徑丙基甲基纖維素（HPMC)及其 組合。
[0113] 本披露的袋和/或包包括至少一個密封的隔室。因此，運些袋可W包括單個隔室 或多個隔室。運些袋可W具有含酶和不含酶的區(qū)域。在包括多個隔室的實施例中，每個隔室 可W包含相同的和/或不同的組合物。進而，運些組合物可W采取任何適合的形式，包括但 不限于，液體、固體及其組合（例如，懸浮在液體中的固體）。在一些實施例中，運些袋包括 第一、第二和第=隔室，其中每一個隔室分別包含一種不同的第一、第二和第=組合物。在 一些實施例中，如描述于EP2258820中，運些組合物可W是視覺上不同的。
[0114] 多隔室袋和/或包的運些隔室可W具有一個或多個相同的或不同的尺寸和/或體 積。本發(fā)明多隔室袋的運些隔室可W是分開的或W任何適合方式結合的。在一些實施例中， 該第二和/或第=和/或隨后的隔室疊加在該第一隔室上。在一個實施例中，該第=隔室 可W疊加在該第二隔室上，該第二隔室進而W-種夾層構型疊加在該第一隔室上。可替代 地，該第二和第=隔室可W疊加在該第一隔室上。然而，還可W同樣地設想的是，該第一、第 二和任選地第=和隨后的隔室可W按并排的關系相互附接。運些隔室可W被包裝成一串， 每個隔室通過穿孔線是各自地可分開的。因此，每個隔室可W被終端用戶從該串的剩余部 分單獨地撕去。
[0115] 在一些實施例中，多隔室袋和/或包包括=個隔室，其由一個大的第一隔室和兩 個較小的隔室組成。較小的第二和第=隔室疊加在大的第一隔室上。對運些隔室的尺寸和 幾何結構進行選擇，W使得此安排是可實現(xiàn)的。運些隔室的幾何結構可W是相同或不同的。 在一些實施例中，與該第一隔室相比，該第二和任選地第=隔室各自具有一個不同的幾何 結