干細胞培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及及干細胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種干細胞培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002]諸多研究表明干細胞不僅可以自我更新，在條件合適的情況下能分化成其他功能細胞，因此干細胞有望成為治療人類疑難疾病的有效手段。然而，干細胞在正常成體組織中含量甚微，在體外如何快速擴增與培養(yǎng)干細胞培養(yǎng)是研究干細胞的作用機制及探索其在治療人類疾病治療方法的重要技術(shù)。
[0003]干細胞盡量含量甚微，但廣泛分布于哺乳動物的各個組織器官，這些組織或器官包括但不局限于骨髓、臍帶、脂肪組織、腦組織、視網(wǎng)膜、心臟、肝臟、肺以及皮膚等。大量研究表明，這些低含量的干細胞在體外可以通過適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM行進一步擴增，最常規(guī)的一種干細胞培養(yǎng)基就是添加有10%胎牛血清的培養(yǎng)基。然而，采用這種培養(yǎng)基培養(yǎng)的干細胞，不僅生長比較緩慢，而且傳遞次數(shù)超過5代之后其分化成功能細胞的潛能大大降低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種干細胞培養(yǎng)基。
[0005]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:
[0006]干細胞培養(yǎng)基，包括改良DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑，所述添加劑包括
[0007]碳酸氫鈉400-600 μ g/ml、氨基酸螯合砸8_20ng/ml、重組人胰島素生長因子10-30ng/ml、重組人堿性成纖維細胞生長因子80_120ng/ml、重組人乳鐵蛋白7-13 μ g/ml,抗壞血酸50-70 μ g/ml、重組人血小板衍生生長因子3-7 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細胞生長因子l_7ng/ml、二十八燒醇0.1-10 μ g/ml、聚乙稀醇0.1-10 μ g/ml、聚乙稀卩比略燒酮0.1-10 μ g/ml、重組人表皮生長因子1_10 μ g/ml。
[0008]優(yōu)選地，所述改良DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)、維生素和營養(yǎng)元素。
[0009]優(yōu)選地，所述維生素包括維生素C 1-50 μ g/ml，維生素B族30-100 μ g/ml，維生素E 10-100 μg/mL0
[0010]優(yōu)選地，所述營養(yǎng)元素包括L-谷氨酰胺l_5mg/ml，蛋氨酸錳Ι-lOmg/ml，氯化鋅 l_5mg/ml、氨基酸螯合鎂 l_5mg/ml、砸蛋氨酸 1.5-5.5mg/ml、植酸酶 0.5-0.75mg/ml、P比啶酸絡(luò)0.055-0.065mg/ml、碘酸I丐0.1-0.3mg/ml、賴氨酸l_6mg/ml、三氯化六氨合鈷0.05-0.065mg/ml、蛋白錯 0.55-0.75mg/ml、鵬酵母 2_6mg/ml、氣化銅 0.1-lmg/ml。
[0011]優(yōu)選地，所述添加劑包括碳酸氫鈉400 μ g/ml、氨基酸螯合砸8ng/ml、重組人胰島素生長因子10ng/ml、重組人堿性成纖維細胞生長因子80ng/ml、重組人乳鐵蛋白7 μ g/ml,抗壞血酸50 μ g/ml、重組人血小板衍生生長因子3 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細胞生長因子lng/ml、二十八燒醇0.1 μ g/ml、聚乙稀醇0.1 μ g/ml、聚乙稀P比略燒酮0.1 μ g/ml、重組人表皮生長因子I μ g/ml ο
[0012]優(yōu)選地，所述添加劑包括碳酸氫鈉500 μ g/ml、氨基酸螯合砸14ng/ml、重組人胰島素生長因子20ng/ml、重組人堿性成纖維細胞生長因子100ng/ml、重組人乳鐵蛋白10 μ g/ml、抗壞血酸60 μ g/ml、重組人血小板衍生生長因子5 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細胞生長因子4ng/ml、二十八烷醇5.05 μ g/ml、聚乙烯醇5.05 μ g/ml、聚乙烯吡咯烷酮5.05 μ g/ml、重組人表皮生長因子5.5 μ g/ml。
[0013]優(yōu)選地，所述添加劑包括碳酸氫鈉600 μ g/ml、氨基酸螯合砸20ng/ml、重組人胰島素生長因子30ng/ml、重組人堿性成纖維細胞生長因子120ng/ml、重組人乳鐵蛋白13 μ g/ml、抗壞血酸70 μ g/ml、重組人血小板衍生生長因子7 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細胞生長因子7ng/ml、二十八燒醇10 μ g/ml、聚乙稀醇10 μ g/ml、聚乙稀卩比略燒酮10 μ g/ml、重組人表皮生長因10 μ g/ml。
[0014]本發(fā)明具有以下有益效果:
[0015]基能夠快速擴增干細胞同時又不影響干細胞的潛能，干細胞的擴增速度較常規(guī)培養(yǎng)基提高3-5倍，而且能用于培養(yǎng)多種組織的干細胞，具有極佳的適用性，所培養(yǎng)的干細胞分化能力強，可分化成多種功能細胞，具有很高的科研和醫(yī)學(xué)應(yīng)用價值，培養(yǎng)基成分明確，品質(zhì)穩(wěn)定，使得培養(yǎng)的干細胞在移植后不容易產(chǎn)生人體排斥反應(yīng)。
【具體實施方式】
[0016]為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0017]實施例1
[0018]一種干細胞培養(yǎng)基，包括DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)、維生素C lyg/ml，維生素B族30 μ g/ml,維生素E 10 μ g/mL、L-谷氨酰胺lmg/ml，蛋氨酸猛lmg/ml，氯化鋅lmg/ml、氨基酸螯合鎂lmg/ml、砸蛋氨酸1.5mg/ml、植酸酶0.5mg/ml、P比啶酸絡(luò)0.055mg/ml、碘酸I丐0.lmg/ml、賴氨酸lmg/ml、三氯化六氨合鈷0.05mg/ml、蛋白鍺0.55mg/ml、碘酵母2mg/ml、氯化銅0.lmg/ml、碳酸氫鈉400 μ g/ml、氨基酸螯合砸8ng/ml、重組人胰島素生長因子10ng/ml、重組人堿性成纖維細胞生長因子80ng/ml、重組人乳鐵蛋白7 μ g/ml、抗壞血酸50 μ g/ml、重組人血小板衍生生長因子3 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細胞生長因子lng/ml、二十八燒醇0.1 μ g/ml、聚乙稀醇0.1 μ g/ml、聚乙稀P比略燒酮0.1 μ g/ml、重組人表皮生長因子 I μ g/ml ο
[0019]實施例2
[0020]一種干細胞培養(yǎng)基，包括DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)、維生素C 50 μ g/ml，維生素B族100 μ g/ml，維生素 E 100 μ g/mL、L-谷氨酰胺 5mg/ml，蛋氨酸猛 10mg/ml，氯化鋅 5mg/ml、氨基酸螯合鎂5mg/ml、砸蛋氨酸5.5mg/ml、植酸酶0.75mg/ml、[!比啶酸絡(luò)0.065mg/ml、碘酸I丐0.3mg/ml、賴氨酸6mg/ml、三氯化六氨合鈷0.065mg/ml、蛋白鍺0.75mg/ml、碘酵母6mg/ml、氯化銅lmg/ml、碳酸氫鈉500 μ g/ml、氨基酸螯合砸14ng/ml、重組人胰島素生長因子20ng/ml、重組人堿性成纖維細胞生長因子100ng/ml、重組人乳鐵蛋白10 μ g/ml、抗壞血酸60 μ g/ml、重組人血小板衍生生長因子5 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細胞生長因子4ng/ml、二十八烷醇5.05 μ g/ml、聚乙烯醇5.05 μ g/ml、聚乙烯吡咯烷酮5.05 μ g/ml、重組人表皮生長因子5.5 μ g/ml。
[0021]實施例3
[0022]一種干細胞培養(yǎng)基，包括DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)、維生素C 25.5 μ g/ml，維生素B族65 μ g/ml，維生素E 55 μ g/mL、L_谷氨酰胺3mg/ml，蛋氨酸猛5.5mg/ml，氯化鋅3mg/ml、氨基酸螯合鎂3mg/ml、砸蛋氨酸3.5mg/ml、植酸酶0.625mg/ml、[!比啶酸絡(luò)0.06mg/ml、碘酸I丐0.2mg/ml、賴氨酸3.5mg/ml、三氯化六氨合鈷0.0575mg/ml、蛋白鍺0.65mg/ml、碘酵母4mg/ml、氯化銅0.55mg/ml、碳酸氫鈉600 μ g/ml、氨基酸螯合砸20ng/ml、重組人胰島素生長因子30ng/ml、重組人堿性成纖維細胞生長因子120ng/ml、重組人乳鐵蛋白13 μ g/ml、抗壞血酸70 μ g/ml、重組人血小板衍生生長因子7 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細胞生長因子7ng/ml、二十八烷醇10 μ g/ml、聚乙烯醇10 μ g/ml、聚乙烯吡咯烷酮10 μ g/ml、重組人表皮生長因10 μ g/mlο
[0023]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以作出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。
【主權(quán)項】
1.干細胞培養(yǎng)基，其特征在于，包括改良DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑，所述添加劑包括 碳酸氫鈉400-600 μ g/ml、氨基酸螯合砸8_20ng/ml、重組人胰島素生長10_30ng/ml、重組人堿性成纖維細胞生長因子80-120ng/ml、重組人乳鐵蛋白7_13 μ g/ml、抗壞血酸50-70 μ g/ml、重組人血小板衍生生長因子3_7 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細胞生長因子l_7ng/ml、二十八燒醇0.1-10 μ g/ml、聚乙稀醇0.1-10 μ g/ml、聚乙稀R比略燒酮0.1-10 μ g/ml、重組人表皮生長因子1_10 μ g/ml。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述改良DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)、維生素和營養(yǎng)元素。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的干細胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述維生素包括維生素C1-50 μ g/ml，維生素 B 族 30-100 μ g/ml，維生素 E 10-100 μ g/mL。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的干細胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述營養(yǎng)元素包括L-谷氨酰胺l-5mg/ml，蛋氨酸猛l-10mg/ml，氯化鋅l_5mg/ml、氨基酸螯合鎂l_5mg/ml、砸蛋氨酸1.5-5.5mg/ml、植酸酶 0.5-0.75mg/ml、吡啶酸鉻 0.055-0.065mg/ml、碘酸鈣 0.1-0.3mg/ml、賴氨酸l_6mg/ml、三氯化六氨合鈷0.05-0.065mg/ml、蛋白鍺0.55-0.75mg/ml、碘酵母2_6mg/ml、氯化銅 0.1-lmg/ml。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述添加劑包括碳酸氫鈉400 μ g/ml、氨基酸螯合砸8ng/ml、重組人胰島素生長因子10ng/ml、重組人堿性成纖維細胞生長因子80ng/ml、重組人乳鐵蛋白7 μ g/ml、抗壞血酸50 μ g/ml、重組人血小板衍生生長因子3 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細胞生長因子lng/ml、二十八烷醇0.lyg/ml、聚乙烯醇0.1 μ g/ml、聚乙稀卩比略燒酮0.1 μ g/ml、重組人表皮生長因子I μ g/ml。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述添加劑包括碳酸氫鈉500 μ g/ml、氨基酸螯合砸14ng/ml、重組人胰島素生長因子20ng/ml、重組人堿性成纖維細胞生長因子100ng/ml、重組人乳鐵蛋白10 μ g/ml、抗壞血酸60 μ g/ml、重組人血小板衍生生長因子5 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細胞生長因子4ng/ml、二十八燒醇5.05 μ g/ml、聚乙稀醇5.05 μ g/ml、聚乙烯吡咯烷酮5.05 μ g/ml、重組人表皮生長因子5.5 μ g/ml。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述添加劑包括碳酸氫鈉600 μ g/ml、氨基酸螯合砸20ng/ml、重組人胰島素生長因子30ng/ml、重組人堿性成纖維細胞生長因子120ng/ml、重組人乳鐵蛋白13 μ g/ml、抗壞血酸70 μ g/ml、重組人血小板衍生生長因子7 μ g/ml、重組人血管內(nèi)皮細胞生長因子7ng/ml、二十八烷醇10 μ g/ml、聚乙烯醇10 μ g/ml、聚乙烯吡咯烷酮10 μ g/ml、重組人表皮生長因10 μ g/ml O
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種干細胞培養(yǎng)基，包括改良DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑，所述添加劑包括碳酸氫鈉、氨基酸螯合硒、重組人胰島素生長因子、重組人堿性成纖維細胞生長因子、重組人乳鐵蛋白、抗壞血酸、重組人血小板衍生生長因子、重組人血管內(nèi)皮細胞生長因子、二十八烷醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、重組人表皮生長因子。本發(fā)明基能夠快速擴增干細胞同時又不影響干細胞的潛能，干細胞的擴增速度較常規(guī)培養(yǎng)基提高3-5倍，而且能用于培養(yǎng)多種組織的干細胞，具有極佳的適用性，所培養(yǎng)的干細胞分化能力強，可分化成多種功能細胞，具有很高的科研和醫(yī)學(xué)應(yīng)用價值，培養(yǎng)基成分明確，品質(zhì)穩(wěn)定，使得培養(yǎng)的干細胞在移植后不容易產(chǎn)生人體排斥反應(yīng)。
【IPC分類】C12N5/0789, C12N5/095, C12N5/0775, C12N5/0735, C12N5/0797, C12N5/074
【公開號】CN105200008
【申請?zhí)枴緾N201510717978
【發(fā)明人】李曉娟, 白瑞櫻, 郭勇, 王歌, 郭直岳, 朱曉謙, 王亞莉
【申請人】新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年10月23日