從柿子中提取小分子量單寧的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物提取技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種從柿子中提取小分子量單寧的方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 柿子（PersimmonDiosp巧roskakiL)果肉中含量豐富的單寧類(lèi)物質(zhì)。研究表明， 柿子總酪具有很強(qiáng)的抗氧化性W及和蛋白質(zhì)結(jié)合能力，具有抑制人淋己細(xì)胞白血病、降血 壓、清除體內(nèi)自由基W及明顯抑制峻蛇、眼鏡蛇、五步蛇毒液中多種酶類(lèi)W及毒素的活性。 目前有報(bào)道稱(chēng)柿子提取物（有效成分為黃酬、=祗類(lèi)和可水解單寧）對(duì)枯草芽抱桿菌表現(xiàn) 出了一定的耐藥性，但耐藥性并不穩(wěn)定。但枯草芽抱桿菌完全不同于變形鏈球菌，且并未見(jiàn) 到柿子單寧可用于抑制變形鏈球菌的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種從柿子中提取小分子量單寧的方法，提取的 小分子量單寧可有效抑制變形鏈球菌，具有很好的防離齒效果。
[0004] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案是從柿子中提取小分子量單寧的方法，包括W下步驟： 陽(yáng)0化]1)將柿子去皮，破碎，加入乙醇提取，將提取液過(guò)濾，取濾液備用；
[0006] 。將濾液濃縮，加入95V%乙醇，放置過(guò)夜，離心取上清液；
[0007] 3)將上清液過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂，先用水洗柱至無(wú)色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗 脫液；
[0008] 4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，過(guò)濾，取濾液通過(guò)截留分子 量為3000~4000的中空纖維膜，收集透過(guò)液備用；
[0009] 5)將上述透過(guò)液通過(guò)截留分子量為500~600的中空纖維膜，收集濃縮液，干燥， 即為小分子量單寧粉末。
[0010] 步驟1)中，乙醇的體積濃度為70~80%，其加入量為柿子重量的10~20倍，在 60~80°C下提取1~3次，每次1~化。 W11] 步驟。中，乙醇的加入量為濃縮液的2~4倍。 陽(yáng)01引步驟如中，水的加入量為浸膏重量的3~5倍。
[0013] 本發(fā)明提取得到的柿子小分子量單寧具有很好的抑制變形鏈球菌的效果，可用于 防離齒。
【具體實(shí)施方式】
[0014] W下具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但不作為對(duì)本發(fā)明的限定。 陽(yáng)〇1引實(shí)施例1
[0016] 1)將柿子去皮，破碎，加入柿子重量的10倍的70v%乙醇，在60°C下提取比，合并 提取液，過(guò)濾，取濾液備用； 陽(yáng)017]。將濾液濃縮，加入95v%乙醇，乙醇的加入量為濃縮液的2倍，放置過(guò)夜，離心 取上清液；
[0018] 3)將上清液過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂，先用水洗柱至無(wú)色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗 脫液；
[0019] 4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，水的加入量為浸膏重量的3 倍，過(guò)濾，取濾液通過(guò)截留分子量為3000~4000的中空纖維膜，收集透過(guò)液備用；
[0020] 5)將上述透過(guò)液通過(guò)截留分子量為500~600的中空纖維膜，收集濃縮液，真空冷 凍干燥，即為小分子量單寧粉末。 陽(yáng)OW 實(shí)施例2
[0022] 1)將柿子去皮，破碎，加入柿子重量的20倍的80v%乙醇，在80°C下提取3次，每 次化，合并提取液，過(guò)濾，取濾液備用；
[002引。將濾液濃縮，加入95v%乙醇，乙醇的加入量為濃縮液的4倍，放置過(guò)夜，離心 取上清液；
[0024]扣將上清液過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂，先用水洗柱至無(wú)色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗 脫液；
[00對(duì) 4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，水的加入量為浸膏重量的5 倍，過(guò)濾，取濾液通過(guò)截留分子量為3000~4000的中空纖維膜，收集透過(guò)液備用；
[00%] 5)將上述透過(guò)液通過(guò)截留分子量為500~600的中空纖維膜，收集濃縮液，真空冷 凍干燥，即為小分子量單寧粉末。
[0027] 實(shí)施例3
[0028] 1)將柿子去皮，破碎，加入柿子重量的15倍的75v%乙醇，在70°C下提取2次，每 次化，合并提取液，過(guò)濾，取濾液備用；
[0029]。將濾液濃縮，加入95v%乙醇，乙醇的加入量為濃縮液的3倍，放置過(guò)夜，離心 取上清液；
[0030]扣將上清液過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂，先用水洗柱至無(wú)色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗 脫液；
[0031] 4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，水的加入量為浸膏重量的4 倍，過(guò)濾，取濾液通過(guò)截留分子量為3000~4000的中空纖維膜，收集透過(guò)液備用；
[0032] 5)將上述透過(guò)液通過(guò)截留分子量為500~600的中空纖維膜，收集濃縮液，真空冷 凍干燥，即為小分子量單寧粉末。 陽(yáng)〇3引對(duì)照實(shí)施例1
[0034] 1)將柿子去皮，破碎，加入柿子重量的15倍的75v%乙醇，在70°C下提取2次，每 次化，合并提取液，過(guò)濾，取濾液備用；
[00對(duì)。將濾液濃縮，加入95v%乙醇，乙醇的加入量為濃縮液的3倍，放置過(guò)夜，離心 取上清液；
[0036] 3)將上清液過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂，先用水洗柱至無(wú)色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗 脫液；
[0037] 4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，真空冷凍干燥，即為小分子量單寧粉末。
[0038] 實(shí)驗(yàn)例（體外抑菌試驗(yàn)）
[0039] I、實(shí)驗(yàn)方法：
[0040] 1)分別取實(shí)施例1~3 W及對(duì)照實(shí)施例1的小分子量單寧粉末Ig粉碎后加IOml 無(wú)菌水配成混合溶液。
[0041] 2)抑菌片的制備：取無(wú)菌并干燥的濾紙片4片，每片分別滴加實(shí)施例1~3W及 對(duì)照實(shí)施例1制成的混合溶液20y1，然后將濾紙片平放于清潔的無(wú)菌平面皿內(nèi)，開(kāi)蓋置溫 箱（37°C)中烤干，或置室溫下自然干燥后備用。陰性對(duì)照組抑菌片的制備：取無(wú)菌干燥濾 紙片，每片滴加無(wú)菌蒸饋水20y1，干燥后備用。
[00創(chuàng)如接種變形鏈球菌：用無(wú)菌棉拭子薩取濃度為5XIO5~5X106C化/ml變形鏈球 菌菌懸液，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板表面均勻涂抹3次，每涂抹一次，平板轉(zhuǎn)動(dòng)60°，最后將 棉拭子繞平板邊緣涂抹一周，蓋好平皿，置室溫干燥5min。 陽(yáng)0創(chuàng) 4)抑菌片貼放海次貼放一個(gè)染菌平板，每個(gè)平板貼放實(shí)施例W及對(duì)照實(shí)施例的 4片抑菌片和1片陰性對(duì)照組抑菌片。用無(wú)菌綴子取樣片貼放于平板表面，各樣片中屯、之間 相距25mmW上，與平板的周緣相距15mmW上。貼放好后，用無(wú)菌綴子輕壓樣片，使其緊貼 于平板表面，蓋好平皿，置于37°C溫箱內(nèi)培養(yǎng)16~1她，用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌環(huán)的直徑（包 括貼片）并記錄，實(shí)驗(yàn)重復(fù)=次。 W44] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0045]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 從柿子中提取小分子量單寧的方法，其特征在于：包括以下步驟： 1) 將柿子去皮，破碎，加入乙醇提取，將提取液過(guò)濾，取濾液備用； 2) 將濾液濃縮，加入95v%的乙醇，放置過(guò)夜，離心，取上清液； 3) 將上清液過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂，先用水洗柱至無(wú)色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液； 4) 將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，過(guò)濾，取濾液通過(guò)截留分子量為 3000~5000的中空纖維膜，收集透過(guò)液備用； 5) 將上述透過(guò)液通過(guò)截留分子量為500~800的中空纖維膜，收集濃縮液，干燥，即為 小分子量單寧粉末。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從柿子中提取小分子量單寧的方法，其特征在于：步驟1) 中，乙醇的體積濃度為70~80%，其加入量為柿子重量的10~20倍，在60~80°C下提取 1~3次，每次1~3h。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從柿子中提取小分子量單寧的方法，其特征在于：步驟2) 中，乙醇的加入量為濃縮液的2~4倍。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從柿子中提取小分子量單寧的方法，其特征在于：步驟3) 中，水的加入量為浸膏重量的3~5倍。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種從柿子中提取小分子量單寧的方法，包括以下步驟：1)將柿子去皮，破碎，加入乙醇提取，將提取液過(guò)濾，取濾液備用；2)將濾液濃縮，加入95V％乙醇，放置過(guò)夜，離心，取上清液；3)將上清液過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂，先用水洗柱至無(wú)色，然后用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；4)將乙醇洗脫液濃縮回收溶劑，得到浸膏，加水溶解，過(guò)濾，取濾液通過(guò)截留分子量為3000～5000的中空纖維膜，收集透過(guò)液備用；5)將上述透過(guò)液通過(guò)截留分子量為500～800的中空纖維膜，收集濃縮液，干燥，即為小分子量單寧粉末。本發(fā)明提取的小分子量單寧具有很好的抑制變形鏈球菌的作用，可用于防齲齒。
【IPC分類(lèi)】C07H13/08, A61P1/02, A61P31/04, C07H1/08
【公開(kāi)號(hào)】CN105218602
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510759408
【發(fā)明人】文繼承, 蔣元勇, 朱昂輝, 雍小軍, 易華, 李麗金
【申請(qǐng)人】桂林茗興生物科技有限公司
【公開(kāi)日】2016年1月6日
【申請(qǐng)日】2015年11月10日