一種橘綠木霉菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種對(duì)辣椒苗期粹倒病具有高枯抗作用的 木霉困。
【背景技術(shù)】
[0002] 辣椒粹倒病是一種主要危害幼苗的病害，其癥狀主要為：出苗前的危害可導(dǎo)致 爛種、死苗；幼苗出±后危害幼苗莖基部，產(chǎn)生水潰狀斑，病部逐漸溢縮呈細(xì)線狀。后期 幼苗倒伏，濕度大時(shí)，病部密生白色棉絮狀物。該病除危害辣椒茄科蔬菜外，瓜類、窩宦、 芹菜、白菜、甘藍(lán)、蘿K洋蔥等蔬菜幼苗均能受害。該病的病原為瓜果腐霉菌Pythium aphanidermatum巧ds. )Fitzp.，屬鞭毛菌亞口真菌，是蔬菜苗期粹倒病的病原菌，該病一直 W來(lái)在蔬菜育苗過(guò)程中經(jīng)常發(fā)生，并對(duì)蔬菜的育苗造成較大危害。
[0003] 為防止該真菌病害，目前通常使用的是化學(xué)農(nóng)藥殺菌劑，在中國(guó)專利 CN01107887. 1中披露了一種組分組成（W重量份數(shù)計(jì)）為；喔枯哇1-20%、惡霉靈1-20%、 銅鹽1-20%、助劑2-10%的復(fù)配農(nóng)藥，同時(shí)防治細(xì)菌性病原和對(duì)由腐霉菌、鑲刀菌引起的 作物苗期病害，其中其對(duì)黃瓜細(xì)菌性葉枯病和番茄細(xì)菌性斑疹病的防治效果可達(dá)85-90% ; 中國(guó)專利CN103109831A中，配制了一種含有化哇離菌醋與咪哇菌麗的殺菌組合物，用W防 治小麥、棉花、葡萄、煙草、草坪、向日葵、攻瑰、馬鈴墓和番茄等各種蔬菜的各種霜霉病、晚 疫病、疫霉病、粹倒病、黑斑病、斑腐病等，該復(fù)配殺菌劑具有明顯的增效作用，延緩了要害 抗藥性的產(chǎn)生，并取得了較好的防治效果。雖然送些藥物在一定程度上擴(kuò)大了藥物的使用 范圍，并增強(qiáng)了藥效，降低了藥劑使用量，但它們?nèi)詫儆诨瘜W(xué)農(nóng)藥，長(zhǎng)期使用對(duì)環(huán)境造成的 污染仍然不可忽視，且采用化學(xué)農(nóng)藥殺菌劑時(shí)各種植物病原菌對(duì)化學(xué)農(nóng)藥產(chǎn)生耐藥性、抗 藥性，增加了防治的難度，甚至造成防治失敗。此外，化學(xué)農(nóng)藥因其不具有選擇性，對(duì)有益的 生物也會(huì)造成威脅。而且，很多化學(xué)農(nóng)藥是不可降解或難于降解的，容易在動(dòng)植物體內(nèi)積累 而造成污染物的富集。
[0004] 生物農(nóng)藥是指利用生物活體或其代謝產(chǎn)物對(duì)害蟲、病原、雜草、線蟲、鼠類等有害 生物進(jìn)行防治的一類農(nóng)藥制劑，或者是通過(guò)仿生合成具有特異作用的農(nóng)藥制劑，主要包括 生物化學(xué)農(nóng)藥（信息素、激素、植物調(diào)節(jié)劑、昆蟲生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑）和微生物農(nóng)藥（真菌、細(xì)菌、 昆蟲病毒、原生動(dòng)物，或經(jīng)遺傳改造的微生物）兩個(gè)部分。
[0005] 我國(guó)生物農(nóng)藥按照成分和來(lái)源可分為微生物活體農(nóng)藥、微生物代謝產(chǎn)物農(nóng)藥、植 物源農(nóng)藥、動(dòng)物源農(nóng)藥四個(gè)部分。按照防治對(duì)象可分為殺蟲劑、殺菌劑、除草劑、殺瞞劑、殺 鼠劑、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等。按照利用對(duì)象而言一般分為直接利用生物活體和利用源于生物 的生理活性物質(zhì)兩大類，前者包括細(xì)菌、真菌、線蟲、病毒及枯抗微生物等，后者包括農(nóng)用抗 生素、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、性信息素、攝食抑制劑、保幼激素和源于植物的生理活性物質(zhì)等。
[0006] 生物農(nóng)藥與化學(xué)農(nóng)藥相比，主要有W下幾個(gè)方面的有點(diǎn)；（1)選擇性強(qiáng)，只對(duì)病蟲 害有作用，一般對(duì)人、畜等比較安全；（2)對(duì)環(huán)境影響小，主要利用了微生物的代謝產(chǎn)物殺 蟲、防病，未添加生態(tài)系統(tǒng)W外的其它物質(zhì)；(3)生產(chǎn)成本低廉，目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)加工生物農(nóng) 藥，主要利用可再生資源。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種產(chǎn)抱量多、高效防治辣椒粹倒病的木霉菌株，W解決 目前防治辣椒粹倒病的化學(xué)農(nóng)藥量多且農(nóng)藥會(huì)對(duì)環(huán)境產(chǎn)生影響的問(wèn)題。
[0008] 本發(fā)明提供的木霉菌株屬于橘綠木霉（Trichodermacitrinoviride)菌株，具有 防治辣椒粹倒病的特性。該菌株于2014年1月14日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員 會(huì)普通微生物中必（CGMCC)，保藏單位地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏號(hào)為 CGMCCNo. 8722O
[0009] 橘綠木霉菌株具有W下性質(zhì)：
[0010] 本發(fā)明橘綠木霉菌株的分生抱子階段為半知菌n，絲抱綱，絲抱目，叢梗抱科，木 霉屬，其有性態(tài)是屬于子囊菌口子囊菌綱。
[0011] 菌株培養(yǎng)特性：
[0012] 本發(fā)明橘綠木霉菌株在PDA培養(yǎng)基上黑暗條件下25°C~35°C培養(yǎng)64小時(shí)，菌落 半徑為60~68mm;40°C培養(yǎng)64小時(shí)，菌落半徑為45mm。在PDA上，大多數(shù)菌株的菌落表面 產(chǎn)生分生抱子處沒有游離的氣生菌絲。分生抱子產(chǎn)生方式多變，2(TC~25C時(shí)幾乎不產(chǎn)生 分生抱子，而35C~4(TC時(shí)產(chǎn)生大量分生抱子。分生抱子呈黃綠色至深綠色，有時(shí)產(chǎn)生黃 色色素；2(TC時(shí)黃色素產(chǎn)量很少，而35C和4(TC時(shí)產(chǎn)量很大；分生抱子簇缺乏，產(chǎn)生的分生 抱子簇細(xì)小，直徑小于0. 5mm。
[0013] 本發(fā)明的橘綠木霉菌株的液體培養(yǎng)法為，在培養(yǎng)瓶中加入培養(yǎng)液并接種抱子懸浮 液，在35C環(huán)境下振蕩培養(yǎng)，4天后便可收獲大量的抱子。在抱子中添加等體積比的娃藻± 抽濾并干燥可長(zhǎng)久保存。
[0014] 菌株微觀形態(tài)特性：
[0015] 參照?qǐng)D1~圖3,本發(fā)明橘綠木霉菌株的分生抱子簇缺乏，即使產(chǎn)生分生抱子簇， 也很細(xì)小，直徑小于0. 5mm。分生抱子梗沒有可育的延伸結(jié)構(gòu)，分生抱子梗主要產(chǎn)生于氣生 菌絲上，是一長(zhǎng)的軸狀結(jié)構(gòu)，至頂均可育。瓶梗單生于主軸上，在第一個(gè)側(cè)向短分支前面，距 離大約為45Um;瓶梗在側(cè)向分枝的頂端行呈縱潤(rùn)狀排列；主軸的寬度為2. 0~3. 2Um，最 寬處的寬度為2. 5~3.Sum,基部寬度為1. 5~2.Sum,長(zhǎng)度與寬度的比例為1. 5~3.1， 母細(xì)胞的寬度為2.0~3.2Um。瓶梗多數(shù)為間生。分生抱子綠色，長(zhǎng)方形至楠圓形，大小 為3. 0~3. 5X2. 0~2.8ym，長(zhǎng)度與寬度比例為1. 4~2. 0,光滑。有的菌株不產(chǎn)生厚垣 抱子，有的則產(chǎn)生大量的厚垣抱子，端生或間生，球形至亞球形，直徑為4. 5~9.2Um。沒有 共無(wú)性階段。
[0016] 系統(tǒng)發(fā)育學(xué)鑒定：
[0017] 通過(guò)PCR任olymerase化ainReaction,多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）對(duì)本發(fā)明橘綠木霉菌株 進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育學(xué)的鑒定，確定橘綠木霉菌株的進(jìn)化關(guān)系。
[0018] 將引物口S4和口S5擴(kuò)增到口S1-5. 8S-口S2區(qū)序列得到的序列段，通過(guò)NCBIGen Bank建立的DNA序列數(shù)據(jù)庫(kù)中數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)，該序列段與橘綠木霉的相似度達(dá)到100%。 [001引ITS序列如下：

[002。提供采用引物Ef728和TenaR擴(kuò)增Tena序列得到的序列段，通過(guò)NCBI Gen Bank建立的DNA序列數(shù)據(jù)庫(kù)中數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)，Tefla序列與棘抱木霉的相似度達(dá)到100%。 [0022]Tefl a序列如下：
[0024]重寄生性
[00巧]木霉菌對(duì)病原菌主要通過(guò)枯抗作用、競(jìng)爭(zhēng)作用、重寄生作用、誘導(dǎo)抗性和促生作用 來(lái)防治粹倒病的發(fā)生。重寄生性是木霉菌對(duì)病原菌的主要作用方式，通過(guò)在橘綠木霉菌株 自身產(chǎn)生的真菌細(xì)胞壁降解酶，如幾了質(zhì)酶、葡聚糖酶等，溶解病原菌細(xì)胞壁并滲透進(jìn)入其 細(xì)胞中形成大量的分枝和有性結(jié)構(gòu)，使病原真菌生長(zhǎng)受抑制而死亡。
[0026] 防治辣椒椒粹倒病的制劑
[0027] 本發(fā)明提供的用于防治辣椒粹倒病的制劑，所述制劑中包括上述的橘綠木霉菌。
[0028] 所述制劑的劑型可為泡騰粒劑、乳油、水分散粉劑、懸乳劑、微乳劑、可溶粉劑、可 濕性粉劑、油劑中的任意一種。
[0029] 優(yōu)選地，所述制劑中還可W包括助劑。
[0030] 所述的助劑可W選自填料、潤(rùn)濕劑