一種石油烴類降解菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及的是一種從采油廢水生化處理池采集的活性污泥中自行富集分離得 到的高效降解石油控類的菌株。本發(fā)明還設(shè)及一種降解石油控類菌株的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 石油的主要成分是各種燒控、環(huán)燒控、芳香控的混合物，可溶于多種有機(jī)溶劑，不 溶于水。石油主要被用作燃油和汽油，也是許多化學(xué)工業(yè)產(chǎn)品如溶劑、化肥、殺蟲劑和塑料 等的原料。石油組分中的多種多環(huán)芳控具有強(qiáng)烈的致"作用，其揮發(fā)性組分能引起人體 的臟器病變。伴隨著我國經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展和對(duì)能源需求的增加，石油的需求量日益增大。在 石油及石油制品的生產(chǎn)運(yùn)輸和使用過程中，不可避免的產(chǎn)生泄露和排放，對(duì)生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生 嚴(yán)重污染并危害人類健康。
[0003] 目前全球石油產(chǎn)量的80%來自內(nèi)陸油田，我國勘探和開發(fā)的油田共有400多個(gè)， 覆蓋地區(qū)面積達(dá)32萬平方千米。石油開采和運(yùn)輸過程中不可避免的產(chǎn)生污染，±壤被石油 污染后會(huì)改變±壤的碳氮比和碳憐比，影響作物對(duì)營養(yǎng)成分的吸收；堵塞±壤空隙使透水 性、透氣性降低，引起根系糜爛；引起±壤微生物群落發(fā)生變化，破壞±壤微生態(tài)環(huán)境，使± 壤生產(chǎn)力降低。治理石油控污染±壤主要有物理、化學(xué)和生物=種方法。物理法焚燒破壞 ±壤結(jié)構(gòu)且造價(jià)昂貴，難W實(shí)施；化學(xué)浸出法所使用的化學(xué)試劑容易造成二次污染，限制了 化學(xué)法的應(yīng)用。上世紀(jì)80年代W來生物修復(fù)石油污染±壤引起人們的關(guān)注，生物修復(fù)是指 利用微生物及其它生物將±壤中的石油降解成二氧化碳和水或其它無害物質(zhì)，從而徹底修 復(fù)被污染±壤，是最具前景的±壤修復(fù)方法，其中篩選和分離高效石油降解菌是生物修復(fù) 技術(shù)的必然要求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種具有良好的石油降解效果且對(duì)鹽度有較強(qiáng)的適應(yīng)能 力的石油控類降解菌。本發(fā)明的目的還在于提供一種石油控類降解菌的應(yīng)用。 陽0化]本發(fā)明的石油控類降解菌命名為不動(dòng)桿菌株AcinetobacterSP.B11，保藏在"中 國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中屯、"，保藏日期為2015年1月6日，登記編號(hào)為 CGMCCNo.10283。保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰路1號(hào)院3號(hào)
[0006] 本發(fā)明的Acinetobactersp.Bll菌株在28°C生長良好，單菌落呈圓形，直徑1~ 2mm，表面光滑、濕潤，中央稍隆起，邊緣整齊，呈牙黃色（附圖1)。將菌株進(jìn)行革蘭氏染色， 觀察發(fā)現(xiàn)菌株可被番紅復(fù)染，為革蘭氏陰性。菌株呈短桿狀，兩端純圓，一般呈單個(gè)或成對(duì)， 不產(chǎn)生芽抱（附圖2)。
[0007] 本發(fā)明的Acinetobacter sp. Bll菌株過氧化氨酶陽性、氧化酶陰性，不需要生長 因子，嗎I噪實(shí)驗(yàn)不顯色，不能使明膠液化，甲基紅試驗(yàn)陰性。不能利用D-葡萄糖、D-木糖、 k阿拉伯糖、D-核糖，能利用巧樣酸鋼作為唯一的碳源，并能利用硝酸鐘和硫酸錠作為唯 一氮源（表1)。
[0008] 本發(fā)明的Acinetobactersp.Bll菌株16SrDNA測序表明其基因序列長度約 147化P，與其相似菌株均為不動(dòng)桿菌，且最高相似度超過99%。
[0009] 本發(fā)明的菌株Bll生理生化特征列如下表：
[0011] 注："+"表示可W正常生長，"一"表示不能正常生長。
[0012] 本發(fā)明降解石油控類的Acinetobactersp.Bll菌株用于含油污水處理。
[0013] 本發(fā)明所提供的高效降解石油控類的Acinetobactersp.Bll菌株可用于含油污 水處理，具體條件如下：
[0014] 1、培養(yǎng)基配制
[0015] (1)菌種保藏及活化培養(yǎng)基（固體）：牛肉膏5.OgA,蛋白腺10.Og/l，^Cl5.Og/ L，瓊脂20g/L，調(diào)節(jié)抑為7. 2~7. 4;
[0016] 似種子液培養(yǎng)基（液體，1L):牛肉膏5.Og/L，蛋白腺10.Og/L，化Cl5.Og/L，調(diào) 節(jié)抑為7. 2~7. 4;
[0017] 做降解培養(yǎng)基（液體，0. 05L):畑4側(cè)32.Og/L，K2HPO4I. 5g/L，KH2PO43.Og/L， M拆04 ? 7&0 0.Ig/L，無水CaClzO.Olg/L，胞2邸TA? 2&0 0.Olg/L，調(diào)節(jié)抑為 7. 2 ~7. 4， 一定量的石油。
[0018] W上培養(yǎng)基均在12rc滅菌20~30min。
[0019] 2、菌種活化
[0020] 取保存于4°C的菌種保藏培養(yǎng)基斜面的菌落涂布于活化培養(yǎng)基平板，30°C培養(yǎng) 24 ~36h。
[0021] 3、液體種子制備
[0022] 在活化培養(yǎng)基平板上挑取單菌落接種到種子液培養(yǎng)基，3(TC、200r/min搖床培養(yǎng) 12h。ODe。。波長下測定菌懸液濃度并將菌懸液稀釋到0.8,作為種子液待用。
[0023] 4、石油控降解
[0024] 用滅菌后的移液槍取5mL種子液接入裝有50mL降解培養(yǎng)基的150mL錐形瓶中，放 置于恒溫?fù)u床中，lOOr/min，30°C培養(yǎng)7d。W未接菌培養(yǎng)基做空白，采用紫外分光光度法測 定培養(yǎng)基中剩余石油含量。
[0025] 本發(fā)明是從采油廢水生化處理池采集的活性污泥中分離出的一株高效降解石油 控的菌株，命名為不動(dòng)桿菌Acinetobactersp.B11。實(shí)驗(yàn)表明該菌能利用石油控作為唯一 碳源和能源生長繁殖，在純培養(yǎng)條件下連續(xù)培養(yǎng)7天，該菌對(duì)lOOOmg/L的含油廢水降解率 達(dá)到61. 5%。該菌株對(duì)鹽度具有良好的適應(yīng)能力，同時(shí)能夠保持較高的石油控降解效果，當(dāng) 含鹽量為3. 0 %時(shí)，其7天石油降解率仍然可W達(dá)到50%。該菌良好的環(huán)境適應(yīng)能力和出 色的石油控降解效果充分說明該菌可用于含油廢水的生物處理及石油污染±壤的生物修 復(fù)等領(lǐng)域。
[00%] 本發(fā)明從采油廢水生化處理池采集的活性污泥中富集分離得到的高效降解石油 控類的菌株，是一株有極高活力，對(duì)石油控具有良好降解效果的菌株，同時(shí)該菌株對(duì)礦化度 有良好的耐受能力，培養(yǎng)方法簡單，可W直接用于石油污染治理，應(yīng)用前景廣闊。
【附圖說明】
[0027]圖1 :B11困株的困洛特化。 陽〇2引 圖2 :B11菌株的革蘭氏染色形態(tài)（X1000)。
[0029] 圖3 :不同初始油濃度下菌株對(duì)石油的去除效果。
[0030] 圖4 :不同鹽度下菌株對(duì)石油的去除效果。
[0031] 圖5:不同鹽度對(duì)菌株生物量的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0032] 下面舉例對(duì)本發(fā)明做更詳細(xì)的描述。
[0033] 實(shí)施例1:不同初試油濃度下菌株對(duì)石油控的降解效果
[0034] 1、取保存于4°C的菌種保藏培養(yǎng)基斜面的菌落涂布于活化培養(yǎng)基平板，30°C培養(yǎng) 24~3化后，挑取單菌落接種到種子液培養(yǎng)基中，30°C、200r/min搖床培養(yǎng)12h。ODe。。波長 下測定菌懸液濃度并將菌懸液稀釋到0. 8,作為種子液待用。
[0035] 2、配制初始油濃度分別為100、200、500、1000、1500、2000、3000mg/L的降解培養(yǎng) 基。
[0036] 3、按照5 %的接種量將菌株種子液接種到不同石油濃度的降解培養(yǎng)基中，每個(gè)濃 度做=個(gè)平行樣，不接種的培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。
[0037] 4、置于30°C、l(K)r/min搖床培養(yǎng)7天后取樣萃取，利用紫外分光光度計(jì)測定剩余 石油控的含量，考察菌種對(duì)不同初始油濃度含油廢水的去除效果。當(dāng)初始油濃度lOOOmg/L 時(shí)，菌種對(duì)石油的降解率最高，達(dá)到61. 5% (附圖3)。相比中國專利CN101914470A公開的 不動(dòng)桿菌7天27. 5%的石油降解率，降解效果明顯提高。
[00測實(shí)施例2 :不同鹽度下菌株對(duì)搖瓶中石油控的降解效果
[0039] 1、取保存于4°C的菌種保藏培養(yǎng)基斜面的菌落涂布于活化培養(yǎng)基平板，30°C培養(yǎng) 24~3化后，挑取單菌落接種到種子液培養(yǎng)基中，30°C、200r/min搖床培養(yǎng)12h。ODe。。波長 下測定菌懸液濃度并將菌懸液稀釋到0. 8,作為種子液待用。
[0040] 2、配制鹽濃度分別為0. 5%、1.0%、1.5%、2. 0%、2. 5%、3. 0%的降解培養(yǎng)基，油 濃度為200mg/L。
[0041] 3、按照5%的接種量將菌株種子液接種到不同鹽度的降解培養(yǎng)基中，每個(gè)鹽濃度 做=個(gè)平行樣，不接種的培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。
[0042] 4、置于30°C、100;r/min搖床培養(yǎng)7天，利用紫外分光光度計(jì)測定菌懸液濃度和剩 余石油控的含量。當(dāng)含鹽量為3. 0%時(shí)，其石油降解率達(dá)到50% (附圖4)，生物量ODe。。值 為0. 8 (附圖5)。
[0043] 本發(fā)明所提供的降解石油控的菌株保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通 微生物中屯、，分類命名為Acinetobactersp.Bll。保藏編號(hào)為：CGMCCNo. 10283。
[0044] W上通過具體實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明的實(shí)施，目的在于幫助讀者更好地理解本發(fā) 明的精神實(shí)質(zhì)，但不作為對(duì)本發(fā)明實(shí)施范圍的限定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種石油經(jīng)類降解菌，其特征是命名為不動(dòng)桿菌株Acinetobactersp.B11，保藏在 "中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心"，保藏日期為2015年1月6日，登記編 號(hào)為CGMCCNo. 10283。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的石油經(jīng)類降解菌，其特征是Acinetobacter sp.Bll菌株在 28°C生長良好，單菌落呈圓形，直徑1~2mm，表面光滑、濕潤，中央稍隆起，邊緣整齊，呈牙 黃色。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的石油經(jīng)類降解菌，其特征是Acinetobacter sp. Bll菌株 過氧化氫酶陽性、氧化酶陰性，不需要生長因子，吲哚實(shí)驗(yàn)不顯色，不能使明膠液化，甲基紅 試驗(yàn)陰性。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的石油經(jīng)類降解菌，其特征是Acinetobactersp.Bll菌株 16SrDNA測序表明其基因序列長度約1470bp。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的石油經(jīng)類降解菌，其特征是Acinetobactersp.Bll菌株16S rDNA測序表明其基因序列長度約1470bp。6. -種權(quán)利要求1所述的石油經(jīng)類降解菌的應(yīng)用，其特征是Acinetobacter sp. Bll菌 株用于含油污水處理。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的石油經(jīng)類降解菌的應(yīng)用，其特征是Acinetobacter sp. Bll菌 株用于初始油濃度為100~3000mg/L的含油污水處理。8. 根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的石油經(jīng)類降解菌的應(yīng)用，其特征是Acinetobacter sp. Bll菌株用于鹽濃度為0. 5%~3. 0%的含油污水處理。
【專利摘要】本發(fā)明涉及的是一種石油烴類降解菌及其應(yīng)用。經(jīng)鑒定這株菌為Acinetobacter？sp屬，命名為Acinetobacter？sp.B11，并將其保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為：CGMCC？No.10283，將該菌株序列在Genbank中BLAST檢索比對(duì)，發(fā)現(xiàn)該序列與Acinetobacter？sp菌株基因序列高度同源。該菌株在以石油烴為唯一碳源的培養(yǎng)基中生長良好，對(duì)石油烴具有良好的降解效果，同時(shí)對(duì)鹽度具有良好的適應(yīng)能力。由本發(fā)明技術(shù)方案生產(chǎn)的降解菌能高效降解環(huán)境中的石油烴，保護(hù)生態(tài)環(huán)境。CGMCC No. 1028320150106
【IPC分類】C02F101/32, C12R1/01, C12N1/20, C02F3/34
【公開號(hào)】CN105219674
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510632607
【發(fā)明人】任芝軍, 官滌, 張忠祥, 劉遷, 張志柳
【申請(qǐng)人】哈爾濱工程大學(xué)
【公開日】2016年1月6日
【申請(qǐng)日】2015年9月29日