一種同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于多肽提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工
ο
【背景技術(shù)】
[0002]板藍(lán)根是常用中藥。味苦，性寒，有清熱解毒、涼血利咽功能。用于瘟毒發(fā)斑、高熱頭痛、大頭瘟疫、爛喉丹癡、作腮、喉痹、瘡腫、水痘、麻疹、肝炎、流行性感冒等癥。作為中藥，研究其主要有效成分，并分離出不同成分分別研究其功效，可以解決目前中藥普遍存在的副作用不明確的問題。據(jù)文獻(xiàn)報道，板藍(lán)根所含化學(xué)成分主要有五大類:分別為生物堿類、芥子昔類、含硫類、有機(jī)酸及其醋類以及多肽多糖類化合物。有研宄表明板藍(lán)根中抗病毒有效成分可能是蛋白或多肽，而板藍(lán)根多糖的活性主要在于機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)方面。而板藍(lán)根中的其他成分例如有機(jī)酸類化合物具有抗內(nèi)毒素活性，靛紅為單胺氧化酶的抑制劑。目前，板藍(lán)根沖劑或者板藍(lán)根口服液大多是通過簡單的中藥加工方法制得，比如熱水浸提法，鑒于不同成分的不同藥理作用，急需開發(fā)一種提取板藍(lán)根中有效成分多肽和多糖的工藝。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為了解決上述問題，本發(fā)明提供一種同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工藝，該工藝通過常規(guī)步驟中的條件考察，建立了同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的方法，操作簡單，提取得率高，提取物中主要成分為多肽和多糖。
[0004]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
一種同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工藝，包括如下步驟:
1)板藍(lán)根粉碎，用乙酸乙酯浸泡3~8h，過濾，將濾餅用蒸餾水淋洗3~5次，烘干；
2)將步驟1)烘干的濾餅加蒸餾水浸泡l~2h，超聲10~80s;
3)將步驟2)超聲處理后的溶液加熱至60~90°C，攪拌l~3h，攪拌轉(zhuǎn)速為120~300rpm，過濾，收集濾液；
4)將步驟3)過濾的濾餅加蒸餾水浸泡l~2h，加熱至60~90°C，以碳酸氫鈉調(diào)節(jié)溶液pH至7.5-8.5，攪拌l~3h，攪拌轉(zhuǎn)速為120~300rpm，過濾，收集濾液；
5)將步驟4)過濾的濾餅加蒸餾水浸泡l~2h，加熱至60~90°C，以碳酸調(diào)節(jié)溶液pH至5.5-6.5，攪拌l~3h，攪拌轉(zhuǎn)速為120~300rpm，過濾，收集濾液；
6)合并步驟3)、4)、5)的濾液，置于蒸發(fā)皿中，蒸發(fā)濃縮至濾液體積的1/5，加乙醇至含醇量70~90%，靜置12~24h，離心，棄上清，收集沉淀，真空干燥，得多肽和多糖混合物。
[0005]步驟1)中乙酸乙酯的用量為每一克板藍(lán)根加入5~8mL的乙酸乙酯，優(yōu)選為每一克板藍(lán)根加入6mL的乙酸乙酯。在提取之前先對板藍(lán)根中加入乙酸乙酯浸泡，可以除去板藍(lán)根中的生物堿類、有機(jī)酸類化合物。
[0006]步驟2)中蒸餾水的用量為每一克濾餅加入2~5mL的蒸餾水；優(yōu)選為每一克濾餅加入3mL的蒸餾水。
[0007]步驟2)中浸泡時間為1.5 h，超聲40s，超聲頻率為200~400Hz。增加超聲步驟，破壞板藍(lán)根的外壁分子結(jié)構(gòu)，可以提高后續(xù)步驟中水提取的效果，嚴(yán)格控制超聲時間，超聲時間長會打斷多肽的肽鍵和多糖的糖苷鍵，從而降低產(chǎn)物的活性。
[0008]步驟3)中加熱溫度至75~80°C，攪拌2h，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm。
[0009]步驟4)和步驟5)中蒸餾水的用量為每一克濾餅加入2~5mL的蒸餾水。
[0010]步驟4)中調(diào)節(jié)溶液pH至8.0。
[0011]步驟5 )中調(diào)節(jié)溶液pH至6.0。
[0012]步驟4)和5)調(diào)節(jié)不同的溶液pH，可以將酸性多肽和堿性多肽全部提取出來，提高多肽的提取率。
[0013]步驟6)中加乙醇至含醇量80%。
[0014]本發(fā)明所用的原料板藍(lán)根可以來源于不同產(chǎn)地，不同形式，在提取前，將其粉碎成粉狀，可以提高其各成分的浸出率。
[0015]有益效果:本發(fā)明提供一種同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工藝，該工藝通過常規(guī)步驟中的條件考察，建立了同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的方法，操作簡單，提取得率高，提取物中主要成分為多肽和多糖，多肽提取率高達(dá)95.45%，多糖提取得率高達(dá)92.48%，雜質(zhì)含量低于5%。
【具體實施方式】
[0016]以下實施例中采用的板藍(lán)根來自于安徽毫州。板藍(lán)根多糖的測定采用硫酸-苯酚法測定，多肽的測定采用凱氏定氮法。
[0017]實施例1
一種同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工藝，包括如下步驟:
1)將5g板藍(lán)根粉碎，用25mL乙酸乙酯浸泡3h，過濾，將濾餅用蒸餾水淋洗3次，烘干；
2)將步驟1)烘干的濾餅加18mL蒸餾水浸泡lh，超聲10s;
3)將步驟2)超聲處理后的溶液加熱至60°C，攪拌3h，攪拌轉(zhuǎn)速為120rpm，過濾，收集濾液；
4)將步驟3)過濾的濾餅加18mL蒸餾水浸泡lh，加熱至90°C，以碳酸氫鈉調(diào)節(jié)溶液pH至8.0，攪拌lh，攪拌轉(zhuǎn)速為160rpm，過濾，收集濾液；
5)將步驟4)過濾的濾餅加18mL蒸餾水浸泡lh，加熱至90°C，以碳酸調(diào)節(jié)溶液pH至6.0，攪拌lh，攪拌轉(zhuǎn)速為160rpm，過濾，收集濾液；
6)合并步驟3)、4)、5)的濾液，置于蒸發(fā)皿中，蒸發(fā)濃縮至9mL，加乙醇至含醇量70%，靜置12h，離心，棄上清，收集沉淀，真空干燥，得多肽和多糖混合物。多肽提取率高達(dá)92.16%，多糖提取得率高達(dá)89.38%，雜質(zhì)含量為4.4%。
[0018]實施例2
一種同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工藝，包括如下步驟:
1)將5g板藍(lán)根粉碎，用30mL乙酸乙酯浸泡8h，過濾，將濾餅用蒸餾水淋洗3~5次，烘干;
2)將步驟1)烘干的濾餅加22mL蒸餾水浸泡1.5h，超聲40s ; 3)將步驟2)超聲處理后的溶液加熱至80°C，攪拌2h，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，過濾，收集濾液；
4)將步驟3)過濾的濾餅加22蒸餾水浸泡1.5h，加熱至80°C，以碳酸氫鈉調(diào)節(jié)溶液pH至8，攪拌2h，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，過濾，收集濾液；
5)將步驟4)過濾的濾餅加22蒸餾水浸泡1.5h，加熱至80°C，以碳酸調(diào)節(jié)溶液pH至6，攪拌2h，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，過濾，收集濾液；
6)合并步驟3)、4)、5)的濾液，置于蒸發(fā)皿中，蒸發(fā)濃縮至12mL，加乙醇至含醇量90%，靜置12h，離心，棄上清，收集沉淀，真空干燥，得多肽和多糖混合物，多肽提取率高達(dá)95.45%，多糖提取得率高達(dá)92.48%，雜質(zhì)含量為3.4%。
[0019]實施例3
一種同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工藝，包括如下步驟:
1)取5g板藍(lán)根粉碎，用40mL乙酸乙酯浸泡5h，過濾，將濾餅用蒸餾水淋洗5次，烘干；
2)將步驟1)烘干的濾餅加蒸餾水15mL浸泡2h，超聲40s;
3)將步驟2)超聲處理后的溶液加熱至80°C，攪拌2h，攪拌轉(zhuǎn)速為180rpm，過濾，收集濾液；
4)將步驟3)過濾的濾餅加蒸餾水15mL浸泡2h，加熱至80°C，以碳酸氫鈉調(diào)節(jié)溶液pH至8，攪拌2h，攪拌轉(zhuǎn)速為180rpm，過濾，收集濾液；
5)將步驟4)過濾的濾餅加蒸餾水15mL浸泡2h，加熱至80°C，以碳酸調(diào)節(jié)溶液pH至6，攪拌2h，攪拌轉(zhuǎn)速為180rpm，過濾，收集濾液；
6)合并步驟3)、4)、5)的濾液，置于蒸發(fā)皿中，蒸發(fā)濃縮至濾液體積的9mL，加乙醇至含醇量80%，靜置22h，離心，棄上清，收集沉淀，真空干燥，得多肽和多糖混合物。多肽提取率高達(dá)94.25%，多糖提取得率高達(dá)90.57%，雜質(zhì)含量為3.9%。
[0020]實施例4
一種同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工藝，包括如下步驟:
1)取5g板藍(lán)根粉碎，用乙酸乙酯25mL浸泡6h，過濾，將濾餅用蒸餾水淋洗5次，烘干；
2)將步驟1)烘干的濾餅加蒸餾水18mL浸泡1.5h，超聲40s ;
3)將步驟2)超聲處理后的溶液加熱至75°C，攪拌2h，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，過濾，收集濾液；
4)將步驟3)過濾的濾餅加蒸餾水18mL浸泡1.5h，加熱至75°C，以碳酸氫鈉調(diào)節(jié)溶液pH至8，攪拌2h，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，過濾，收集濾液；
5)將步驟4)過濾的濾餅加蒸餾水18mL浸泡1.5h，加熱至80°C，以碳酸調(diào)節(jié)溶液pH至6，攪拌2h，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，過濾，收集濾液；
6)合并步驟3)、4)、5)的濾液，置于蒸發(fā)皿中，蒸發(fā)濃縮至濾液體積的10mL，加乙醇至含醇量90%，靜置12h，離心，棄上清，收集沉淀，真空干燥，得多肽和多糖混合物。多肽提取率高達(dá)93.18%，多糖提取得率高達(dá)92.76%，雜質(zhì)含量為2.6%。
【主權(quán)項】
1.一種同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工藝，其特征在于，包括如下步驟: 1)板藍(lán)根粉碎，用乙酸乙酯浸泡3~8h，過濾，將濾餅用蒸餾水淋洗3~5次，烘干； 2)將步驟I)烘干的濾餅加蒸餾水浸泡l~2h，超聲10~80s; 3)將步驟2)超聲處理后的溶液加熱至60~90°C，攪拌l~3h，攪拌轉(zhuǎn)速為120~300rpm，過濾，收集濾液； 4)將步驟3)過濾的濾餅加蒸餾水浸泡l~2h，加熱至60~90°C，以碳酸氫鈉調(diào)節(jié)溶液pH至7.5-8.5，攪拌l~3h，攪拌轉(zhuǎn)速為120~300rpm，過濾，收集濾液； 5)將步驟4)過濾的濾餅加蒸餾水浸泡l~2h，加熱至60~90°C，以碳酸調(diào)節(jié)溶液pH至5.5-6.5，攪拌l~3h，攪拌轉(zhuǎn)速為120~300rpm，過濾，收集濾液； 6)合并步驟3)、4)、5)的濾液，置于蒸發(fā)皿中，蒸發(fā)濃縮至濾液體積的1/5，加乙醇至含醇量70~90%，靜置12~24h，離心，棄上清，收集沉淀，真空干燥，得多肽和多糖混合物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工藝，其特征在于，步驟I)中乙酸乙酯的用量為每一克板藍(lán)根加入5~8mL的乙酸乙酯。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工藝，其特征在于，步驟2)中蒸餾水的用量為每一克濾餅加入2~5mL的蒸餾水。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工藝，其特征在于，步驟2)中浸泡時間為1.5 h，超聲40s。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工藝，其特征在于，步驟3)中加熱溫度至75~80°C，攪拌2h，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工藝，其特征在于，步驟4)和步驟5)中蒸餾水的用量為每一克濾餅加入2~5mL的蒸餾水。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工藝，其特征在于，步驟4)中調(diào)節(jié)溶液pH至8.0。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工藝，其特征在于，步驟5)中調(diào)節(jié)溶液pH至6.0。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工藝，其特征在于，步驟6)中加乙醇至含醇量80%。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的工藝，將板藍(lán)根粉碎，用乙酸乙酯浸泡，過濾，將濾餅用蒸餾水淋洗3~5次，烘干；濾餅加蒸餾水浸泡1~2h，超聲10~80s；溶液加熱至60~90℃，攪拌1~3h，攪拌轉(zhuǎn)速為120~300rpm，過濾，收集濾液；濾餅加蒸餾水浸泡1~2h，加熱分別調(diào)節(jié)酸堿，攪拌1~3h，攪拌轉(zhuǎn)速為120~300rpm，過濾，收集濾液；合并濾液，置于蒸發(fā)皿中，蒸發(fā)濃縮加乙醇，靜置12~24h，離心，棄上清，收集沉淀，真空干燥，得多肽和多糖混合物。本發(fā)明建立了同時提取板藍(lán)根多肽和多糖的方法，操作簡單，多肽提取率高達(dá)95.45%，多糖提取得率高達(dá)92.48%，雜質(zhì)含量低于5%。
【IPC分類】C07K1/34, C07K1/30, C07K1/36, C08B37/00
【公開號】CN105237615
【申請?zhí)枴緾N201510618160
【發(fā)明人】金仲恩, 全春蘭, 張帆, 喻國貞, 歐陽智琨, 陳晉納
【申請人】蘇州蔻美新材料有限公司
【公開日】2016年1月13日
【申請日】2015年9月25日