一種生物活性肽的酶法提取工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于多肽提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種生物活性肽的酶法提取工藝。
【背景技術(shù)】
[0002]生物活性肽是指具有特殊生物活性的多肽。在蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)中具有生物活性的多肽類(lèi)，通過(guò)相應(yīng)的酶解，可將其釋放出來(lái)，單獨(dú)從蛋白鏈中釋放片斷，可顯示出獨(dú)特的生物活性，形成的生物活性肽。生物活性肽具有豐富的生物學(xué)功能，如降膽固醇、改善元素吸收和礦物質(zhì)運(yùn)輸、免疫調(diào)節(jié)抗衰老、抗血栓、抗高血壓、激素作用、促進(jìn)生長(zhǎng)、抑制細(xì)菌和病毒、抗癌抗氧化、調(diào)節(jié)口味和硬度、食品風(fēng)味等。所以，生物活性肽是選藥物、制疫苗及食品添加劑的天然資源庫(kù)。
[0003]酶水解法是選擇合適的蛋白酶水解各種蛋白質(zhì)來(lái)獲得生物活性肽，與酸水解和堿水解比較，酶法水解蛋白質(zhì)具有多種優(yōu)點(diǎn):反應(yīng)條件溫和，反應(yīng)時(shí)間短，效率高，不破壞氨基酸，產(chǎn)品純度高，產(chǎn)物易分離，成本低等。影響酶解過(guò)程的主要因素有:底物添加量、酶濃度、反應(yīng)溫度和初始pH值等。高溫、過(guò)酸或者過(guò)堿對(duì)酶的變性是不可逆的，因此，在試驗(yàn)中尤其要注意控制初始PH及反應(yīng)溫度，以防止酶變性失活。蛋白酶的作用是水解蛋白質(zhì)中的肽鍵，將大分子長(zhǎng)鏈蛋白質(zhì)變成長(zhǎng)短不一的肽段和氨基酸。由于不同蛋白酶酶解位點(diǎn)不同，因此，同樣的蛋白質(zhì)在不同酶作用下可產(chǎn)生不同的多肽片段。研究表明，一些抑制肽的形成需要2種以上的蛋白酶參與水解。因而，如何選擇符合生產(chǎn)要求的復(fù)合蛋白酶就要根據(jù)生物活性肽的結(jié)構(gòu)功能特性來(lái)定。目前國(guó)內(nèi)外針對(duì)酶解法制備多肽已做了大量研究。武萌萌等用堿性蛋白酶水解螺旋藻蛋白制備生物活性肽；朱艷華用堿性蛋白酶酶解玉米粉獲得生物活性肽，此外還有酶解黑豆、金絲棗、銀杏等各種來(lái)源的生物活性肽，目前生物活性肽酶解時(shí)間長(zhǎng)，通常在幾個(gè)小時(shí)或幾十個(gè)小時(shí)不等，酶用量多，操作周期長(zhǎng)，生產(chǎn)效率低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供一種生物活性肽的酶法提取工藝，在酶解過(guò)程中加入氨基酸，可以大幅縮短酶解時(shí)間，減少蛋白酶的用量。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
一種生物活性肽的酶法提取工藝，其特征在于，在加入蛋白酶酶解時(shí)，同時(shí)加入氨基酸，所述氨基酸的添加量根據(jù)提取原料的質(zhì)量添加，每lg提取原料添加10~30mg氨基酸。
[0006]氨基酸的添加量根據(jù)提取原料的質(zhì)量每lg提取原料添加20mg。
[0007]酶解時(shí)加入的蛋白酶為堿性蛋白酶時(shí)，加入的氨基酸為堿性氨基酸。
[0008]酶解時(shí)加入的蛋白酶為中性蛋白酶時(shí)，加入的氨基酸為中性氨基酸。
[0009]酶解時(shí)加入的蛋白酶為酸性蛋白酶時(shí)，加入的氨基酸為酸性氨基酸。
[0010]所述堿性氨基酸為賴(lài)氨酸、精氨酸或者組氨酸中的至少一種。
[0011]所述中性氨基酸為甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、蘇氨酸、色氨酸或者甲硫氨酸中的至少一種。
[0012]所述酸性氨基酸為天冬氨酸或者谷氨酸中的至少一種。
[0013]有益效果:本發(fā)明提供一種生物活性肽的酶法提取工藝，在酶解過(guò)程中加入氨基酸，可以大幅縮短酶解時(shí)間，減少蛋白酶的用量。
【具體實(shí)施方式】
[0014]以下實(shí)施例中用凱氏定氮法測(cè)定溶液中的多肽含量。堿性蛋白酶購(gòu)自于上海中信生物有限公司，中性蛋白酶購(gòu)自于上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司。
[0015]實(shí)施例1黑豆多肽的酶法提取工藝
一種黑豆多肽的酶法提取工藝，取50g黑豆，粉碎至200目，加蒸饋水600mL，調(diào)節(jié)pH為9.0，溫度為50°C，加入200U堿性蛋白酶，加入lg賴(lài)氨酸，定時(shí)取樣測(cè)定溶液中多肽含量，結(jié)果顯示，在水解的前30min，多肽含量呈直線上升趨勢(shì)，30min以后趨于穩(wěn)定，可見(jiàn)酶解完全需要30min。
[0016]對(duì)比例1
取50g黑豆，粉碎至200目，加蒸餾水600mL，調(diào)節(jié)pH為9.0，溫度為50°C，加入200U堿性蛋白酶，定時(shí)取樣測(cè)定溶液中多肽含量，結(jié)果顯示，在水解的8h內(nèi)，多肽含量呈緩慢上升趨勢(shì)，8h以后趨于穩(wěn)定，可見(jiàn)酶解完全至少需要8h。
[0017]對(duì)比例2
取50g黑豆，粉碎至200目，加蒸餾水600mL，調(diào)節(jié)pH為9.0，溫度為50°C，加入2000U堿性蛋白酶，定時(shí)取樣測(cè)定溶液中多肽含量，結(jié)果顯示，在水解的4h內(nèi)，多肽含量呈緩慢上升趨勢(shì)，4h以后趨于穩(wěn)定，可見(jiàn)酶解完全至少需要4h。
[0018]對(duì)比例3
取50g黑豆，粉碎至200目，加蒸餾水600mL，調(diào)節(jié)pH為9.0，溫度為50°C，加入200U堿性蛋白酶，加入lg絲氨酸，定時(shí)取樣測(cè)定溶液中多肽含量，結(jié)果顯示，在水解的3h內(nèi)，多肽含量呈緩慢上升趨勢(shì)，3h以后趨于穩(wěn)定，可見(jiàn)酶解完全至少需要3h。
[0019]根據(jù)實(shí)施例1及對(duì)比例1、2和3中可以看出，在添加堿性氨基酸的情況下，水解酶用量少，且水解時(shí)間短，30min即可完成酶解反應(yīng)、在堿性蛋白酶的條件下，添加中性氨基酸雖然能在一定程度上縮短酶解時(shí)間，但是效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于添加堿性氨基酸帶來(lái)的效果。
[0020]實(shí)施例2金絲棗多肽的提取
取濃縮棗汁(山東鼎力棗業(yè)食品集團(tuán)有限公司)30mL，加蒸餾水100mL，調(diào)節(jié)pH為7.0，溫度為45°C，加入200U中性蛋白酶，加入1.5g甘氨酸，定時(shí)取樣測(cè)定溶液中多肽含量，結(jié)果顯示，在水解的lh內(nèi)，多肽含量呈緩慢上升趨勢(shì)，lh以后趨于穩(wěn)定，可見(jiàn)酶解完全至少需要lh0
[0021]對(duì)比例4
取濃縮棗汁(山東鼎力棗業(yè)食品集團(tuán)有限公司)30mL，加蒸餾水100mL，調(diào)節(jié)pH為7.0，溫度為45°C，加入200U中性蛋白酶，定時(shí)取樣測(cè)定溶液中多肽含量，結(jié)果顯示，在水解的10h內(nèi)，多肽含量呈緩慢上升趨勢(shì)，5h以后趨于穩(wěn)定，可見(jiàn)酶解完全至少需要10h。
[0022]對(duì)比例5
取濃縮棗汁(山東鼎力棗業(yè)食品集團(tuán)有限公司)30mL，加蒸餾水100mL，調(diào)節(jié)pH為7.0，溫度為45°C，加入6000U中性蛋白酶，定時(shí)取樣測(cè)定溶液中多肽含量，結(jié)果顯示，在水解的4h內(nèi)，多肽含量呈緩慢上升趨勢(shì)，4h以后趨于穩(wěn)定，可見(jiàn)酶解完全至少需要4h。
[0023]對(duì)比例6
取濃縮棗汁(山東鼎力棗業(yè)食品集團(tuán)有限公司)30mL，加蒸餾水100mL，調(diào)節(jié)pH為7.0，溫度為45°C，加入200U中性蛋白酶，加入1.5g組氨酸，定時(shí)取樣測(cè)定溶液中多肽含量，結(jié)果顯示，在水解的6h內(nèi)，多肽含量呈緩慢上升趨勢(shì)，6h以后趨于穩(wěn)定，可見(jiàn)酶解完全至少需要6h0
[0024]根據(jù)實(shí)施例1及對(duì)比例4、5和6中可以看出，在添加中性氨基酸的情況下，水解酶用量少，且水解時(shí)間短，lh即可完成酶解反應(yīng)。添加堿性氨基酸同樣能縮短酶解時(shí)間，但是效果有限，遠(yuǎn)不如添加中性氨基酸效果好。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種生物活性肽的酶法提取工藝，其特征在于，在加入蛋白酶酶解時(shí)，同時(shí)加入氨基酸，所述氨基酸的添加量根據(jù)提取原料的質(zhì)量添加，每Ig提取原料添加10~30mg氨基酸。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物活性肽的酶法提取工藝，其特征在于，氨基酸的添加量根據(jù)提取原料的質(zhì)量每Ig提取原料添加20mg。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物活性肽的酶法提取工藝，其特征在于，酶解時(shí)加入的蛋白酶為堿性蛋白酶時(shí)，加入的氨基酸為堿性氨基酸。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物活性肽的酶法提取工藝，其特征在于，酶解時(shí)加入的蛋白酶為中性蛋白酶時(shí)，加入的氨基酸為中性氨基酸。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物活性肽的酶法提取工藝，其特征在于，酶解時(shí)加入的蛋白酶為酸性蛋白酶時(shí)，加入的氨基酸為酸性氨基酸。6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生物活性肽的酶法提取工藝，其特征在于，所述堿性氨基酸為賴(lài)氨酸、精氨酸或者組氨酸中的至少一種。7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的生物活性肽的酶法提取工藝，其特征在于，所述中性氨基酸為甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、蘇氨酸、色氨酸或者甲硫氨酸中的至少一種。8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的生物活性肽的酶法提取工藝，其特征在于，所述酸性氨基酸為天冬氨酸或者谷氨酸中的至少一種。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種生物活性肽的酶法提取工藝，在加入蛋白酶酶解時(shí)，同時(shí)加入氨基酸，所述氨基酸的添加量根據(jù)提取原料的質(zhì)量添加，每1g提取原料添加10~30mg氨基酸。優(yōu)選每1g提取原料添加20mg氨基酸。氨基酸的種類(lèi)根據(jù)所用的蛋白酶的性質(zhì)選擇，當(dāng)酶解所用的蛋白酶為堿性蛋白酶時(shí)，加入的氨基酸為堿性氨基酸，酶解時(shí)加入的蛋白酶為中性蛋白酶時(shí)，加入的氨基酸為中性氨基酸；酶解時(shí)加入的蛋白酶為酸性蛋白酶時(shí)，加入的氨基酸為酸性氨基酸。本發(fā)明工藝可以大幅縮短酶解時(shí)間，減少蛋白酶的用量。
【IPC分類(lèi)】C12P21/06
【公開(kāi)號(hào)】CN105238834
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510618787
【發(fā)明人】金仲恩, 全春蘭, 張帆, 喻國(guó)貞, 歐陽(yáng)智琨, 陳晉納
【申請(qǐng)人】蘇州蔻美新材料有限公司
【公開(kāi)日】2016年1月13日
【申請(qǐng)日】2015年9月25日