一種真姬菇菌種的保藏方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于菌種保藏技術領域，尤其是設及一種真姬茹菌種的保藏方法。
【背景技術】
[0002] 真姬茹含有豐富的維生素和多種氨基酸，其中賴氨酸、精氨酸的含量高于一般茹 類，有助于青少年益智增高，并具有抗癌、降低膽固醇的作用，由于真姬茹的價值較高，現(xiàn)已 成為全國食用菌工廠化生產的重要品種之一，菌種作為一種重要的生物資源，為了保持其 優(yōu)良性狀不變，應及時對其進行保藏，使微生物的代謝處于最不活躍或相對靜止的狀態(tài)，才 能在一定的時間內使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。
[0003] 食用菌菌種保藏方法主要有液氮低溫保藏法、斜面定期移植法、液體石蠟法、砂± 管保藏法W及自然基質寶藏法等，液氮低溫保藏法是目前比較先進的一種方法，但費用較 高，無法普及應用在工廠化生產中，目前在工廠化生產中，一般是WPDA培養(yǎng)基進行試管培 養(yǎng)，放置于4Γ冰箱中，每90天進行一次繼代培養(yǎng)，其菌種的保藏期一般為1-2年，存在著培 養(yǎng)基成本高、栽培周期長、品質差、污染率高等問題，因此迫切需要一種簡單有效的菌種保 藏方法，在有效保持菌種性狀的前提下，還可W使用較長時間。

【發(fā)明內容】

[0004] 有鑒于此，本發(fā)明旨在提出一種簡單有效、保藏期長、成本低的真姬茹菌種的保藏 方法，避免現(xiàn)有的保臧方法成本局等缺點。 陽0化]為達到上述目的，本發(fā)明的技術方案是運樣實現(xiàn)的：一種真姬茹菌種的保藏方法， 包括培養(yǎng)基的混合、培養(yǎng)基滅菌、菌種接種、菌種培養(yǎng)、菌種繼代過程，所述菌種保藏培養(yǎng)基 配方的重量百分比為：木屑20-25%、米慷10-15%、水65%，所述木屑、米慷均為干重重量 的百分比，將上述組分按比例混合均勻進行配制培養(yǎng)基，將配制好的培養(yǎng)基放入滅菌裝置 中進行滅菌，將真姬茹菌種接種到滅菌的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，每30-35天進行一次繼代，即 每30-35天將菌種再接種到配制好的上述菌種培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，重復循環(huán)菌種的繼 代培養(yǎng)過程。
[0006] 作為優(yōu)選的，所述木屑包括楊木木屑和松木木屑，其中楊木木屑占木屑總干重比 例的30 % -50 %，松木木屑占木屑總干重比例的50 % -70 %。
[0007] 作為更優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基配方的重量百分比為：木屑22%、米慷13%、水65%， 其中所述木屑、米慷重量百分比均為干重重量的百分比。
[0008] 作為優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基配方的重量百分比為：木屑20-25%、米慷10-15%、水 65%，其中所述木屑、米慷重量百分比均為干重重量的百分比。
[0009] 作為更優(yōu)選的，所述木屑包括楊木木屑和松木木屑，所述楊木木屑占總干重比例 的48 %，所述松木木屑占木屑總干重比例的52 %。
[0010] 作為優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基滅菌過程為：首先95°C滅菌55-65分鐘，然后105°C滅菌 25-35分鐘，之后12rC滅菌40-60分鐘，最后炯置80-100分鐘。
[0011] 作為更優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基滅菌過程為：首先95°c滅菌60分鐘，然后105°C滅菌 30分鐘，之后12rC滅菌50分鐘，最后炯置90分鐘。
[0012] 作為優(yōu)選的，所述菌種接種過程的接種條件為將滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至18-22°C， 然后在無菌環(huán)境下進行接種。
[0013] 作為更有選的，所述真姬茹菌種的生長環(huán)境為：溫度為20-22°C，濕度為60-70%， 二氧化碳濃度為1500-25(Κ)卵m，在實際生產中，二氧化碳濃度為2000ppm是最優(yōu)方案。
[0014] 繼代培養(yǎng)是對來自于外植體所增殖的培養(yǎng)物（包括細胞、組織或其切段）通過更 換新鮮培養(yǎng)基及不斷切割或分離，進行連續(xù)多代的培養(yǎng)。
[0015] 本發(fā)明具有的優(yōu)點和積極效果是：與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的保藏方法的原材 料價格便宜，易于購買，儲存方便，菌種保藏期長，利用此保藏方法保藏的菌種可連續(xù)使用 10-20年，且菌種性狀穩(wěn)定，采用此法所培養(yǎng)的真姬茹菌種生產周期短，菌絲長勢旺盛，活力 強，接種到栽培料后，定植快，污染率低，不易老化。
【具體實施方式】
[0016] 實施例一
[0017] 培養(yǎng)基配制：培養(yǎng)基配方的重量百分比為：木屑22%、米慷13%、水65%，其中木 屑、米慷的重量百分比均為干重重量百分比，楊木木屑占木屑總干重比例的40%，松木木屑 占木屑總干重比例的60%，將上述組分按比例進行配制培養(yǎng)基，首先將楊木木屑、松木木 屑、米慷加入拌料鍋中；攬拌30-40分鐘混合均勻，然后按照配方含水比例進行加水，繼續(xù) 攬拌至拌料鍋中培養(yǎng)料含水量一致。
[0018] 培養(yǎng)基滅菌：將配制好的培養(yǎng)基裝入培養(yǎng)瓶中，選取200瓶進行試驗，將培養(yǎng)基放 入滅菌裝置中進行滅菌，首先95°C滅菌60分鐘，然后105°C滅菌30分鐘，之后12rC滅菌 50分鐘，最后炯置90分鐘。
[0019] 菌種接種：將滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至18-22Γ，將冷卻后的培養(yǎng)基放置于超凈工 作臺上，將真姬茹菌種接種到滅菌的培養(yǎng)基上。
[0020] 菌種培養(yǎng)環(huán)境：將接種后的真姬茹菌種放置于培養(yǎng)室，培養(yǎng)室溫度為20-22°C，濕 度為60-70 %，二氧化碳濃度為2000ppm，培養(yǎng)時間為30天。
[0021] 菌種繼代：將培養(yǎng)后的菌種在無菌環(huán)境下再接種到滅菌后的培養(yǎng)基中，每30天進 行一次繼代培養(yǎng)，重復循環(huán)，菌種性狀可保持10年不退化。
[0022] 用此菌種進行工廠化生產，可直接進行定植，定植后污染率為0. 3%。
[0023] 對比例
[0024] 培養(yǎng)基的配制：PDA培養(yǎng)基配方百分比如下：±豆17%，葡萄糖1.6%，瓊脂 1. 4%，水80 %，按培養(yǎng)基配方比例逐一稱取，將±豆切成小塊放入器皿中然后加水，在加 熱器上加熱至沸騰，維持20-30分鐘，用紗布在量杯上進行過濾，過濾后再補充水分至所需 量，用10%的化0H或肥1進行調節(jié)抑值至6-7,加入葡萄糖、瓊脂進行加熱，并用玻棒不斷 攬拌，待瓊脂完全溶解后，再補充水分至所需量，將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內，分裝量約 為試管高度的1/5,分裝數(shù)量為200個。 陽0巧]培養(yǎng)基滅菌：在104kPa壓力下滅菌20-30分鐘。
[00%] 菌種接種：待滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至18-22°C，將冷卻后的試管培養(yǎng)基放置于超 凈工作臺上，將真姬茹菌種接種到滅菌的試管培養(yǎng)基上。
[0027] 菌種培養(yǎng)環(huán)境：將接種后的試管傾斜放置于4Γ冰箱中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為90 天。
[0028] 菌種繼代培養(yǎng)：將培養(yǎng)后的菌種在無菌環(huán)境下再接種到PDA培養(yǎng)基中。每90天進 行一次繼代培養(yǎng)，重復循環(huán)。
[0029] 用此保藏方法保藏的菌種進行工廠化生產，定植后污染率為1 %。
[0030] 效果試驗
[0031] 分別選取實施例一和對比例中的200瓶菌種作為效果試驗，通過表1可W看出， 實施例一在第2年的出茹率為89%，保持了較高的出茹率，實施例一在第10年的出茹率為 46. 8%，從第10年開始退化現(xiàn)象嚴重。
[0032] 對比例在第2年的出茹率為35%，菌種出現(xiàn)了嚴重的退化現(xiàn)象，需要重新購買菌 種進行后續(xù)生產。
[0033] 通過比較可W看出，用實施例一的方法制備的菌種培養(yǎng)基及保藏方法可W維持10 年W上的使用，為大規(guī)模的工廠化生產節(jié)約了成本。
[0034] 表1實施例一與對比例的出茹率比較
[0035]
[0036] W上對本發(fā)明的實施例進行了詳細說明，但所述內容僅為本發(fā)明的較佳實施例， 不能被認為用于限定本發(fā)明的實施范圍。凡依本發(fā)明申請范圍所作的均等變化與改進等， 均應仍歸屬于本發(fā)明的專利涵蓋范圍之內。
【主權項】
1. 一種真姬菇菌種的保藏方法，包括培養(yǎng)基的混合、培養(yǎng)基滅菌、菌種接種、菌種培養(yǎng)、 菌種繼代過程，其特征在于：所述菌種繼代過程為所述菌種在所述培養(yǎng)基中每30-35天進 行一次繼代的過程。2. 根據(jù)權利要求1所述的真姬菇菌種的保藏方法，其特征在于：所述培養(yǎng)基配方的重 量百分比為：木肩20-25%、米糠10-15%、水65%，其中所述木肩、米糠重量百分比均為干 重重量的百分比。3. 根據(jù)權利要求2所述的真姬菇菌種保藏方法，其特征在于：所述培養(yǎng)基配方的重量 百分比為：木肩22%、米糠13%、水65%，其中所述木肩、米糠重量百分比均為干重重量的 百分比。4. 根據(jù)權利要求1或2所述的真姬菇菌種的保藏方法，其特征在于：所述木肩包括楊 木木肩和松木木肩，所述楊木木肩占木肩總干重比例的30% -50%，所述松木木肩占木肩 總干重比例的50% -70%。5. 根據(jù)權利要求4所述的真姬菇菌種的保藏方法，其特征在于：所述木肩包括楊木 木肩和松木木肩，所述楊木木肩占總干重比例的48%，所述松木木肩占木肩總干重比例的 52%〇6. 根據(jù)權利要求1或2或3所述的真姬菇菌種的保藏方法，其特征在于：所述培養(yǎng)基 滅菌過程為：首先95°C滅菌55-65分鐘，然后105°C滅菌25-35分鐘，之后121°C滅菌40-60 分鐘，最后燜置80-100分鐘。7. 根據(jù)權利要求6所述的真姬菇菌種的保藏方法，其特征在于：所述培養(yǎng)基滅菌過程 為：首先95°C滅菌60分鐘，然后105°C滅菌30分鐘，之后121°C滅菌50分鐘，最后燜置90 分鐘。8. 根據(jù)權利要求1或2或3或5所述的真姬菇菌種的保藏方法，其特征在于：所述菌 種接種的接種條件為將滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至18-22Γ，然后在無菌環(huán)境下進行接種。9. 根據(jù)權利要求8所述的真姬菇菌種的保藏方法，其特征在于：所述菌種培養(yǎng)階段的 培養(yǎng)環(huán)境為：溫度為20-22°(：，濕度為60-70%，二氧化碳濃度為1500-2500??111。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種真姬菇菌種的保藏方法，包括培養(yǎng)基的混合、培養(yǎng)基滅菌、菌種接種、菌種培養(yǎng)、菌種繼代過程，所述菌種繼代過程為所述菌種在所述培養(yǎng)基中每30-35天進行一次繼代的過程，所述菌種培養(yǎng)基配方的重量百分比為：木屑20-25％、米糠10-15％、水65％，其中所述木屑、米糠重量百分比均為其干重重量的百分比，本發(fā)明所述的保藏方法所用培養(yǎng)基的原材料價格便宜，易于購買，儲存方便，菌種保藏期長，利用此保藏方法保藏的菌種可連續(xù)使用10-20年，且菌種性狀穩(wěn)定。
【IPC分類】C12R1/645, C12N1/04
【公開號】CN105255736
【申請?zhí)枴緾N201510807362
【發(fā)明人】陳啟永, 王旭峰, 張紅穎, 楊華, 何樂, 班立桐, 黃亮, 王玉
【申請人】天津綠圣蓬源農業(yè)科技開發(fā)有限公司
【公開日】2016年1月20日
【申請日】2015年11月19日