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      鑒定飼用燕麥國審品種的方法及其專用引物組的制作方法_2

      文檔序號:9541149閱讀:來源:國知局
      候選為哈爾滿;如果得到146bp和148bp的擴(kuò)增產(chǎn)物、待測草種為或候選為青早1號。
      [0028] 所述"用于鑒定待測草種為或候選為哪種燕麥國審品種的方法"具體可為方法二, 包括如下步驟:W待測草種的基因組DNA為模板,分別采用六個引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增;W丹 麥444的基因組DNA為模板,分別采用所述六個引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增;W鋒利的基因組DNA 為模板,分別采用所述六個引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增;W哈爾滿的基因組DNA為模板,分別采用 所述六個引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增;W馬匹牙的基因組DNA為模板,分別采用所述六個引物對進(jìn) 行PCR擴(kuò)增;W青引1號的基因組DNA為模板,分別采用所述六個引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增;W 青引2號的基因組DNA為模板,分別采用所述六個引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增;W青早1號的基因 組DNA為模板,分別采用所述六個引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增;W蘇聯(lián)的基因組DNA為模板,分別 采用所述六個引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增;W晚燕3號的基因組DNA為模板,分別采用所述六個引 物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增;W阿巧的基因組DNA為模板,分別采用所述六個引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增; 所述六個引物對為所述引物對P01、所述引物對P02、所述引物對P03、所述引物對P04、所述 引物對P05和所述引物對P06 ;然后按照如下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷:
      [0029] 化1)如果待測草種采用所述六個引物對的擴(kuò)增產(chǎn)物均與丹麥444采用所述六個 引物對的擴(kuò)增產(chǎn)物一致,待測草種為丹麥444;
      [0030] 化2)如果待測草種采用所述六個引物對的擴(kuò)增產(chǎn)物均與鋒利采用所述六個引物 對的擴(kuò)增產(chǎn)物一致,待測草種為鋒利;
      [0031] 化3)如果待測草種采用所述六個引物對的擴(kuò)增產(chǎn)物均與哈爾滿采用所述六個引 物對的擴(kuò)增產(chǎn)物一致,待測草種為哈爾滿;
      [0032] 化4)如果待測草種采用所述六個引物對的擴(kuò)增產(chǎn)物均與馬匹牙采用所述六個引 物對的擴(kuò)增產(chǎn)物一致,待測草種為馬匹牙;
      [0033] 化5)如果待測草種采用所述六個引物對的擴(kuò)增產(chǎn)物均與青引1號采用所述六個 引物對的擴(kuò)增產(chǎn)物一致,待測草種為青引1號;
      [0034] 化6)如果待測草種采用所述六個引物對的擴(kuò)增產(chǎn)物均與青引2號采用所述六個 引物對的擴(kuò)增產(chǎn)物一致,待測草種為青引2號;
      [0035] 化7)如果待測草種采用所述六個引物對的擴(kuò)增產(chǎn)物均與青早1號采用所述六個 引物對的擴(kuò)增產(chǎn)物一致,待測草種為青早1號;
      [0036] 化8)如果待測草種采用所述六個引物對的擴(kuò)增產(chǎn)物均與蘇聯(lián)采用所述六個引物 對的擴(kuò)增產(chǎn)物一致,待測草種為蘇聯(lián);
      [0037] 化9)如果待測草種采用所述六個引物對的擴(kuò)增產(chǎn)物均與晚燕3號采用所述六個 引物對的擴(kuò)增產(chǎn)物一致,待測草種為晚燕3號;
      [003引 化10)如果待測草種采用所述六個引物對的擴(kuò)增產(chǎn)物均與阿巧采用所述六個引物 對的擴(kuò)增產(chǎn)物一致,待測草種為阿巧。
      [0039] 所述"用于鑒定待測草種為或候選為哪種燕麥國審品種的方法"具體可為方法=, 包括如下步驟:W待測草種的基因組DNA為模板,采用所述引物對P04進(jìn)行PCR擴(kuò)增,然后 按照如下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷:
      [0040] (Cl)如果得到132bp、136bp和148bp的擴(kuò)增產(chǎn)物、待測草種為或候選為馬匹牙;
      [0041] (c2)如果得到14化P、142bp、148bp和15化P的擴(kuò)增產(chǎn)物、待測草種為或候選為阿 巧;
      [0042] (c3)如果得到13化P、HObp和148bp的擴(kuò)增產(chǎn)物、待測草種為或候選為丹麥444;
      [0043] (c4)如果得到146bp和148bp的擴(kuò)增產(chǎn)物、待測草種為或候選為鋒利;
      [0044] (c5)如果得到144bp、148bp和152bp的擴(kuò)增產(chǎn)物、待測草種為或候選為青引2號;
      [0045] (c6)如果得到142bp和14化P的擴(kuò)增產(chǎn)物、待測草種為或候選為蘇聯(lián);
      [0046] (c7)如果得到14化P、144bp和148bp的擴(kuò)增產(chǎn)物、待測草種為或候選為青引1號;
      [0047] (c8)如果得到14化P、144bp、146bp和148bp的擴(kuò)增產(chǎn)物、待測草種為或候選為哈 爾滿;
      [0048] (c9)如果得到134bp、144bp和148bp的擴(kuò)增產(chǎn)物、待測草種為或候選為晚燕3號;
      [0049] (ClO)如果得到144bp和148bp的擴(kuò)增產(chǎn)物、待測草種為或候選為青早1號。
      [0050] 所述"用于鑒定待測草種為或候選為哪種燕麥國審品種的方法"具體可為方法四, 包括如下步驟:W待測草種的基因組DNA為模板,采用所述引物對P05進(jìn)行PCR擴(kuò)增,然后 按照如下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷:
      [0051] (dl)如果得到120bp、122bp、142bp、144bp和150bp的擴(kuò)增產(chǎn)物、待測草種為或候 選為馬匹牙;
      [0052] (d2)如果得到 124bp、12化P、128bp、130bp、132bp、142bp、144bp和 162bp的擴(kuò)增產(chǎn) 物、待測草種為或候選為阿巧;
      [0053] (d3)如果得到 124bp、12化P、128bp、13化P、138bp、140bp、142bp和 160bp的擴(kuò)增產(chǎn) 物、待測草種為或候選為丹麥444;
      [0054] (d4)如果得到12化P、12化P、138bp、HObp和15化P的擴(kuò)增產(chǎn)物、待測草種為或候 選為鋒利; 陽化5] (d5)如果得到 124bp、12化P、128bp、130bp、132bp、142bp、144bp和 168bp的擴(kuò)增產(chǎn) 物、待測草種為或候選為青引2號;
      [0056] (d6)如果得到122bp、124bp、12化P、140bp、142bp和15化P的擴(kuò)增產(chǎn)物、待測草種 為或候選為蘇聯(lián);
      [0057] (d7)如果得到13化P、13化P、14化P、142bp和16化P的擴(kuò)增產(chǎn)物、待測草種為或候 選為青引1號;
      [0058] (d8)如果得到13化P、13化P、14化P、142bp和158bp的擴(kuò)增產(chǎn)物、待測草種為或候 選為晚燕3號;
      [0059](貼)如果得到 124bp、12化P、130bp、132bp、142bp、144bp和 160bp的擴(kuò)增產(chǎn)物、待 測草種為或候選為青早1號; W60] (dlO)如果沒有得到擴(kuò)增產(chǎn)物、待測草種為或候選為哈爾滿。
      [0061] 上述任一所述方法中,所述PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物可通過電泳檢測。
      [0062] 所述電泳可為變性聚丙締酷胺凝膠電泳。
      [0063] 本發(fā)明還提供了用于檢測待測草種是否為飼用燕麥國審品種的試劑盒。
      [0064] 所述試劑盒含有上述任一所述檢測待測草種是否為飼用燕麥國審品種的引物組。
      [0065] 所述試劑盒的制備方法也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。所述的試劑盒的制備方法包括 將上述任一所述檢測待測草種是否為飼用燕麥國審品種的引物組中的各條引物分別單獨(dú) 包裝的步驟。
      [0066] 上述任一所述檢測待測草種是否為飼用燕麥國審品種的引物組或所述用于檢測 待測草種是否為飼用燕麥國審品種的試劑盒在檢測待測草種是否為或候選為飼用燕麥國 審品種中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
      [0067] 上述任一所述飼用燕麥國審品種為丹麥444、鋒利、哈爾滿、馬匹牙、青引1號、青 引2號、青早1號、蘇聯(lián)、晚燕3號或阿巧。
      [0068] 利用本發(fā)明所提供的方法對待測草種進(jìn)行檢測,實(shí)驗(yàn)證明,本發(fā)明所提供的方法 可W準(zhǔn)確檢測待測樣本是否為飼用燕麥國審品種,從而驗(yàn)證待測樣本是否為飼用燕麥的真 實(shí)性。
      【附圖說明】
      [0069] 圖1為引物對POl擴(kuò)增樣本1-10的變性聚丙締酷胺凝膠電泳結(jié)果。
      [0070] 圖2為引物對P02擴(kuò)增樣本1-10的變性聚丙締酷胺凝膠電泳結(jié)果。
      [0071] 圖3為引物對P03擴(kuò)增樣本1-10的變性聚丙締酷胺凝膠電泳結(jié)果。
      [0072] 圖4為引物對P04擴(kuò)增樣本1-10的變性聚丙締酷胺凝膠電泳結(jié)果。
      [0073]圖5為引物對P05擴(kuò)增樣本1-10的變性聚丙締酷胺凝膠電泳結(jié)果。
      [0074] 圖6為引物對P06擴(kuò)增樣本1-10的變性聚丙締酷胺凝膠電泳結(jié)果。
      【具體實(shí)施方式】
      [0075] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述,給出的實(shí)施例僅為了闡 明本發(fā)明,而不是為了限制本發(fā)明的范圍。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法,如無特殊說明,均為 常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等,如無特殊說明,均可從商業(yè)途徑得到。
      [0076] 下述實(shí)施例中所用的10個飼用燕麥國審品種分別為丹麥444、鋒利、哈爾滿、馬匹 牙、青引1號、青引2號、青早1號、蘇聯(lián)、晚燕3號和阿巧。10個飼用燕麥國審品種的基本 信息如表1所示。 陽077] 表1. 10個飼用燕麥國審品種的基本信息
      [0079] 實(shí)施例1、用于檢測飼用燕麥國審品種的引物的開發(fā)
      [0080] 取丹麥444的種子,用蒸饋水浸泡2地,置于4°C儲存柜7天,然后種植于營養(yǎng)±和 賠石混合(1:1)的±壤。種好的種子托盤置于培養(yǎng)箱中23°C培養(yǎng),14天后采集30株等質(zhì) 量葉片混樣,得到樣本1。
      [0081] 按照上述方法,將丹麥444分別替換為鋒利、哈爾滿、馬匹牙、青引1號、青引2號、 青早1號、蘇
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