国产精品1024永久观看,大尺度欧美暖暖视频在线观看,亚洲宅男精品一区在线观看,欧美日韩一区二区三区视频,2021中文字幕在线观看

  • <option id="fbvk0"></option>
    1. <rt id="fbvk0"><tr id="fbvk0"></tr></rt>
      <center id="fbvk0"><optgroup id="fbvk0"></optgroup></center>
      <center id="fbvk0"></center>

      <li id="fbvk0"><abbr id="fbvk0"><dl id="fbvk0"></dl></abbr></li>

      一種溫和且大量制備礦化絲素蛋白膜的方法

      文檔序號(hào):9574361閱讀:294來源:國(guó)知局
      一種溫和且大量制備礦化絲素蛋白膜的方法
      【技術(shù)領(lǐng)域】
      [0001]本發(fā)明涉及礦化絲素蛋白膜的制備方法,具體涉及一種溫和且大量制備礦化絲素蛋白膜的方法。本方法屬于生物材料領(lǐng)域,所制備的材料可廣泛用于骨組織修復(fù)。
      【背景技術(shù)】
      [0002]絲素蛋白材料由于具有良好的生物相容性、可加工性、力學(xué)性能,在生物材料領(lǐng)域中倍受關(guān)注,尤其是在骨修復(fù)材料中的應(yīng)用非常廣泛。骨修復(fù)材料的重要性能就是植入后能與骨組織實(shí)現(xiàn)骨性結(jié)合,由于骨組織中富含有機(jī)物質(zhì)膠原和無機(jī)物質(zhì)羥基磷灰石。單一絲素材料在體內(nèi)鈣化慢,為了改善該特點(diǎn),絲素蛋白材料的礦化受到大量關(guān)注。
      [0003]申請(qǐng)?zhí)?01010528523.5的專利公開了原位自結(jié)晶法制備有機(jī)絲一無機(jī)磷酸氫鈣復(fù)合材料的方法,主要是通過Na2HP04S液以及CaCl 2溶液反復(fù)浸泡多個(gè)周期,最后原位形成無機(jī)磷酸氫鈣礦化層。申請(qǐng)?zhí)枮?01210283703.0的專利公開了一種促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的柞蠶絲素的生物礦化方法,先制備了絲素蛋白膜,然后通過反復(fù)在Na2HP04S液以及CaCl 2溶液中浸泡的方法,制備得到了礦化的絲素膜。申請(qǐng)?zhí)枮?01210411395的專利公開了一種將三維絲素蛋白支架進(jìn)行礦化的方法,具體是先在氯化鈣乙醇溶液、無水乙醇、磷酸氫二鉀水溶液、去離子水中浸泡;重復(fù)多次后將支架于氯化I丐乙醇溶液中浸泡5~30min后,再用去離子水浸泡3~10min,使三維絲素蛋白支架預(yù)鈣化;最后將預(yù)鈣化部分的三維絲素蛋白支架浸泡于仿生鈣離子緩沖液中,在37°C下恒溫培養(yǎng)4~8天,得到礦化的三維絲素蛋白支架。申請(qǐng)?zhí)枮?01510406788的專利將硬脂胺加入到亞油酸和乙醇混合溶液中,攪拌至完全溶解,加入Ca (N03) 2水溶液靜置分層后,再加入Na 3P04水溶液攪拌;將蠶絲纖維加入,使溶液浸沒蠶絲纖維,高溫加熱;清洗去除未結(jié)合成分,實(shí)現(xiàn)蠶絲纖維的礦化。以上方法所得到的礦化纖維均是通過兩種鹽溶液的浸泡或反應(yīng)得到,而且由浸泡方法所得到的絲素蛋白材料表明僅觀察到少量礦化物質(zhì)。僅僅在申請(qǐng)?zhí)枮?01510406788的專利觀察到有大量的羥基磷灰石納米棒的形成,但其制備條件苛刻,需要在100°C下進(jìn)行。由于蛋白質(zhì)在高溫下易變性,特別是對(duì)于載有活性藥物的絲素蛋白材料,高溫下容易使藥物失活。因此需要發(fā)明一種反應(yīng)條件溫和的方法能制備出礦化量多絲素蛋白礦化膜。

      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0004]為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足,本發(fā)明提供一種溫和且大量制備礦化絲素蛋白膜的方法,所制備的礦化絲素蛋白膜可用于骨修復(fù)材料,如軟骨修復(fù)、骨膜修復(fù)、韌帶修復(fù)等。
      [0005]為實(shí)現(xiàn)這樣的目的,本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
      一種溫和且大量制備礦化絲素蛋白膜的方法,其特征在于,包括如下步驟:
      (1)絲素蛋白膜的制備:質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%- 30%的絲素蛋白水溶液在37 - 70°C下澆鑄成膜;
      (2)絲素蛋白膜的酶溶液預(yù)處理:將絲素蛋白膜浸泡于濃度為l-6U/mL的蛋白酶XIV溶液中1-48小時(shí),置于37°C的搖床中,控制轉(zhuǎn)速為50-200轉(zhuǎn)每分,然后取出用磷酸鹽緩沖溶液清洗(0.01mol/L的PBS),常溫干燥;
      (3)磷酸鹽沉積:經(jīng)蛋白酶預(yù)處理的絲素蛋白膜浸泡于磷酸根離子濃度為
      0.05-0.2mol/L的PBS溶液中,然后置于37°C下靜置孵育,3天后取出用蒸餾水清洗,常溫干燥得到磷酸鹽礦化絲素蛋白膜;
      (4)鈣鹽沉積;將磷酸鹽礦化絲素蛋白膜浸泡于濃度為0.2-0.5mol/L的氯化鈣或硝酸鈣溶液中24小時(shí),得到表面完全礦化的絲素蛋白膜。
      [0006]所述的絲素蛋白膜為基于絲素蛋白的復(fù)合膜,如絲素蛋白與多糖、蛋白、合成高分子、纖維素等中的一種或多種復(fù)合膜。
      [0007]所述絲素蛋白膜為載藥絲素蛋白膜,所載藥物為生長(zhǎng)因子、抗生素、抗腫瘤藥物、治療骨質(zhì)疏松藥物等中的一種或多種。
      [0008]本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)在于:(1)該方法不需要經(jīng)過反復(fù)多次浸泡,制備過程簡(jiǎn)單;(2)該方法制備條件溫和,大部分制備過程都在37°C下進(jìn)行;(3)所得到的礦化面積大且量多,形貌可控。
      【附圖說明】
      [0009]附圖1為實(shí)施例1所得到礦化絲素蛋白膜的掃描電鏡照片;
      附圖2為實(shí)施例2所得到礦化絲素蛋白膜的掃描電鏡照片。
      【具體實(shí)施方式】
      [0010]以下通過具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步描述。以下的實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明,而不限制本發(fā)明的范圍。
      [0011]實(shí)施例1:
      (1)絲素蛋白膜的制備:質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的絲素蛋白水溶液在37°C下澆鑄成膜;
      (2)絲素蛋白膜的酶溶液預(yù)處理:將絲素蛋白膜浸泡于濃度為lU/mL的蛋白酶XIV溶液中24小時(shí),置于37°C的搖床中,控制轉(zhuǎn)速為100轉(zhuǎn)每分,然后取出用磷酸鹽緩沖溶液清洗(0.01mol/L 的 PBS),常溫干燥;
      (3)磷酸鹽沉積:經(jīng)蛋白酶預(yù)處理的絲素蛋白膜浸泡于磷酸根離子濃度為0.1 mol/L的PBS溶液中,然后置于37°C下靜置孵育,3天后取出用蒸餾水清洗,常溫干燥得到磷酸鹽礦化絲素蛋白膜。
      [0012](4)鈣鹽沉積;將磷酸鹽礦化絲素蛋白膜浸泡于濃度為0.2mol/L的氯化鈣或硝酸鈣溶液中24小時(shí),得到礦化絲素蛋白膜。
      [0013]實(shí)施例2:
      (1)絲素蛋白膜的制備:質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%的絲素蛋白水溶液在60°C下澆鑄成膜;
      (2)絲素蛋白膜的酶溶液預(yù)處理:將絲素蛋白膜浸泡于濃度為2U/mL的蛋白酶XIV溶液中24小時(shí),置于37°C的搖床中,控制轉(zhuǎn)速為100轉(zhuǎn)每分,然后取出用磷酸鹽緩沖溶液清洗(0.01 mol/L 的 PBS),常溫干燥;
      (3)磷酸鹽沉積:經(jīng)蛋白酶預(yù)處理的絲素蛋白膜浸泡于磷酸根離子濃度為0.1 mol/L的PBS溶液中,然后置于37°C下靜置孵育,3天后取出用蒸餾水清洗,常溫干燥得到磷酸鹽礦化絲素蛋白膜。
      [0014](4)鈣鹽沉積;將磷酸鹽礦化絲素蛋白膜浸泡于濃度為0.2 mol/L的氯化鈣或硝酸鈣溶液中24小時(shí),得到礦化絲素蛋白膜。
      [0015]實(shí)施例3:
      (1)絲素蛋白膜的制備:質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的絲素蛋白水溶液在37°C下澆鑄成膜;
      (2)絲素蛋白膜的酶溶液預(yù)處理:將絲素蛋白膜浸泡于濃度為6U/mL的蛋白酶XIV溶液中2小時(shí),置于37°C的搖床中,控制轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)每分,然后取出用磷酸鹽緩沖溶液清洗(0.01mol/L 的 PBS),常溫干燥;
      (3)磷酸鹽沉積:經(jīng)蛋白酶預(yù)處理的絲素蛋白膜浸泡于磷酸根離子濃度為0.05 mol/L的PBS溶液中,然后置于37°C下靜置孵育,3天后取出用蒸餾水清洗,常溫干燥得到磷酸鹽礦化絲素蛋白膜。
      [0016](4)鈣鹽沉積;將磷酸鹽礦化絲素蛋白膜浸泡于濃度為0.2mol/L的氯化鈣或硝酸鈣溶液中24小時(shí),得到礦化絲素蛋白膜。
      [0017]實(shí)施例4:
      (1)絲素蛋白復(fù)合膜的制備:質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的絲素蛋白水溶液,按絲素質(zhì)量百分比為10%加入明膠,攪拌均勻后在37°C下澆鑄成膜,;
      (2)絲素蛋白/明膠復(fù)合膜的酶溶液預(yù)處理:將絲素蛋白/明膠復(fù)合膜浸泡于濃度為lU/mL的蛋白酶XIV溶液中24小時(shí),置于37°C的搖床中,控制轉(zhuǎn)速為100轉(zhuǎn)每分,然后取出用磷酸鹽緩沖溶液清洗(0.01mol/L的PBS),常溫干燥;
      (3)磷酸鹽沉積:經(jīng)蛋白酶預(yù)處理的絲素蛋白/明膠復(fù)合膜浸泡于磷酸根離子濃度為
      0.1 mol/L的PBS溶液中,然后置于37°C下靜置孵育,3天后取出用蒸餾水清洗,常溫干燥得到磷酸鹽礦化絲素蛋白膜。
      [0018](4)鈣鹽沉積;將磷酸鹽礦化絲素蛋白/明膠復(fù)合膜浸泡于濃度為0.2mol/L的氯化鈣或硝酸鈣溶液中24小時(shí),得到礦化絲素蛋白膜。
      [0019]實(shí)施例5:
      (1)絲素蛋白復(fù)合膜的制備:質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的絲素蛋白水溶液,按絲素質(zhì)量百分比為5%加入透明質(zhì)酸,在37°C下澆鑄成膜;
      (2)絲素蛋白/透明質(zhì)酸膜的酶溶液預(yù)處理:將絲素蛋白/透明質(zhì)酸膜于浸泡于濃度為3U/mL的蛋白酶XIV溶液中12小時(shí),置于37°C的搖床中,控制轉(zhuǎn)速為50轉(zhuǎn)每分,然后取出用磷酸鹽緩沖溶液清洗(0.01mol/L的PBS),常溫干燥;
      (3)磷酸鹽沉積:經(jīng)蛋白酶預(yù)處理的絲素蛋白/透明質(zhì)酸膜浸泡于磷酸根離子濃度為
      0.2 mol/L的PBS溶液中,然后置于37°C下靜置孵育,3天后取出用蒸餾水清洗,常溫干燥得到磷酸鹽礦化絲素蛋白/透明質(zhì)酸膜。
      [0020](4)鈣鹽沉積;將磷酸鹽礦化絲素蛋白/透明質(zhì)酸膜浸泡于濃度為0.2 mol/L的氯化鈣或硝酸鈣溶液中24小時(shí),得到礦化絲素蛋白/透明質(zhì)酸膜。
      【主權(quán)項(xiàng)】
      1.一種溫和且大量制備礦化絲素蛋白膜的方法,其特征在于,包括如下步驟: (1)絲素蛋白膜的制備:質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%- 30%的絲素蛋白水溶液在37 - 70°C下澆鑄成膜; (2)絲素蛋白膜的酶溶液預(yù)處理:將絲素蛋白膜浸泡于濃度為l-6U/mL的蛋白酶XIV溶液中1-48小時(shí),置于37°C的搖床中,控制轉(zhuǎn)速為50-200轉(zhuǎn)每分,然后取出用磷酸鹽緩沖溶液清洗(0.01mol/L的PBS),常溫干燥; (3)磷酸鹽沉積:經(jīng)蛋白酶預(yù)處理的絲素蛋白膜浸泡于磷酸根離子濃度為0.05-0.2mol/L的PBS溶液中,然后置于37°C下靜置孵育,3天后取出用蒸餾水清洗,常溫干燥得到磷酸鹽礦化絲素蛋白膜; (4)鈣鹽沉積;將磷酸鹽礦化絲素蛋白膜浸泡于濃度為0.2-0.5mol/L的氯化鈣或硝酸鈣溶液中24小時(shí),得到表面完全礦化的絲素蛋白膜。2.如權(quán)利要求1所述一種溫和且大量制備礦化絲素蛋白膜的方法,其特征在于,所述的絲素蛋白膜為基于絲素蛋白的復(fù)合膜,如絲素蛋白與多糖、蛋白、合成高分子、纖維素等中的一種或多種復(fù)合膜。3.如權(quán)利要求1所述一種溫和且大量制備礦化絲素蛋白膜的方法,其特征在于,所述絲素蛋白膜為載藥絲素蛋白膜,所載藥物為生長(zhǎng)因子、抗生素、抗腫瘤藥物、治療骨質(zhì)疏松藥物等中的一種或多種。
      【專利摘要】本發(fā)明提供一種溫和且大量制備礦化絲素蛋白膜的方法,包括絲素蛋白膜的制備、絲素蛋白膜的酶溶液預(yù)處理、磷酸鹽沉積、鈣鹽沉積得到表面完全礦化的絲素蛋白膜。所制備的礦化絲素蛋白膜可用于骨修復(fù)材料,如軟骨修復(fù)、骨膜修復(fù)、韌帶修復(fù)等。該方法不需要經(jīng)過反復(fù)多次浸泡,制備過程簡(jiǎn)單;制備條件溫和,大部分制備過程都在37℃下進(jìn)行;所得到的礦化面積大且量多,形貌可控。
      【IPC分類】C08J5/18, C08L5/08, C08J7/14, A61L27/22, C08L1/02, A61L27/54, C08L101/00, C08L89/00, C08L5/00
      【公開號(hào)】CN105330881
      【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510787482
      【發(fā)明人】何丹農(nóng), 周涓, 金林宇, 陽(yáng)俊, 朱君
      【申請(qǐng)人】上海納米技術(shù)及應(yīng)用國(guó)家工程研究中心有限公司
      【公開日】2016年2月17日
      【申請(qǐng)日】2015年11月17日
      網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
      • 還沒有人留言評(píng)論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊!
      1