EQIDN0:1所示的氨基酸序列相差約1、2、3、4、5、6、7、 8、9、或10個氨基酸的取代、缺失和/或添加。在更優(yōu)選的實施方案中，上述多膚變體與SEQ IDNO: 1所示的氨基酸序列相差約1、2、3、4或5個氨基酸的取代、缺失或添加。
[0043] 在一實施方案中，本發(fā)明的多膚包含SEQIDNO: 1所示的氨基酸序列。在優(yōu)選的 實施方案中，上述多膚由SEQIDNO: 1所示的氨基酸序列組成。在本文中，由SEQIDNO: 1 所示的氨基酸序列組成的多膚被命名為化2。
[0044] 在任選的實施方案中，上述多膚與異源多膚融合，形成融合蛋白。
[0045] 如本文所用的，術語"氨基酸"表示天然存在的和非天然存在的氨基酸W及氨基酸 類似物和模擬物。天然存在的氨基酸包括蛋白生物合成中使用的20種化)-氨基酸W及其 他氨基酸，例如4-居脯氨酸、居賴氨酸、鎖鏈素、異鎖鏈素、高半脫氨酸、瓜氨酸和鳥氨酸。 非天然存在的氨基酸包括例如值)-氨基酸、正亮氨酸、正鄉(xiāng)氨酸、P-氣苯丙氨酸、己基硫氨 酸等，送些是本領域技術人員已知的。氨基酸類似物包括天然和非天然存在的氨基酸的修 飾形式。送種修飾可W包括例如取代氨基酸上的化學基團和部分，或者氨基酸的衍生化。氨 基酸模擬物包括例如表現(xiàn)出功能上類似性質(zhì)的有機結構，所述性質(zhì)例如氨基酸的電荷和電 荷空間特性。例如，模擬精氨酸（Arg或時的有機結構具有位于類似分子空間并且具有與 天然存在的Arg氨基酸的側鏈的e-氨基相同程度的移動性的正電荷部分。模擬物還包括 約束結構W維持氨基酸或氨基酸官能團的最佳空間和電荷相互作用。本領域技術人員可W 確定什么結構構成功能上等效的氨基酸類似物和氨基酸模擬物。
[0046] 在一些實施方案中，SEQIDNO: 1所示的氨基酸序列的變體與SEQIDNO: 1具有 至少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%^上的同源性。在優(yōu)選 的實施方案中，多膚變體與SEQIDNO: 1所示序列具有99%W上的同源性。
[0047] 本文所述的"同源性"被定義為經(jīng)過序列比對和引入空位后，氨基酸或核巧酸序列 變體中相同的殘基的百分比，如果需要，達到最大百分比的同源性。用于比對的方法和計算 機程序在本領域內(nèi)是公知的。
[0048] 本發(fā)明的"多膚"和"蛋白"在本文可互換使用，指氨基酸殘基的聚合物及其變體 和合成的和天然存在的類似物。因此，送些術語適用于天然存在的氨基酸聚合物及其天然 存在的化學衍生物，W及其中一個或多個氨基酸殘基是合成的非天然存在的氨基酸（諸如 相應的天然存在的氨基酸的化學類似物）的氨基酸聚合物。此類衍生物包括例如翻譯后修 飾和降解產(chǎn)物，包括SEQIDNO: 1所示的多膚片段的磯酸化的、糖基化的、氧化的、異構化的 和脫氨基化的變體。
[0049] 在優(yōu)選的實施方案中，F(xiàn)L2多膚變體的序列是在SEQIDN0:1所示的氨基酸序列中 包含一個或幾個保守性氨基酸取代的序列，其中經(jīng)取代后的序列仍保持脂肪酶催化活性。
[0050] 被稱為"保守氨基酸取代"的某些氨基酸取代能夠在蛋白質(zhì)中頻繁出現(xiàn)，但不改變 該蛋白質(zhì)的構象或功能，送是蛋白質(zhì)化學中已建立的法則。
[0051] 本發(fā)明中的保守氨基酸取代包括但不限于用甘氨酸佑)、丙氨酸（A)、異亮氨酸 (I)、鄉(xiāng)氨酸（V)和亮氨酸（L)中的任一個取代送些脂肪族氨基酸的任何另外一個；用絲氨 酸（巧取代蘇氨酸（T)，反之亦然；用天冬氨酸（D)取代谷氨酸巧)，反之亦然；用谷氨醜 胺（曲取代天冬醜胺（腳，反之亦然；用賴氨酸（K)取代精氨酸（時，反之亦然；用苯丙氨酸 (巧、酪氨酸燈）和色氨酸（W)取代送些芳香族氨基酸中的任何另外一個；W及用甲硫氨酸 (M)取代半脫氨酸（C)，反之亦然。其他的取代也可W被視為是保守性的，送取決于特定氨 基酸環(huán)境和它在蛋白Η維結構中的作用。例如，甘氨酸（G)和丙氨酸（A)經(jīng)?？蒞互換，女口 同丙氨酸（Α)和鄉(xiāng)氨酸（V)可W互換。相對疏水的甲硫氨酸（Μ)可W經(jīng)常與亮氨酸和異亮 氨酸互換，W及有時與鄉(xiāng)氨酸互換。賴氨酸化）和精氨酸（R)經(jīng)常在W下位置互換；其中氨 基酸殘基的重要特征是其電荷，W及送兩種氨基酸殘基的不同地并不明顯。在特定的環(huán)境 下，仍有其他一些變化可W視為"保守性"的（參見，例如，BIOCHEMISTRYatΡΡ. 13-15, 2nd ed.LubertStryered.(StanfordUniversity)；Henikoffetal. ,Proc.Nat'1Acad.Sci. USA(1992)89:10915-10919;Leietal.，J.Biol.Chem. (1995)270(20):11882-11886)0
[0052] W下，將氨基酸殘基按可取代的殘基分類舉例，但可取代的氨基酸殘基不限于W 下記載的殘基：
[0053]A組；亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸、鄉(xiāng)氨酸、正鄉(xiāng)氨酸、丙氨酸、2-氨基了酸、蛋氨 酸、ο-甲基絲氨酸、叔了基甘氨酸、叔了基甘氨酸及環(huán)己基丙氨酸；
[0054] Β組；天冬氨酸、谷氨酸、異天冬氨酸、異谷氨酸、2-氨基己二酸及2-氨基辛二酸；
[00巧]C組：天冬醜胺及谷氨醜胺；
[0056]D組；賴氨酸、精氨酸、鳥氨酸、2, 4-二氨基了酸即2, 3-二氨基丙酸；
[0057]Ε組：脯氨酸、3-居基脯氨酸及4-居基脯氨酸；
[005引 F組；絲氨酸、蘇氨酸及高絲氨酸；
[0059] G組；苯丙氨酸及酪氨酸。
[0060] 例如，本申請發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，位于FL2多膚第5、7、8、9、11、18、19、21、21、23、28、30、 35、38、59、62、68、69、70、71、75、80、82、87、88、90、91、92、93、95、96、97、100、105、108、109、 114、115、132、133、137、138、140、143、147、151、152、153、157、158、160、161、164、165、166、 167、168、169、172、173、和/或174位氨基酸發(fā)生保守性取代后的多膚基本上保持FL2的脂 肪酶活性。
[0061] 在其他具體的實施方案中，F(xiàn)L2多膚的C端或Ν端區(qū)域還可W被截短約1、2、3、4、 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或更多個氨基酸，而仍然具有FL2的脂肪酶活性。
[0062] 在另外的實施方案中，還可W在FL2多膚的C端或Ν端區(qū)域添加1、2、3、4、5、6、7、 8、 9、10、11、12、13、14、15、20、25或更多個氨基酸，得到的FL2變體仍具有脂肪酶催化活性。
[0063] 此外，還可W在FL2多膚的C端或Ν端W外的區(qū)域添加或缺失1、2、3、4、5、6、7、8、 9、 10、11、12、13、14、15、20、25或更多個氨基酸，只要改變后的多膚基本上保持FL2的脂肪 酶活性。
[0064] 在某些實施方案中，本發(fā)明的多膚，例如FL2多膚或其變體與異源多膚融合。在一 些實施方案中，F(xiàn)L2融合蛋白基本上保持FL2的脂肪酶活性。在某些實施方案中，異源多膚 與FL2多膚的Ν端連接。在某些實施方案中，異源多膚與FL2多膚的C端連接。在送些實 施方案中，異源多膚可W選自純化標簽（例如可W包括但不限于：GST、MB巧、表位標簽（例 如可W包括但不限于；Myc、FLAG)、祀向序列、信號膚等。
[0065] 在具體實施方案中，融合蛋白包含F(xiàn)L2多膚和標簽，所述標簽與FL2多膚的C-末 端或N-末端結合，通常為膚標簽。所述標簽通常是能夠用于分離和純化所述融合蛋白的膚 或氨基酸序列。因此，所述標簽能夠與一個或多個配體結合，例如，諸如色譜支持體或高親 和力磁珠的親和基質(zhì)的一個或多個配體。所述標簽的實例是能夠W高親和力與媒（Ni2+)柱 或鉆（Co2+)柱結合的組氨酸標簽化is-標簽或HT)，例如包含6個組氨酸殘基化is6或冊） 的標簽。其他用于分離或純化融合蛋白的示例性標簽包括Arg-標簽，F(xiàn)LAG-標簽，Str巧-標 簽等。
[0066] 名核巧酸
[0067] 本申請?zhí)峁┝司幋a上述多膚的多核巧酸，其包含選自W下的序列或由選自W下的 序列組成：
[0068] (a)核巧酸序列，其編碼SEQID NO:1所示的氨基酸序列或在上述序列中包含至少 一個氨基酸取代、缺失或添加的序列；W及
[0069] 化）在嚴格條件下與a)中的核巧酸序列雜交的核巧酸序列。
[0070] 在某些具體的實施方案中，本發(fā)明的多核巧酸編碼FL2多膚及其功能等同變體。 在一實施方案中，本發(fā)明的多核巧酸與編碼FL2及其功能等同變體的多核巧酸具有至少 80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或 100% 同源性。
[0071] 在某些實施方案中，本發(fā)明的多核巧酸包含與SEQIDNO:2所示的核巧酸序列具 有至少80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同源性的 核巧酸序列。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的多核巧酸包含SEQ