一種通過微量藥敏試驗對獸藥或消毒劑的評價方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及獸藥或消毒劑的評價方法，尤其是一種通過微量藥敏試驗對獸藥或消毒劑的評價方法。
【背景技術】
[0002]目前，采購市場獸藥及消毒藥前，養(yǎng)殖場一般憑經(jīng)驗判斷藥物是否有效，這存在一定的不確定性，為養(yǎng)殖場疫病防治帶來一定風險。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種通過微量藥敏試驗對獸藥或消毒劑的評價方法，該方法簡單、精確、快捷。
[0004]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的方法包括如下步驟:
[0005]一、上樣菌液制備:
[0006]將水樣中分離大腸桿菌，挑取單個菌落混于5mL的TSB中，37°C烘箱靜置孵育2h，此時菌液混濁，取100 μ L菌液10倍稀釋8?10個梯度，均勻涂于TSA中，37°C靜置24h后計數(shù)，然后根據(jù)計數(shù)的菌液濃度調(diào)至105CFU/mL，用于上樣菌液；
[0007]二、不同濃度消毒劑制備:
[0008]根據(jù)消毒劑上使用說明的最低使用濃度和最高使用濃度，倍比稀釋實驗用濃度需包含最低和最高使用濃度，分別為6個梯度:0.5倍，1倍，2倍，4倍，8倍，16倍最低濃度，單位為g/L或mL/L ；
[0009]三、上樣孵育:
[0010]①將96微孔板中第1排前6孔分別加入6種不同濃度消毒劑100 μ L，第7孔加入上樣菌液200 μ L作為陽性對照，第8孔加入該消毒劑200 μ L ;
[0011]②第1排前6孔再加入100 μ L上樣菌液，致使每孔最終體系為200 μ L ;
[0012]③第2排作為第1排消毒劑的平行對照，其他消毒劑也同上述方式加樣后，蓋好板蓋；然后置于37°C，靜置孵育，分別于3?6h和12?24h各取4個點觀察MIC及測定0D450值；
[0013]四、結(jié)果判定:
[0014]①MIC即最小抑菌濃度的比較:消毒劑的MIC與其使用說明中推薦濃度或最低使用濃度比較，若低于推薦濃度，則消毒劑效果較好，反之則較差；不同消毒劑MIC比較，MIC越低，但必須先小于推薦濃度，消毒劑效果越好；
[0015]②0D450抑菌趨勢比較:對于MIC值相同消毒劑，通過0D450抑菌趨勢，分析其抑菌作用時間及穩(wěn)定性，判定優(yōu)劣；
[0016]③有效抑菌濃度費用比較:根據(jù)有效抑菌濃度即MIC，比較各消毒劑稀釋同樣水量，所花費的費用；
[0017]最后，結(jié)合MIC和0D450抑菌趨勢及有效抑菌濃度費用綜合評比，選出最優(yōu)消毒劑；
[0018]上述的mL是:毫升；yL是:微升；°(:是:攝氏度出是:小時；CFU/mL是:菌落形成單位/毫升；g/L是:克/升；mL/L是:毫升/升；TSA是:胰蛋白酶大豆瓊脂；TSB是:胰蛋白酶大豆肉湯；MIC是:最小抑菌濃度；0D450是:450納米時光密度值。
[0019]有益效果:
[0020]本發(fā)明通過微量藥敏評價出高效或?qū)τ诒攫B(yǎng)殖場有效藥物，同時對疫情防治也能提供有效獸藥。
[0021]本發(fā)明采用微量藥敏試驗對于養(yǎng)殖場防治疾病所用獸藥或消毒劑進行實驗室評價，為正確使用藥物提供一定參考依據(jù)。
【具體實施方式】
[0022]實施例1:
[0023]這種通過微量藥敏試驗對獸藥或消毒劑的評價方法，包括如下步驟:
[0024]—、上樣菌液制備:
[0025]將水樣中分離大腸桿菌，挑取單個菌落混于5mL的TSB中，37°C烘箱靜置孵育2h，此時菌液混濁，取100 μ L菌液10倍稀釋8個梯度，均勻涂于TSA中，37°C靜置24h后計數(shù)，然后根據(jù)計數(shù)的菌液濃度調(diào)至105CFU/mL，用于上樣菌液；
[0026]二、不同濃度消毒劑制備:
[0027]根據(jù)消毒劑上使用說明的最低使用濃度和最高使用濃度，倍比稀釋實驗用濃度需包含最低和最高使用濃度，分別為6個梯度:0.5倍，1倍，2倍，4倍，8倍，16倍最低濃度，單位為g/L或mL/L ；
[0028]三、上樣孵育:
[0029]①將96微孔板中第1排前6孔分別加入6種不同濃度消毒劑100 μ L，第7孔加入上樣菌液200 μ L作為陽性對照，第8孔加入該消毒劑200 μ L ;
[0030]②第1排前6孔再加入100 μ L上樣菌液，致使每孔最終體系為200 μ L ;
[0031]③第2排作為第1排消毒劑的平行對照，其他消毒劑也同上述方式加樣后，蓋好板蓋；然后置于37°C，靜置孵育，分別于3h和12h各取4個點觀察MIC及測定0D450值；
[0032]四、結(jié)果判定:
[0033]①MIC即最小抑菌濃度的比較:消毒劑的MIC與其使用說明中推薦濃度或最低使用濃度比較，若低于推薦濃度，則消毒劑效果較好，反之則較差；不同消毒劑MIC比較，MIC越低，但必須先小于推薦濃度，消毒劑效果越好；
[0034]②0D450抑菌趨勢比較:對于MIC值相同消毒劑，通過0D450抑菌趨勢，分析其抑菌作用時間及穩(wěn)定性，判定優(yōu)劣；
[0035]③有效抑菌濃度費用比較:根據(jù)有效抑菌濃度即MIC，比較各消毒劑稀釋同樣水量，所花費的費用；
[0036]最后，結(jié)合MIC和0D450抑菌趨勢及有效抑菌濃度費用綜合評比，選出最優(yōu)消毒劑；
[0037]上述的mL是:毫升；μ L是:微升；°(:是:攝氏度；h是:小時；CFU/mL是:菌落形成單位/毫升；g/L是:克/升；mL/L是:毫升/升；TSA是:胰蛋白酶大豆瓊脂；TSB是:胰蛋白酶大豆肉湯；MIC是:最小抑菌濃度；0D450是:450納米時光密度值。
[0038]實施例2:
[0039]通過微量藥敏試驗對獸藥或消毒劑的評價方法，包括如下步驟:
[0040]一、上樣菌液制備:
[0041]將水樣中分離大腸桿菌，挑取單個菌落混于5mL的TSB中，37°C烘箱靜置孵育2h，此時菌液混濁，取100 μ L菌液10倍稀釋10個梯度，均勻涂于TSA中，37°C靜置24h后計數(shù)，然后根據(jù)計數(shù)的菌液濃度調(diào)至105CFU/mL，用于上樣菌液；
[0042]二、不同濃度消毒劑制備:
[0043]根據(jù)消毒劑上使用說明的最低使用濃度和最高使用濃度，倍比稀釋實驗用濃度需包含最低和最高使用濃度，分別為6個梯度:0.5倍，1倍，2倍，4倍，8倍，16倍最低濃度，單位為g/L或mL/L ；
[0044]三、上樣孵育:
[0045]①將96微孔板中第1排前6孔分別加入6種不同濃度消毒劑100 μ L，第7孔加入上樣菌液200 μ L作為陽性對照，第8孔加入該消毒劑200 μ L ;
[0046]②第1排前6孔再加入100 μ L上樣菌液，致使每孔最終體系為200 μ L ;
[0047]③第2排作為第1排消毒劑的平行對照，其他消毒劑也同上述方式加樣后，蓋好板蓋；然后置于37°C，靜置孵育，分別于6h和24h各取4個點觀察MIC及測定0D450值；
[0048]四、結(jié)果判定:
[0049]①MIC即最小抑菌濃度的比較:消毒劑的MIC與其使用說明中推薦濃度或最低使用濃度比較，若低于推薦濃度，則消毒劑效果較好，反之則較差；不同消毒劑MIC比較，MIC越低，但必須先小于推薦濃度，消毒劑效果越好；
[0050]②0D450抑菌趨勢比較:對于MIC值相同消毒劑，通過0D450抑菌趨勢，分析其抑菌作用時間及穩(wěn)定性，判定優(yōu)劣；
[0051]③有效抑菌濃度費用比較:根據(jù)有效抑菌濃度即MIC，比較各消毒劑稀釋同樣水量，所花費的費用；
[0052]最后，結(jié)合MIC和0D450抑菌趨勢及有效抑菌濃度費用綜合評比，選出最優(yōu)消毒劑；
[0053]上述的mL是:毫升；μ L是:微升；°(:是:攝氏度；h是:小時；CFU/mL是:菌落形成單位/毫升；g/L是:克/升；mL/L是:毫升/升；TSA是:胰蛋白酶大豆瓊脂；TSB是:胰蛋白酶大豆肉湯；MIC是:最小抑菌濃度；0D450是:450納米時光密度值。
【主權項】
1.一種通過微量藥敏試驗對獸藥或消毒劑的評價方法，其特征在于:包括如下步驟: 一、上樣菌液制備: 將水樣中分離大腸桿菌，挑取單個菌落混于5mL的TSB中，37°C烘箱靜置孵育2h，此時菌液混濁，取100 μ L菌液10倍稀釋8?10個梯度，均勻涂于TSA中，37°C靜置24h后計數(shù)，然后根據(jù)計數(shù)的菌液濃度調(diào)至105CFU/mL，用于上樣菌液； 二、不同濃度消毒劑制備: 根據(jù)消毒劑上使用說明的最低使用濃度和最高使用濃度，倍比稀釋實驗用濃度需包含最低和最高使用濃度，分別為6個梯度:0.5倍，I倍，2倍，4倍，8倍，16倍最低濃度，單位為g/L 或 ml/I ； 三、上樣孵育: ①將96微孔板中第I排前6孔分別加入6種不同濃度消毒劑100μ L，第7孔加入上樣菌液200 μ L作為陽性對照，第8孔加入該消毒劑200 μ L ; ②第I排前6孔再加入100μ L上樣菌液，致使每孔最終體系為200 μ L ; ③第2排作為第I排消毒劑的平行對照，其他消毒劑也同上述方式加樣后，蓋好板蓋；然后置于37°C，靜置孵育，分別于3?6h和12?24h各取4個點觀察MIC及測定0D450值； 四、結(jié)果判定: ①MIC即最小抑菌濃度的比較:消毒劑的MIC與其使用說明中推薦濃度或最低使用濃度比較，若低于推薦濃度，則消毒劑效果較好，反之則較差；不同消毒劑MIC比較，MIC越低，但必須先小于推薦濃度，消毒劑效果越好； ②0D450抑菌趨勢比較:對于MIC值相同消毒劑，通過0D450抑菌趨勢，分析其抑菌作用時間及穩(wěn)定性，判定優(yōu)劣； ③有效抑菌濃度費用比較:根據(jù)有效抑菌濃度即MIC，比較各消毒劑稀釋同樣水量，所花費的費用； 最后，結(jié)合MIC和0D450抑菌趨勢及有效抑菌濃度費用綜合評比，選出最優(yōu)消毒劑； 上述的mL是:毫升；μ L是:微升；V是:攝氏度；h是:小時；CFU/mL是:菌落形成單位/毫升；g/L是:克/升；mL/L是:毫升/升；TSA是:胰蛋白酶大豆瓊脂；TSB是:胰蛋白酶大豆肉湯；MIC是:最小抑菌濃度；0D450是:450納米時光密度值。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種通過微量藥敏試驗對獸藥或消毒劑的評價方法，一、上樣菌液制備；二、不同濃度消毒劑制備；三、上樣孵育；四、結(jié)果判定：①MIC即最小抑菌濃度的比較②OD450抑菌趨勢比較③有效抑菌濃度費用比較，最后，結(jié)合MIC和OD450抑菌趨勢及有效抑菌濃度費用綜合評比，選出最優(yōu)消毒劑；本發(fā)明通過微量藥敏評價出高效或?qū)τ诒攫B(yǎng)殖場有效藥物，同時對疫情防治也能提供有效獸藥。本發(fā)明采用微量藥敏試驗對于養(yǎng)殖場防治疾病所用獸藥或消毒劑進行實驗室評價，為正確使用藥物提供一定參考依據(jù)。
【IPC分類】C12Q1/18, C12R1/19
【公開號】CN105349616
【申請?zhí)枴緾N201510797094
【發(fā)明人】徐行, 喻正軍
【申請人】廣西揚翔農(nóng)牧有限責任公司
【公開日】2016年2月24日
【申請日】2015年11月19日