一種尿素檢測試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及臨床體外檢測試劑技術領域，特別設及一種尿素檢測試劑盒。
【背景技術】
[0002] 尿素是由碳、氮、氧和氨組成的有機化合物，又稱脈(與尿同音)。其化學公式為CON2H4、（畑2)2〇)或CN2H4O,分子質量60,國際非專利藥品名稱為Carbamide。夕Μ見是白色 晶體或粉末。它是動物蛋白質代謝后的產物，通常用作植物的氮肥。尿素在肝合成，是哺乳 類動物排出的體內含氮代謝物。運代謝過程稱為尿素循環(huán)。
[0003]尿素（UREA)是人體內氨基酸代謝的終產物，構成了血液中絕大部分的非蛋白氮， 在肝臟內合成，經腎臟排泄到尿中，因此其含量取決于蛋白質的攝入、蛋白質分解代謝及腎 功能。尿素可自由地從腎小球濾出，因此是反映腎功能的敏感指標。
[0004] 人血清或血漿中尿素參考范圍為1.7~8.3mmol/L。UREA含量增高可見下列Ξ種 情況：（1)腎性增高見于急性腎炎、慢性腎炎、中毒性腎炎、嚴重腎孟腎炎、腎結核、腎血管 硬化癥、先天性多囊腎和腎腫瘤等引起的腎功能障礙。尤其是對尿毒癥的診斷有特殊價值， 其增高程度與病情嚴重性成正比。（2)腎前性增高見于充血性屯、力衰竭、重度燒傷、休克、消 化道大出血、脫水、嚴重感染、糖尿病酸中毒、腎上腺皮質功能減退、肝腎綜合征等。（3)腎后 性增高見于因尿路梗阻增加腎組織壓力，使腎小球濾過壓降低時，如前列腺肥大、腫瘤壓迫 所致的尿道梗阻或兩側輸尿管結石等。UREA減少：臨床意義較小，偶見于急性肝萎縮、中毒 性肝炎、類脂質腎病等。
[0005]脈酶利用水將尿素轉化為碳酸氨根離子，并釋放出錠根離子。錠根離子與α-酬 戊二酸和NADH在谷氨酸脫氨酶的作用下生成心谷氨酸和NAD+W及水。340nm波長下尿素 的生成速度與NADH的消耗速度成正比。該方法是一種無需預處理樣本，技術和設備要求不 高，而精密度和特異性更高的分析方法。由于該方法不需要昂貴的設備，可W實現(xiàn)自動化， 且可測定大量標本，因此受到臨床廣泛推廣。但是普通的尿素檢測試劑中由于存在酶，會使 該試劑的穩(wěn)定性受到影響，不利于試劑的長期保存，從而造成準確度差及浪費的不良后果。

【發(fā)明內容】

[0006]針對現(xiàn)有技術中存在的問題，本發(fā)明提供了一種尿素檢測試劑盒。該試劑盒與常 規(guī)的試劑盒相比，穩(wěn)定性好，準確度高，線性范圍好，分析靈敏度高，有利于試劑在臨床上的 推廣應用。
[0007]本發(fā)明是通過W下措施實現(xiàn)的： 一種尿素酶檢測試劑盒，其特征在于，它包含試劑R1、試劑R2和校準品，其中試劑R1組 成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 曰-酬戊二酸 8mmol/L 谷氨酸脫氨酶 1000U/L 疊氮化鋼 0. 5% (W/V) 試劑R2組成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 脈酶 2000U/L NADH 0.8mmol/L 4-甲酯苯基棚酸 0. 01%(W/V) 葡甘露聚糖 0. 5-1mg/mL NaCl 5mmol/L 丙二醇 20mg/mL 曲拉通 100 1% (V/V) BSA 0.1-lg/Lo
[000引所述試劑R1和試劑R2在使用時的體積比例為R1 :R2=3 :1。
[0009] 所述的一種尿素檢測試劑盒，其特征在于，所述復合穩(wěn)定劑為4-FPBA、葡甘露聚 糖、化C1、丙二醇、曲拉通100、BSA六種成分。
[0010] 本發(fā)明的試劑盒在具有雙試劑功能的自動生化分析儀上進行，其具體使用方法如 下：
本發(fā)明所使用的校準品為英國朗道公司生產的復合校準品。
[0011] 加入生理鹽水、樣本或校準品4μ1，之后再加入R1試劑300μ1預解育5min后加 入100μ1的試劑R2, 30秒后開始記錄吸光度值A1，反應5min后，讀取吸光度A2,并計算 ΔA/min。
[0012] 本發(fā)明的有益效果： 本發(fā)明提供的尿素脈酶-谷氨酸脫氨酶法檢測試劑盒，通過在試劑R2中加入了由 4-甲酯苯基棚酸（4-FPBA)、葡甘露聚糖、化C1、丙二醇、曲拉通100、BSA組成的復合穩(wěn)定劑， 各組分協(xié)同作用使試劑穩(wěn)定性能優(yōu)異，解決了酶長期保存不穩(wěn)定運一難題，在試驗中它能 增加酶的穩(wěn)定時間，而不會影響酶的活性，從而有效地增強了試劑盒的穩(wěn)定性，卻不會對試 劑的準確度和分析靈敏度產生影響，有利于該試劑在市場中進一步的推廣。
【附圖說明】
[0013] 圖1實施例2準確度驗證實驗檢測結果與對照組檢測結果相關性。
[0014] 圖2實施例3準確度驗證實驗檢測結果與對照組檢測結果相關性。
[0015] 圖3實施例4準確度驗證實驗檢測結果與對照組檢測結果相關性。
【具體實施方式】
[0016] 為了更好的理解本發(fā)明，下面結合具體實施例來進一步詳細說明。
[0017] 實施例1 市場上獲得認可的一種準確度優(yōu)異的尿素試劑盒，它包括試劑R1、試劑R2、校準品。 [001引其中試劑R1組成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 曰-酬戊二酸 8mmol/L 谷氨酸脫氨酶 1000U/L 疊氮化鋼 0. 5% (W/V) 試劑R2組成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 脈酶 2000U/L NADH 0.8mmol/L 本實施例描述的試劑盒，在使用時，其測定方法是采用具有雙試劑功能的東芝120自 動分析儀，操作如下： 加入生理鹽水、樣本或校準品4μ1，之后再加入R1試劑300μ1預解育5min后加入 100μ1的試劑R2, 30秒后開始記錄吸光度值A1，反應5min后，讀取吸光度A2,并計算ΔA/ min。
[0019] 本實施例所使用的校準品為英國朗道公司生產的復合校準品。
[0020] 實施例2 一種尿素檢測試劑盒，它包括試劑R1、試劑R2、校準品。
[0021] 其中試劑R1組成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 曰-酬戊二酸 8mmol/L 谷氨酸脫氨酶 1000U/L 疊氮化鋼 0. 5% (W/V) 試劑R2組成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 脈酶 2000U/L NADH 0.8mmol/L 4-FPBA 0. 01% (W/V) 葡甘露聚糖 0. 5mg/mL NaCl 5mmol/L 丙二醇 20mg/mL 曲拉通 100 1% (V/V) BSA 0.Ig/L 具體測定方法同實施例1。
[002引 實施例3 一種尿素檢測試劑盒，它包括試劑R1、試劑R2、校準品。
[0023] 其中試劑R1組成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 曰-酬戊二酸 8mmol/L 谷氨酸脫氨酶 1000U/L 疊氮化鋼 0. 5% (W/V) 試劑R2組成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 脈酶 2000U/L NADH 0.8mmol/L 4-FPBA 0. 01% (W/V) 葡甘露聚糖 0. 8mg/mL NaCl 5mmol/L 丙二醇 20mg/mL 曲拉通 100 1% (V/V) BSA 0.5g/L 具體測定方法同實施例1。
[0024] 實施例4 一種尿素檢測試劑盒，它包括試劑R1、試劑R2、校準品。
[0025] 其中試劑R1組成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 曰-酬戊二酸 8mmol/L 谷氨酸脫氨酶 1000U/L 疊氮化鋼 0. 5% (W/V) 試劑R2組成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 脈酶 2000U/L NADH 0.8mmol/L 4-FPBA 0. 01% (W/V) 葡甘露聚糖 1mg/mL NaCl 5mmol/L 丙二醇 20mg/mL 曲拉通 100 1% (V/V) BSA Ig/L 具體測定方法同實施例1。
[0026] 對上述實施例1-4中制得的試劑盒分析性能進行實驗驗證。
[0027] 準確度驗證實驗： 將實施例2、3、4的試劑盒作為實驗組，實施例1中市場上獲得認可的準確度優(yōu)異的尿 素試劑盒作為對照組進行對比實驗，對40個樣本進行檢測，檢測的結果如圖1-圖3。
[0028] 通過圖1-圖3的檢測數據可知，實施例2、3、4檢測試劑盒與對照檢測試劑盒的檢 測結果線性相關系數r分別為0. 9994、0. 9992、0. 9995,相關性比較好，表明本發(fā)明的試劑 盒與市場上獲得認可的具有優(yōu)異準確度的尿素檢測試劑盒有高度一致性，證明本發(fā)明試劑 盒添加的其他各種成分對其準確性不會造成影響，試劑盒依然保持較好的準確度。
[0029] 線性相關性驗證實驗： 找到尿素高值樣本為36mmol/l，用生理鹽水進行系列稀釋，配制6個不同濃度的樣 本，依次為 36mmol/X、28. 8mmol/X、21.6mmol/X、14. 4mmol/X、7. 2mmol/X、0mmol/L濃度 的樣本，每個濃度水平各樣本分別測定Ξ次，分別取其平均值。分別利用實施例1、2、3、4的 試劑進行檢測。檢測結果如表1所示。
[0030] 表1實施例1-4線性相關驗證實驗檢測結果
上述檢測結果顯示，實施例1-4檢測結果相關性均大于0. 990,但實施例2、3、4的檢測 結果大于0. 999,與實施例1相比具有更好的線性相關性，運說明本發(fā)明試劑具有更好的線 性相關性。
[0031] 穩(wěn)定性驗證實驗： 在2°C~8°C、無腐蝕性氣體的避光環(huán)境中膽存試劑，檢測四種實施例試劑的穩(wěn)定性。 四種試劑每月選取同一樣本測定其吸光度Ξ次，取平均值，與新鮮的實施例1試劑檢測結 果進行對比，從而確定試劑的穩(wěn)定時間。檢測數據如表2。
[0032] 表2穩(wěn)定性驗證實驗檢測結果
實驗結果顯示，實施例1試劑在2°C~8°C、無腐蝕性氣體的避光環(huán)境中膽存15個月穩(wěn) 定，而實施例2、3、4試劑在2°C~8°C、無腐蝕性氣體的避光環(huán)境中膽存24個月穩(wěn)定，說明 在試劑中通過加入復合穩(wěn)定劑能夠有效的提高尿素檢測試劑盒的穩(wěn)定性。
[0033] 綜合W上分析，本發(fā)明提供的尿素檢測試劑盒，在試劑R2中通過加入復合穩(wěn)定劑 能夠有效的提高試劑盒的穩(wěn)定性，線性范圍較好，試劑的準確度也較好。因此，本發(fā)明提供 的尿素檢測試劑盒有利于在市場中進一步的推廣使用。
【主權項】
1. 一種尿素檢測試劑盒，其特征在于，它包含試劑Rl、R2和校準品，其中試劑R1組成 為： Tris緩沖液 10Ommol/], α-酮戊二酸 8 mmol/L 谷氨酸脫氫酶 1000U/L 疊氮化鈉 0· 5% (W/V) 試劑R2組成為： Tris緩沖液 10Ommol/], 脲酶 2000U/L NADH 0.8mmol/L 4-甲酰苯基硼酸 0. 01%(W/V) 葡甘露聚糖 0. 5-1 mg/mL NaCl 5mmol/L 丙二醇 20mg/mL 曲拉通100 1% (V/V) BSA 0·1-lg/L〇2. 根據權利要求1所述的一種尿素檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑R1和試劑R2在 使用時的體積比例為R1 :R2=3 :1。3.根據權利要求1所述的一種尿素檢測試劑盒，其特征在于，所述復合穩(wěn)定劑為 4-FPBA、葡甘露聚糖、NaCl、丙二醇、曲拉通100、BSA六種成分。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種尿素檢測試劑盒，屬于臨床體外檢測試劑技術領域。本發(fā)明試劑盒包括試劑R1、試劑R2、校準品。通過在試劑R2中加入由4-FPBA、葡甘露聚糖、NaCl、丙二醇、曲拉通100、BSA組成的復合穩(wěn)定劑，有效的提高了試劑盒的穩(wěn)定性，其線性范圍也較好，試劑的準確度高，有利于在市場中進一步的推廣使用。
【IPC分類】C12Q1/32, C12Q1/34, C12Q1/58
【公開號】CN105368917
【申請?zhí)枴緾N201510981849
【發(fā)明人】董雯, 甘宜梧, 李靜
【申請人】山東博科生物產業(yè)有限公司
【公開日】2016年3月2日
【申請日】2015年12月24日